日本血吸虫促凋亡基因SjBAD的初步研究

目的了解日本血吸虫促凋亡基因Sj BAD的生物学、免疫学和转录表达特征,评估Sj BAD重组蛋白作为日本血吸虫病疫苗候选分子的潜力。方法根据Sj BAD的参考序列设计引物,应用PCR技术扩增Sj BAD基因,构建重组表达质粒p ET-28a(+)-Sj BAD。采用实时定量PCR检测Sj BAD基因在日本血吸虫不同发育期及42 d雌、雄虫体内的转录水平;应用Western blotting和间接ELISA法分析Sj BAD重组蛋白的抗原性和免疫原性。用重组抗原Sj BAD免疫BALB/c小鼠,通过计算减虫率及肝脏减卵率,评估重组抗原作为血吸虫病候选疫苗分子的潜力。结果成功克隆了日本血吸虫Sj BAD基因,构建了重组表达质粒p ET-28a(+)-Sj BAD,并在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白分子量约为22 k Da。Western blotting表明Sj BAD具有较好的抗原性和免疫原性,间接ELISA法检测表明重组蛋白免疫小鼠产生了高水平的特异性抗体Ig G。实时定量PCR检测发现Sj BAD基因在日本血吸虫的各个发育阶段均有转录,以14 d表达量最高,且在雄虫体内的表达量高于雌虫。两次动物免疫试验表明,重组蛋白Sj BAD在BALB/c小鼠体内诱导了30.82%和27.87%的减虫率,及42.52%和45.84%的肝脏虫卵减少率,均显著高于PBS对照组(P均0.05)。结论成功克隆、表达了日本血吸虫促凋亡相关基因Sj BAD,该基因在日本血吸虫不同发育期虫体内均有表达。纯化的重组Sj BAD蛋白在小鼠体内能诱导产生部分抗血吸虫感染的免疫保护效果。     

肠道病毒71型重组VP1蛋白的原核表达及初步鉴定

目的利用大肠杆菌原核表达系统表达并纯化肠道病毒71型(EV71)VP1蛋白,并对重组蛋白功能进行初步鉴定。方法 PCR扩增EV71VP1全长基因,在测序正确的基础上,将其插入表达载体pET28a(+),构建表达质粒pET28a(+)/VP1,转化表达菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,利用Ni 2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,经ELISA和Western Blot,验证EV71VP1的抗原性。结果成功构建pET28a(+)/VP1重组质粒,经大肠杆菌表达、纯化获得分子量约为43kDa的融合蛋白,经ELISA和Western Blot,结果显示该蛋白有良好的抗原性。结论实现了肠道病毒7l型VP1蛋白的原核高效表达,为肠道病毒71型诊断试剂和疫苗的研究奠定基础。     

鸡干扰素-γ抗球虫作用研究进展

干扰素-γ（IFN-γ）是一种重要的细胞因子,主要由T细胞、NK细胞产生,具有广谱抗病毒、抗肿瘤和双向免疫调节作用。重组鸡干扰素-γ（rChIFN-γ）已被证明与鸡球虫病的免疫有关。本文就鸡干扰素-γ（ChIFN-γ）的生物学特性及其抗球虫作用的研究进展作一综述。     

吉林市弱智儿童弓形虫感染及弓形虫病患儿血清免疫机能状况调查

本文采用IHA对125例弱智儿童、68例正常人及19对弱智儿童母子弓形虫感染情况进行了调查,同时检测了26例感染弓形虫的弱智儿童,38例未感染弓形虫的弱智儿童和28例正常儿童血清IgG、IgA、IgM和补体C_3含量。结果表明,弱智儿童弓形虫感染率20.8％,明显高于对照组(4.41％)(P<0.01),提示弓形虫感染与智力低下密切相关.弓形虫血清抗体阳性弱智儿童与未感染弓形虫的弱智儿童和正常儿童血清IgG、IgA和IgM含量无差异(P>0.05),说明血清抗体与弓形虫感染关系不大;弓形虫抗体阳性弱智儿童血清补体C_3含量0.93±0.35g/l,明显低于正常儿童1.68±0.64g/l(p<0.001),提示补体G_3含量降低与弓形虫感染密切相关.     

人芽囊原虫体外培养研究进展

人芽囊原虫（Blastocystis hominis）呈世界性分布,是一种常见的人和动物肠道内寄生原虫,与多种胃肠道疾病（如腹痛、腹泻、肠黏膜损伤）密切相关。体外培养人芽囊原虫对于临床诊断人芽囊原虫感染、建立人芽囊原虫动物模型、进行基因型和致病机制等研究具有重要意义;选择高效经济的培养基为人芽囊原虫的生活史、形态分类、感染免疫等后续研究奠定基础。培养基的状态、种类、血清浓度和培养条件等是影响人芽囊原虫体外培养的重要因素。本综述总结了人芽囊原虫体外培养的研究进展及不同物理状态下适合人芽囊原虫快速生长繁殖的培养条件,阐述了不同培养基之间的差异及影响人芽囊原虫体外培养的因素,旨在为临床和科研工作者选择合适的培养基及培养条件提供参考。     

日本血吸虫TOM34基因的克隆和表达分析

目的 克隆、表达日本血吸虫线粒体外膜转运酶34基因(SjTOM34),并对其生物特性进行初步研究。方法 应用RT-PCR方法从42 d日本血吸虫成虫cDNA中扩增SjTOM34基因,并进行生物信息学分析。应用实时定量RT-PCR方法分析了SjTOM34基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体中的表达状况。构建了SjTOM34基因重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达,Western blotting分析了重组抗原的免疫原性及该蛋白在不同发育阶段虫体中的表达情况,利用免疫组化方法观察了该蛋白在虫体内的分布情况。结果 获得了SjTOM34的基因序列,其开放阅读框(ORF)为1 083 bp。该基因在所检测的不同发育阶段童虫和成虫中均有表达,其中在35 d虫体中的表达量略高于其他时期的虫体。成功构建了重组的原核表达质粒并且在大肠杆菌中获得表达,重组蛋白在上清和沉淀中都有存在,并且具有较好的免疫原性,在所检测的各时期虫体中均可检测到该蛋白的存在,并且主要分布在虫体的实质组织中。结论 获得了日本血吸虫SjTOM34基因,初步明确了该基因在日本血吸虫童虫和成虫中的表达情况,及在成虫中的分布。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7志贺毒素I型A亚基的表达与鉴定

目的表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7志贺毒素1型A亚基(Stx1A)重组蛋白并鉴定。方法从EHEC O157∶H7基因组中扩增编码Stx1A的基因,经测序无误后,克隆入表达载体pET-22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),经诱导、纯化获得目的蛋白Stx1A,并对纯化的目的蛋白进行质谱鉴定。重组的Stx1A蛋白免疫BALB/c小鼠,观察小鼠抗血清与EHEC O157∶H7毒株特异性反应。结果 PCR扩增的Stx1A基因为945 bp,成功构建重组质粒pET22b(+)-Stx1a,重组蛋白在原核细胞中获得高效表达,通过AKTATM-His亲和层析柱获得纯化。质谱分析表明目的蛋白为Stx1A。Western blot显示鼠抗Stx1A血清可与EHEC O157∶H7毒株产生的天然毒素蛋白结合。结论成功克隆了EHEC O157∶H7 Stx1A基因,并获得重组表达,为后续研究奠定基础。     

全球人群人芽囊原虫感染情况及基因亚型研究进展

人芽囊原虫（Blastocystis hominis）是一种寄生于人和动物肠道内且与多种胃肠道疾病（如腹痛、腹泻）密切相关的寄生虫。人芽囊原虫呈世界性分布,不同国家间甚至同一国家不同地区间流行率和优势基因亚型差异显著。本文对全球人群人芽囊原虫感染率、基因亚型及其地理分布进行综述,旨在为了解人芽囊原虫在全球流行情况和防控人芽囊原虫感染提供参考。     

人芽囊原虫感染动物模型构建研究进展

人芽囊原虫是一种常见的寄生于人和动物肠道内的寄生原虫,其致病性尚有争议。构建动物模型对于研究人芽囊原虫致病性、致病机制以及药物筛选等具有重要意义。实验动物、感染方式和虫体选择以及宿主免疫状态是影响人芽囊原虫感染动物模型构建的重要因素。本文综述了近年来人芽囊原虫感染动物模型的相关研究进展,阐述了构建人芽囊原虫感染动物模型的影响因素及其应用,旨在为动物感染模型选择提供借鉴。     

毒害艾美耳球虫江苏分离株抗原基因NA4的克隆与序列分析

采用直肠接种毒害艾美耳球虫（Eimeria necatrix）裂殖子方法对毒害艾美耳球虫卵囊进行纯化,用柔嫩艾美耳球虫子孢子表面抗原TA4基因特异性引物,以纯化E.necatrix孢子化卵囊总RNA为模板,RT-PCR方法克隆出了一段新基因序列。该基因全长747bp,共编码248个氨基酸,与国外Brothers等（1991）从E.necatrix孢子化卵囊表面得到的NA4基因同源性达99.7%,与柔嫩艾美耳球虫TA4（No.AJ586531.2）基因同源性达到91.4%,拥有与柔嫩艾美耳球虫TA4抗原基因相同序列的一段信号肽。从结果可得出,新克隆的基因为E.necatrix NA4基因。此基因已登录GenBank,登录号为EU523548。