亚砷酸钠对人淋巴细胞白细胞介素和穿孔素及颗粒酶B的影响

目的探讨亚砷酸钠体外染毒对人淋巴细胞白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-10、穿孔素(perforin,PFP)和颗粒酶B(granzyme B,Gr B)水平的影响。方法采集健康成年人外周血,密度梯度离心分离出淋巴细胞,分别暴露于含终浓度为0.00(对照)、5.00、10.00、20.00、30.00μmol/L亚砷酸钠的培养基染毒12、24、48 h。采用HE染色法鉴定染毒模型;MTT比色法检测细胞存活率;ELISA法检测IL-6、IL-10、PFP和Gr B的水平。结果与不同时间的对照组相比,5.00μmol/L亚砷酸钠染毒组淋巴细胞的存活率均升高,而10.00~30.00μmol/L亚砷酸钠染毒组淋巴细胞的存活率均降低,差异有统计学意义(P0.05)。与相同浓度亚砷酸钠染毒12 h比较,20.00、30.00μmol/L亚砷酸钠染毒24 h及10.00~30.00μmol/L亚砷酸钠染毒48 h淋巴细胞的存活率均降低,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,10.00~30.00μmol/L亚砷酸钠染毒12 h组和各浓度亚砷酸钠染毒24 h组及20.00、30.00μmol/L亚砷酸钠染毒48 h组淋巴细胞分泌的IL-6水平均较高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,30.00μmol/L亚砷酸钠染毒12 h组和20.00、30.00μmol/L亚砷酸钠染毒24 h组及10.00~30.00μmol/L亚砷酸钠染毒48 h组淋巴细胞分泌的IL-10水平均较高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,10.00~30.00μmol/L亚砷酸钠染毒12、24 h组及各浓度亚砷酸钠染毒48 h组淋巴细胞分泌的PFP水平均较高,差异有统计学意义(P0.05)。与相同浓度亚砷酸钠染毒12 h比较,各浓度亚砷酸钠染毒组淋巴细胞分泌的PFP水平均升高,除10.00μmol/L亚砷酸钠染毒24 h外,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,30.00μmol/L亚砷酸钠染毒12 h组和20.00、30.00μmol/L亚砷酸钠染毒24、48 h组淋巴细胞分泌的Gr B水平均较高,差异有统计学意义(P0.05)。不同浓度亚砷酸钠染毒12、24、48 h后淋巴细胞分泌的IL-6、IL-10、Gr B水平间比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论砷暴露可诱导IL-6、IL-10、穿孔素及颗粒酶B表达水平升高,导致细胞因子分泌平衡紊乱,此可能在砷致免疫系统损伤中发挥重要作用。     

饮用水有机提取物致大鼠肝脏损伤中GSTs活性及其编码基因表达的变化

[目的]观察饮用水有机提取物对大鼠肝脏谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase,GSTs)活性及谷胱甘肽-S-转移酶A1(GSTA1)基因m RNA和蛋白表达的影响,探讨其在饮用水有机提取物肝脏损伤中作用。[方法]采用固相萃取法提取水样中有机污染物,50只SD大鼠随机分成5组,分别为空白对照组、溶剂对照组(玉米油)和低、中、高3个染毒组(剂量分别为每天5、20、80 L/kg·bw),进行经口灌胃染毒12周。分光光度法检测GSTs的活性,实时荧光定量聚合酶链反应法和Western blot法分别检测GSTA1基因的m RNA和蛋白质表达水平,同时检测肝功能各指标。[结果](1)大鼠肝脏GSTs酶活性:与空白对照、溶剂对照及低剂量组相比,中剂量[(50.66±5.62)U/mg蛋白]和高剂量组[(39.80±12.95)U/mg蛋白]的GSTs酶活性升高(P<0.05);与中剂量组相比,高剂量组GSTs的酶活性则明显降低(P<0.05)。(2)GSTA1的m RNA及蛋白表达水平:中、高剂量组高于空白对照组、溶剂对照及低剂量组(P<0.05);而与中剂量组相比,高剂量组GSTA1的m RNA表达水平下降(P<0.05)。Western blot检测结果显示,随染毒剂量的增加,GSTA1蛋白表达呈先升高后降低的趋势,与空白对照、溶剂对照及低剂量组比较,中、高剂量组的升高,差异具有统计学意义(P<0.05);而与中剂量组比较,高剂量GSTA1的蛋白表达则下降(P<0.05)。(3)肝功能指标:与对照组比较,血清胆碱酯酶(CHE)在中、高剂量染毒组升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转换酶(AST)则仅在高剂量组升高(P<0.05)。总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)在高剂量组下降(P<0.05)。GSTA1蛋白表达、GSTs活性与染毒大鼠肝脏CHE水平均呈正相关关系(r=0.490 5,r=0.685 2;P<0.05)。[结论]在本实验条件下,饮用水有机提取物较高剂量染毒可上调大鼠肝脏GSTA1的m RNA及蛋白质表达水平,调控GSTs活性改变,从而导致大鼠肝细胞对毒物的易感性增强,肝损伤加重。     

饮用水有机提取物对大鼠氧化应激及免疫功能的影响

目的:探讨某地饮用水有机提取物对大鼠氧化应激及免疫功能的影响,为当地饮用水卫生学评价及人群健康保护提供依据.方法:采用固相萃取法提取水样中有机污染物,40只SD大鼠随机均分成4组,对照组给予玉米油、高中低剂量组给予80、20及5 L/kg有机污染进行灌胃12周后,取小鼠血清和肝匀浆,分别采用黄嘌呤氧比酶法和硫化巴比妥法测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的活性与含量;微量酶标法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;透射比浊法检测血青中免疫球蛋白(IgM、IgG、IgA)与补体(C3、C4)的含量.结果:与对照组相比,血清SOD活力在低剂量组明显升高、高剂量组明显降低,GSH-Px活力在高剂量组明显下降,MDA含量在中、高剂量组均明显升高;肝组织SOD活力仅在高剂量组降低,GSH-Px活力则在中、高剂量组都显著降低,MDA含量在中、高剂量组均明显升高,差异均具有统计学意义(P＜0.05);随着染毒剂量的增加,中、高剂量组的IgM含量较对照组明显升高,差异有统计学意义(P ＜0.05);IgA、IgG、C3及C4则无明显改变,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:该地较高剂量的饮用水有机污染物可诱导大鼠肝脏氧化损伤的发生,并可诱导机体的初次免疫应答增强,而对机体的再次免疫应答及非特异性免疫无明显诱导作用.     

氯化消毒饮用水有机提取物对L-02肝细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响

目的探讨氯化消毒饮用水水样中有机提取物染毒对人肝细胞株(L-02)细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响。方法于2012年7—9月(丰水期)采集贵阳市某地水厂的管网末梢水水样并制备有机提取物。将L-02细胞分别于含0(对照)、0.312 5、0.625、1.25、2.5、5 L/ml氯化消毒饮用水有机提取物的培养基中暴露48 h。测定细胞中半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)与B细胞淋巴瘤2相关x基因(Bax)m RNA及蛋白的表达水平。结果与对照组比较,2.5、5 L/ml饮用水有机提取物染毒组L-02细胞中caspase-3、Bax的m RNA及蛋白表达水平均较高,而0.625、1.25、2.5、5 L/ml饮用水有机提取物染毒组L-02细胞中Bcl-2、PARP-1的m RNA及蛋白表达水平均较低(除0.625 L/ml组PARP-1蛋白外),差异均有统计学意义(P0.05)。结论在本实验条件下,较高剂量的氯化消毒饮用水有机提取物暴露可上调L-02肝细胞中caspase-3与Bax基因,下调Bcl-2及PARP-1基因,促进细胞凋亡的发生。     

2.5%高效氯氟氰菊酯水乳剂的急性毒性研究

高效氯氟氰菊酯是一种拟除虫菊酯类杀虫剂,同其它菊酯类杀虫剂相比,其化学结构式中增添了3个氟原子,使杀虫活性提高,并且具有较强的渗透作用,增强了耐雨性,延长了持效期。该药能有效地防治粮油作物、棉花、果树和蔬菜上的多种害虫,如棉铃虫、菜青虫、玉米螟、苹果黄蚜、小菜蛾、菜粉蝶等,也可用于卫生害虫的防治,在农业和畜牧业以及卫生杀虫中广泛应用[1,2]。     

氯化消毒饮用水有机提取物对大鼠肝脏芳香烃受体和相关基因表达的影响

目的探讨氯化消毒饮用水水样中有机提取物染毒对大鼠肝脏芳香烃受体(aryl hydrcarbon receptor,AhR)和相关基因表达的影响。方法于2012年7—9月(丰水期)采集贵阳市某地水厂的管网末梢水水样并制备有机提取物。将40只清洁级SD大鼠随机分为4组,分别为对照(玉米油)组和5、20、80 L/kg饮用水有机提取物染毒组,每组10只,雌雄各半。采用经口灌胃方式进行染毒,每天1次,连续染毒12周。采用实时荧光定量PCR法检测肝脏中Ah R、热休克蛋白(HSP90)、芳香烃受体核转位蛋白(ARNT)和细胞色素1A2(CYP1A2)mRNA的表达水平,采用Western Blot法检测肝脏中AhR、HSP90、ARNT与CYP1A2蛋白的表达水平。结果与对照组比较,5、20、80 L/kg饮用水有机提取物染毒组大鼠肝脏中HSP90的mRNA和蛋白表达水平均增高,20、80 L/kg组大鼠肝脏中AhR、ARNT与CYP1A2 mRNA和蛋白的表达水平均增高,差异有统计学意义(P0.05)。结论在本实验条件下,氯化消毒饮用水有机提取物暴露可活化AhR通路。     

饮用水有机提取物致大鼠肝脏DNA及蛋白质氧化损伤的研究

目的探讨饮用水有机提取物致大鼠肝脏DNA及蛋白质的氧化损伤情况。方法采集某地管网末梢水,利用固相萃取法提取水样中有机污染物,对40只SD大鼠进行经口灌胃亚慢性染毒(12周)。设立溶剂对照组(玉米油)和3个染毒组(剂量分别为5 L/kg BW·d、20 L/kg BW·d、80 L/kg BW·d)。8羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)采用酶联免疫法(ELISA)、蛋白质羰基(PCO)采用2,4-二硝基苯肼(DNPH)比色法、蛋白定量采用微量酶标法检测。结果随染毒剂量的增加,大鼠血清8-OHd G含量呈上升趋势,与溶剂对照组比较,中、高剂量组的升高差异有统计学意义(P0.05);大鼠肝组织8-OHd G含量亦在中、高剂量组明显升高(P0.05)。随染毒剂量的增加,大鼠肝组织PCO含量呈上升趋势,与溶剂对照组比较,中、高剂量组的升高差异有统计学意义(P0.05)。相关性分析显示,大鼠血清8-OHd G含量、肝组织8-OHd G含量及肝组织PCO含量均与有机提取物染毒剂量呈高度正相关关系(相关系数分别为0.9383,0.8631和0.9136,均P0.05),同时大鼠血清8-OHd G含量与肝组织8-OHd G含量亦呈高度正相关关系(相关系数为0.9843,P0.05)。结论饮用水有机提取物较高剂量接触可诱发大鼠肝脏DNA及蛋白质的氧化损伤,此可能为饮用水有机提取物肝脏毒性重要机制之一。