牙周炎基因疫苗佐剂IL⁃15对SD大鼠肠系膜淋巴结B细胞增殖的影响

目的：观察牙周炎疫苗佐剂白细胞介素?15（interleukin?15,IL?15）对SD大鼠肠系膜淋巴结B淋巴细胞增殖的影响,初步探讨用IL?15提高基因疫苗免疫效应的可能性。方法：将牙周炎基因疫苗pVAX1?HA2?FimA/IL?15（A组）、pVAX1?HA2?FimA（B组）和生理盐水（C组）鼻滴免疫SD大鼠,采用磁珠分选法分离纯化肠系膜淋巴结B细胞,CCK?8法检测B细胞的数量,RT?qPCR法检测CKs2基因相对表达量变化,ELISA法检测培养液中特异性IgA的表达水平。结果：A组B细胞增殖水平高于B组和C组（P < 0.05）;A组B淋巴细胞CKs2 mRNA相对表达量稍高于B组,但差异无统计学意义（P＞0.05）。A组B淋巴细胞分泌的特异性IgA水平均高于B、C组（P＜0.05）。结论：IL?15是一种有效的基因疫苗佐剂,使用本课题组构建的牙周炎基因疫苗能够促进B细胞增殖,进而提高特异性IgA抗体的表达水平。     

SD大鼠经鼻黏膜免疫牙周炎基因疫苗pVAX1-HA2-FimA-(IL-15)后Tfh细胞的变化

目的:观察SD大鼠经鼻黏膜免疫牙周炎基因疫苗后Tfh细胞的变化,探讨Tfh细胞在黏膜免疫应答产生特异性sIgA抗体中的作用。方法:采用鼻滴方式免疫SD大鼠,A组为生理盐水组,B组为空载体(pVAX1)组,C组为牙周炎疫苗pVAX1-HA2-FimA-(IL-15)组,ELISA法检测大鼠唾液中特异性sIgA抗体的水平;流式细胞技术检测鼻黏膜Tfh细胞及CD4+CXCR5+ICOS+Tfh细胞的表达。结果:第3~7周C组大鼠唾液中特异性sIgA抗体表达水平高于A组和B组(P<0.05);C组FITC(CD4)和Aleax flour 594(CXCR5)融合后呈黄色荧光,A组和B组的免疫荧光双染结果中未见双阳性荧光信号;C组大鼠鼻黏膜细胞中CD4+CXCR5+Tfh及CD4+CXCR5+ICOS+Tfh细胞的表达均高于A组和B组(P<0.05);且发现大鼠唾液中特异性sIgA与大鼠鼻黏膜CD4+CXCR5+Tfh及CD4+CXCR5+ICOS+Tfh细胞均呈正相关关系。结论:牙周炎基因疫苗pVAX1-HA2-FimA-(IL-15)经鼻黏膜免疫大鼠后可激活Tfh细胞在鼻黏膜的表达,表达水平与特异性sIgA抗体水平呈正相关关系,说明Tfh细胞可能在促进机体产生特异性sIgA抗体的过程中起到重要作用。     

大肠杆菌中质粒DNA大量提取条件的优化

应用碱裂解法原理大量提取大肠杆菌中的质粒DNA,对质粒提取试剂盒的相关步骤进行了优化。结果显示按优化的步骤该方法提取的质粒DNA浓度高、质量好,能够符合后续酶切等常规实验的要求。     

牙周炎基因疫苗pVAX1⁃HA2⁃FimA、pVAX1⁃HA2⁃FimA/IL⁃15对大鼠实验性牙周炎保护作用研究

目的：观察牙周炎基因疫苗pVAX1?HA2?FimA、pVAX1?HA2?FimA/IL?15对SD大鼠实验性牙周炎的保护作用。方法：54只雄性SD大鼠随机分为9组,对照组：生理盐水组（A组）、空载质粒pVAX1组（B组）、牙周病组（C组）;实验组：50 μg、100 μg、150 μg pVAX1?HA2?FimA 组（D、E、F组）和50 μg、100 μg、150 μg pVAX1?HA2?FimA/IL?15组（G、H、I组）。 鼻滴免疫SD大鼠后建立实验性牙周炎模型,采用RT?qPCR法检测牙龈中炎症因子肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor?α,TNF?α）、基质金属蛋白酶8（matrix metalloproteinase?8,MMP?8）mRNA相对表达量;立体显微镜观察并测量牙槽骨吸收量。结果：①各实验组牙龈组织中TNF?α、MMP?8 mRNA低于牙周病组,且差异有统计学意义（P＜0.05）;②相同剂量的pVAX1?HA2?FimA/IL?15组较pVAX1?HA2?FimA组大鼠牙槽骨吸收量少,且差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：牙周炎基因疫苗pVAX1?HA2?FimA和 pVAX1?HA2?FimA/IL?15对SD大鼠实验性牙周炎具有保护作用。     

一种SD大鼠实验性牙周炎模型的建立方法

目的 通过优化方法建立大鼠牙周炎动物模型,观察牙周炎动物模型牙槽骨吸收程度。方法 丝线结扎牙周炎组大鼠上颌第二磨牙。建模期间观察实验大鼠牙周情况,影像学检测大鼠牙槽骨吸收情况,体视显微镜测量牙槽骨吸收量。RT-qPCR法检测牙龈组织中TNF-α、MMP-8 mRNA的相对表达水平。结果 牙周病组大鼠上颌第二磨牙牙周组织炎症逐渐加重,牙槽骨吸收量增大,松动度逐渐加大,牙周病组TNF-α、MMP-8 mRNA相对表达量与对照组比较增高。结论 通过优化造模方法,成功建立SD大鼠牙周炎动物模型。