高毒力肺炎克雷伯菌的研究进展

摘要：肺炎克雷伯菌是一种重要的条件致病菌，常引起社区和医院感染。根据毒力的不同，分为高毒力肺炎克雷伯菌和普 通肺炎克雷伯菌。高毒力肺炎克雷伯菌是一种毒力更强的肺炎克雷伯菌进化型，影响其毒力的因素主要包括：荚膜多糖、黏液 表型调控基因、铁载体和可移动的遗传元件等。高毒力肺炎克雷伯菌主要在亚太地区流行，近年来其耐药株分离率明显上升。 本文将对高毒力肺炎克雷伯菌的流行情况、高毒力相关因素、耐药情况及其检测方法作一介绍。     

应用MALDI-TOF MS快速鉴定blaKPC-2基因型肺炎克雷伯菌

 目的 探讨基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对携带bla_KPC-2基因型肺炎克雷伯菌的快速鉴定能力。方法 收集2018年9月-2020年11月蚌埠医学院第一附属医院临床住院患者分离的肺炎克雷伯菌,采用纸片扩散法进行药敏试验。应用聚合酶链反应(PCR)方法筛选携带bla_KPC-2基因型肺炎克雷伯菌。MALDI-TOF MS鉴定菌株并收集携带bla_KPC-2基因型和碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌(CSKP)的质谱图,各自选取其中70株菌株图谱,建立携带bla_KPC-2基因型和CSKP的超级图库(Super-Spectra)。采用超级图库鉴定除建库以外的肺炎克雷伯菌,根据耐药表型和PCR结果,判断鉴定结果是否准确。结果 共收集295株肺炎克雷伯菌,经耐药表型筛选耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)143株和CSKP 152株。CRKP中鉴定出140株携带碳青霉烯酶基因(134株检出bla_KPC-2基因,3株检出bla_KPC-18基因,2株检出bla_NDM-1基因,1株检出bla_IMP基因),3株不携带碳青霉烯酶基因;其中2株同时检出bla_KPC-2基因和bla_NDM-1基因。根据建库要求,建立携带bla_KPC-2基因型和CSKP的超级图库(Super-Spectra);设置error值<0.5,二者重合率达80%;对比图发现,4 154.4、8 310.7、10 880.8、3 579、10 079.3 m/z五个峰可作为区分携带bla_KPC-2基因肺炎克雷伯菌和CSKP的特征峰。选取除建库以外的155株肺炎克雷伯菌进行验证,准确率为92.90%(144/155);其中携带bla_KPC-2基因肺炎克雷伯菌准确率为94.52%(69/73),CSKP准确率为91.46%(75/82)。结论 通过MALDI-TOF MS建立Super-Spectra,可快速预测bla_KPC-2基因型肺炎克雷伯菌,为临床CRKP感染的诊疗及医院感染防控提供可靠的实验室依据。     

胶体金免疫层析法快速检测CRE碳青霉烯酶的效果评价

目的分析胶体金免疫层析法对碳青霉烯酶耐药肠杆菌科细菌（CRE）产碳青霉烯酶快速检测的有效性。方法收集蚌埠医学院第一附属医院临床分离的CRE 80株和对碳青霉烯类抗生素敏感肠杆菌科细菌21株,PCR法检测blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM、blaOXA-48耐药基因作为金标准,采用胶体金免疫层析法进行CRE产碳青霉烯酶检测,并与PCR结果进行一致性分析和效能评价。结果80株CRE中,表达碳青霉烯酶类基因为79株,该79株经胶体金免疫层析法检测碳青霉烯酶结果均为阳性,包括61株产KPC酶、10株产NDM酶、6株产IMP酶及2株产VIM酶;21株敏感菌胶体金检测结果均为阴性;与PCR结果相比,胶体金免疫层析法对四种酶的检测敏感性与特异性均为100%,与PCR结果一致性kappa值均为1。结论胶体金免疫层析法可快速区分CRE碳青霉烯酶类型,操作简便,具有很高的敏感度和特异性,对临床抗生素合理化用药具有重要意义。     

舒尼替尼调控miR-143对人肾癌细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨miR-143在肾癌细胞中的作用、舒尼替尼对miR-143表达的影响及与细胞增殖、侵袭的关系。方法培养人肾癌786-O细胞株,分为对照组、miR-143组、舒尼替尼组、共同作用组。对照组细胞转染阴性对照序列,miR-143组细胞转染miR-143序列,舒尼替尼组细胞用舒尼替尼处理48 h,共同作用组细胞转染miR-143序列并用舒尼替尼处理48 h。MTT法检测细胞的增殖,Transwell检测其侵袭,qRT-PCR检测miR-143RNA表达水平,Western blotting检测DNA甲基转移酶3B（DNMT3B）、p-Akt-S473蛋白表达量。结果成功构建稳定、高表达miR-143的人肾癌786-O细胞株,miR-143转染组细胞miR-143表达量增高（P < 0.01）。舒尼替尼作用于786-O细胞48 h的IC₅₀值为6 μmol/L,选取该值作为后续实验用药浓度。786-O细胞经舒尼替尼作用48 h后miR-143表达量升高（P < 0.01）。miR-143组和舒尼替尼组细胞存活率、细胞侵袭数、DNMT3B和p-AktS473蛋白表达量均低于对照组,且高于共同作用组,差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）。结论miR-143可以降低786-O细胞增殖、侵袭能力,这可能与miR-143降低DNMT3B、p-Akt的表达有关。舒尼替尼可能通过上调miR-143水平抑制786-O细胞的增殖与侵袭。     

某教学医院耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌临床及分子特征

 目的 了解临床分离的耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌（CR-hvKP）的耐药、毒力及流行病学特征。方法 收集安徽省某教学医院2018年1月-2020年12月临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）,并分析其临床特征。采用飞行时间质谱鉴定菌株,拉丝试验及检测毒力基因筛选出CR-hvKP,按1：1配比选取与CR-hvKP同病室或相近时间内分离的碳青霉烯耐药非高毒力肺炎克雷伯菌（CR-non-hvKP）作为对照组,采用全基因组测序检测分析CR-hvKP及对照组CR-non-hvKP的荚膜血清型、耐药、毒力基因及ST分型,比较两组菌株间的差异。结果 共分离512株CRKP,其中CR-hvKP 30株,CR-non-hvKP 482株。CR-hvKP感染患者多为老年（20例,66.67%）,存在呼吸系统疾病（29例,96.67%）、消化系统疾病（12例,40.00%）、感染性休克（10例,33.33%）、侵入性治疗（23例,76.67%）以及高病死率（20例,66.67%）。CR-hvKP对常用的大多数抗菌药物耐药率>90%,对替加环素的耐药率为3.33%,对多粘菌素B全部敏感,与CR-non-hvKP的耐药率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。测序结果表明：CR-hvKP携带主要的碳青霉烯耐药基因为bla_KPC-2（28株,93.33%）,耐药基因SHV-11、mph（A）和armA检出率低于CR-non-hvKP菌株。30株CR-hvKP携带的毒力基因iucA、iutA、fimF、fimH、mrkD检出率均为100%,高于CR-non-hvKP菌株,差异均有统计学意义（均P<0.05）。CR-hvKP菌株中ST11-K64检出率（76.67%）高于CR-non-hvKP菌株（40.00%）,差异有统计学差异（P<0.05）。结论 该院主要流行株为ST11-K64产KPC-2酶的CR-hvKP,携带较多毒力和耐药基因,病死率高,临床应重点关注老年及重症监护病房患者。     

2020年蚌埠医学院第一附属医院细菌耐药性监测

摘要：目的 通过对2020年蚌埠医学院第一附属医院临床分离菌分布及对抗菌药物的耐药性分析,为临床合理选择抗菌药物提供参考。方法 采用自动化仪器法、纸片扩散法(K-B法)或E-test方法对我院2020年临床分离的菌株进行药敏试验,按CLSI 2020版标准判断结果,WHONET5.6软件统计分析数据。结果 2020年我院临床共分离4209株细菌,其中革兰阳性菌1121株(26.6%,1121/4209),革兰阴性菌3088株(73.4%,3088/4209)株,前10位分离菌分别为：大肠埃希菌1093株(26.0%)、肺炎克雷伯菌565株(13.4%)、凝固酶阴性葡萄球菌402株(9.6%)、鲍曼不动杆菌354株(8.4%)、铜绿假单胞菌345株(8.2%)、金黄色葡萄球菌313株(7.4%)、奇异变形杆菌132株(3.1%)、屎肠球菌122株(2.9%)、粪肠球菌94株(2.2%)和阴沟肠杆菌63株(1.5%)。金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中耐甲氧西林菌株的检出率分别为43.1%和66.2%,未检出耐万古霉素和利奈唑胺菌株。肠球菌属细菌中以屎肠球菌和粪肠球菌为主,屎肠球菌对大多数测试抗菌药物的耐药率高于粪肠球菌,检出少数耐万古霉素和利奈唑胺药的肠球菌。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株占各自菌的63.1%和31.2%,肺炎克雷伯菌亚胺培南和厄他培南耐药率分别为26.7%和26.4%,较我院2017年有所下降(P<0.01),其余肠杆菌目细菌对碳青霉烯类抗生素耐药率均小于10%。铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药率为34.2%,对头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦、氨曲南、左氧氟沙星和阿米卡星的耐药率均小于30%。鲍曼不动杆菌对阿米卡星的耐药率为31.0%,亚胺培南耐药率为89.5%。流感嗜血杆菌产β-内酰酶检出率为60.7%。结论 临床分离菌对常见抗菌药物耐药情况较严重,耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的检出率有所下降,但仍值得警惕,应重视细菌耐药监测,继续加强医院感染的防控,合理使用抗菌药物。