结核杆菌RV1737多肽免疫特性和诊断价值研究

研究结核杆菌RV1737多肽免疫特性及在结核病中诊断鉴别能力,多肽抗原模拟干扰素γ(IFN-γ)释放实验(IGRA),刺激后潜伏结核感染(LTBI)组IFN-γ高于结核(TB)组(P＜0.05),A+B+C联合组的灵敏度高于多肽A、B、C与融合D(P＜0.05).同时多肽建立间接ELISA法检测血清结核IgG抗体,TB组有更好的反应性,多肽A的IgG抗体吸光度高于多肽B、C(P＜0.05),组间绘制ROC,多肽A面积最大,联合A+B+C多肽,曲线面积升高且与单独面积比较差异有统计学意义(P＜0.05).RV1737多肽有成为潜伏结核诊断候选抗原潜力.多肽抗原建立ELISA检测外周血结核IgG抗体可能成为血清学实验结核病筛选新抗原且多肽A效果较突出.     

目标血糖管理对脓毒症患者 CD69及 HLA －DR 表达的影响及其临床意义

目的：探讨早期目标血糖管理对脓毒症患者T淋巴细胞CD69、CD 14＋单核细胞（ HLA－DR）表达的影响及其临床意义。方法90例脓毒症患者按随机数字表法分为三组：血糖控制A组（4．4～6．1 mmol／L）30例、血糖控制B组（6．2～8．3 mmol／L）30例、血糖控制C 组（8．4～10．0 mmol／L）30例。入住ICU时就给予早期目标血糖管理,分别在入院时（0 d）及治疗后第1、3、7天采集静脉血,应用流式细胞仪检测T淋巴细胞CD69、CD14＋单核细胞HLA－DR的表达水平。相同时间点观察APACHEⅡ评分,并计算28 d病死率、MODS发生率及低血糖发生率。结果 A组第1、3、7天CD69和HLA－DR表达水平均较入院时明显升高,差异有统计学意义（ P均＜0.05）;B组第1、7天CD69表达水平较入院时明显升高,差异有统计学意义（P均＜0．05）,第3、7天HLA－DR表达水平与入院时比较差异有统计学意义（ P＜0．05）;C组CD69和HLA－DR表达呈先降低后升高的趋势,第3、7天CD69表达水平与入院时比较差异均有统计学意义（ P均＜0.05）,第1、7天HLA－DR表达水平与入院时比较差异有统计学意义（P＜0．05）。三组APACHEⅡ评分第1、3、7天较入院时均降低,差异有统计学意义（ P＜0．05）;第7天A组与B、C组比较显著降低,差异有统计学意义（P＜0．05）。三组28 d死亡率、MODS发生率及低血糖发生率均无统计学意义（ P均＞0．05）。结论目标血糖管理水平（4．4～6．1 mmol／L）能够促进CD69、HLA－DR的表达,有利于免疫稳态的恢复,可能对终止脓毒症患者免疫紊乱和免疫麻痹的恶性进程有利。     

新型结核病疫苗菌株(B/R菌株)对T细胞免疫记忆的建立及保护效应的研究

目的 探讨研究新型结核病疫苗菌株(B/R菌株)对T细胞免疫记忆的建立及保护效应的影响。方法 C57BL/6小鼠分别皮下接种PBS、BCG、H37Ra和B/R菌株,各组小鼠于免疫后不同时间点,利用ELISA方法检测血清中IL-2、IFN-γ的水平;用流式细胞技术检测小鼠脾脏中央型记忆性淋巴细胞(T_CM)及效应型记忆性淋巴细胞(T_EM)的数量;检测各组小鼠脾脏和肺脏组织中的菌落数(CFU),以及根据肺脏病理损伤程度评价B/R菌株的保护效果。结果 免疫小鼠8周,B/R菌株组小鼠血清中,产生了高于BCG组的IL-2(q=4.709,P<0.05)和IFN-γ(q=5.477,P<0.05),与H37Ra组无统计学差异。免疫小鼠12周,B/R菌株组小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平与BCG组和H37Ra组均无统计学差异。免疫小鼠16周,B/R菌株组小鼠血清IFN-γ水平高于BCG组(q=4.243,P<0.05),与H37Ra组无统计学差异;B/R菌株组小鼠血清IL-2水平与BCG组和H37Ra组均无统计学差异。免疫小鼠8、12、16周,与PBS组相比较,除12周时B/R菌株组的CD8+T_CM水平有所降低外,B/R菌株组均可诱导产生较高水平的CD4+T_CM(F=5.178,P<0.05)、CD4+T_EM(F=72.04,P<0.05)以及CD8+T_CM(F=16.86,P<0.05)、CD8+T_EM(F=27.93,P<0.05)。随免疫时间延长,即16周时,与BCG组相比较,B/R菌株组可维持更高水平的CD4+ T_EM(q=31.55,P<0.05)和CD8+ T_EM(q=16.08,P<0.05),T_CM无统计学差异。BCG、H37Ra和B/R菌株免疫小鼠后,各组小鼠脏器病理损伤程度及菌落数,无统计学差异。结论 B/R菌株免疫小鼠后,可建立较高水平的T细胞免疫记忆,以T_EM为主,其免疫记忆水平可维持近4月,并且与BCG免疫保护效果相当。     

结核杆菌Pup-蛋白酶体系统与耐药结核杆菌耐药性的相关性研究

目的:检测不同耐药的结核杆菌临床分离株原核类泛素蛋白-蛋白酶体系统(以下简称:Pup-蛋白酶体系统)相关的Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达水平,探讨研究结核杆菌Pup-蛋白酶体系统与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株耐药性的相关性。方法:以培养对数生长期的新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株为研究对象,分别提取结核杆菌临床分离的药物敏感菌株、单纯耐异烟肼的结核杆菌临床分离株(INH-MTB)、单纯耐利福平的结核杆菌临床分离株(RFP-MTB)、单纯耐链霉素的结核杆菌临床分离株(SM-MTB)、单纯耐乙胺丁醇的结核杆菌临床分离株(EB-MTB)、耐多药结核杆菌临床分离株(MDR)等各组菌株的总RNA,经纯度鉴定后,利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,检测各组结核杆菌菌株的Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达水平,分析各组耐药结核杆菌临床分离株Pup-蛋白酶体系统相关的Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株耐药性的相关性。结果:与药物敏感菌株相比,Pup、Mpa基因在单一耐药菌株和耐多药菌株中表达有不同程度的下调,Dop、PafA基因在单一耐药菌株和耐多药菌株中表达有不同程度的上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与MDR相比,Pup、Dop、Mpa基因在单一耐药菌株中表达有不同程度的上调,PafA基因在单一耐药菌株中表达有不同程度的下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在结核杆菌临床分离的药物敏感菌株、INH-MTB组、RFP-MTB组、SM-MTB组、EB-MTB组和MDR组中,结核杆菌Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达差异,与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株耐药性有相关性。     

PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌持留性的调控机制研究

目的 本研究通过诱导结核分枝杆菌在低氧环境中进入持留状态,来比较分析不同时间不同低氧环境下结核分枝杆菌中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异,探讨研究PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌持留性的调控机制。方法 首先对结核分枝杆菌国际标准无毒株(H37Ra)和结核分枝杆菌国际标准强毒株(H37Rv)在不同低氧环境下进行培养,提取每个样本菌株的总RNA,并进行完整性鉴定;运用SYBR Green I实时荧光定量PCR检测每个样本菌株中PhoP基因和PhoR基因的表达水平;比较分析不同时间不同低氧环境下的结核分枝杆菌菌株PhoP基因和PhoR基因的表达水平差异。结果 在不同时间点对低氧环境的结核分枝杆菌PhoP基因和PhoR基因的表达水平进行检测,结果显示:与第10 d相比,培养至第15 d时H37Rv菌株和H37Ra菌株中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平均显著上调,差异有统计学意义(P＜0.05);并且培养至第25 d时,H37Rv菌株中的PhoP基因和PhoR基因的表达水平比H37Ra菌株表达均上调2.34倍,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 在不同时间点相同毒力的结核分枝杆菌的PhoPR双组分信号转导系统中PhoP基因和PhoR基因在不同低氧环境下的表达存在差异,而且在相同时间点不同毒力结核分枝杆菌的PhoPR双组分信号转导系统中PhoP基因和PhoR基因在不同低氧环境下的表达也存在差异,表明PhoPR双组分信号转导系统对结核分枝杆菌的持留性具有调控作用。     

结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体系统研究进展

蛋白酶体途径是真核细胞中除溶酶体外降解蛋白质的又一主要途径,参与细胞的多项生理功能调控。2008年在结核分枝杆菌中发现了原核类泛素蛋白(prokaryotic ubiquitin-like protein,Pup)。Pup在辅助因子Dop、PafA、Mpa的作用下,可以泛素化标记多种蛋白,再将其导入蛋白酶体降解。Pup-蛋白酶体系统的靶蛋白FabD、PanB、Ino1、Icl、SodA、MtrA等涉及物质代谢、信号传导通路、毒性因子、致病性、细菌在宿主体内的持留等多个方面。蛋白酶体抑制剂使蛋白酶体的功能受到限制,Pup标记底物的累积导致的基因表达的间接改变,对结核分枝杆菌抗外界压力和致病性的能力产生影响。Pup-蛋白酶体系统的发现揭示了原核生物中一个崭新的蛋白质降解机制,有望成为抗结核病药物治疗的新靶点。本文对结核分枝杆菌Pup-蛋白酶体的研究进展作一综述。     

PhoPR双组份系统在结核分枝杆菌致病机制中的研究进展

双组份信号转导系统(Two-component signal transduction system, TCS)广泛存在于原核生物细胞内,对细胞生长、分化、代谢、毒力、持留性、致病性等方面的调控发挥着重要作用。PhoPR TCS作为双组份系统中最基本、最重要的感应外界环境变化,并作出相应反应的调控系统,能够调控结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis, MTB)更好的适应宿主微环境变化。因此PhoPR TCS作为MTB适应环境变化的重要调控系统已愈来愈受关注,关于PhoPR TCS在MTB的致病机制调控方面的研究正在成为新的热点。     

结核分枝杆菌H37Rv菌株Hsp16.3基因缺失突变株的构建与鉴定

目的 构建及鉴定结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株Hsp16.3基因缺失突变株。方法 体外培养结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株,并提取基因组DNA,扩增Hsp16.3基因两侧序列,分别插入到pKO质粒载体预定位点中,构建Hsp16.3基因置换型打靶载体,电转入结核分枝杆菌H37Rv菌株内,并与其基因组中的Hsp16.3基因同源交换,筛选出Hsp16.3基因缺失突变株。结果 通过卡那霉素筛选和蔗糖反筛选及PCR鉴定,并在含有潮霉素培养基上不能生长的菌株为Hsp16.3基因缺失突变株。结论 成功构建出结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株Hsp16.3基因缺失突变株。     

人脑组织和脑脊液中含有脑钠素(摘要)

脑钠素(Brain Natriuretic Peptide,BNP)是最近从猪脑内分离得到的一种生物活性多肽,它由26个氨基酸组成。BNP与心钠素(Atrial Natriuretic Polypeptide,ANP)在结构上有9个氨基酸不同,它们可能是来自不同的基因的表达产物,但都具有利钠、利尿和降血压作用。本文摘要报道应用高度灵敏和特异的BNP放免测定方法证明人脑组织和脑脊液(CSF)中存在BNP,并用高压液相层析法研究其分子形式的结果。 1、取不同量CSF进行RIA,结果表明CSF量越大,BNP—IR含量越高,且与BNP标准曲线平行。1份脑室液的BNP—IR含量为20.0Pg/ml,腰穿CSF的含量为14.4±1.0Pg/ml,脑室液含量高于腰穿CSF含量。     

补体C3a对人中巨噬细胞凋亡影响的实验研究

目的 探讨补体C3a对人巨噬细胞凋亡的影响.方法 采用流式细胞技术,检测人巨噬细胞被补体c3a作用后,其凋亡率随补体C3a的作用浓度及时问的变化.结果 随着补体C3a作用浓度的增加,人巨噬细胞凋亡率下降;随着补体C3a作用浓度增加和作用时间延长,其对人巨噬细胞凋亡的抑制作用有所增强.结论 补体C3a依浓度及时间依赖,抑制人巨噬细胞的凋亡.