拮抗剂方案中应用促性腺激素释放激素激动剂诱发卵母细胞成熟后不同黄体支持方案对妊娠结局的影响——一项提前终止的前瞻随机临床对照研究

目的 (1)在促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH-ant)方案中应用促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)诱发卵母细胞最终成熟后,在黄体支持方案中比较孕激素+人绒毛膜促性腺激素(HCG)和孕激素+雌激素两种不同的黄体支持方案对妊娠结局的影响;(2)在GnRH-ant方案中比较添加高纯度人绝经期促性腺激素(HP-HMG)和添加人重组黄体生成素(rLH)对妊娠结局的影响.方法 前瞻随机对照的临床实验.对照组32例,添加rLH,GnRH-a诱发卵母细胞最终成熟后12h添加1,000 IU、35 h添加500 IU HCG,取卵后应用孕激素;实验Ⅰ组37例,添加HP-HMG,黄体支持方案同对照组;实验Ⅱ组33例,添加HP-HMG,取卵后应用孕激素和雌激素.结果 对照组、实验Ⅰ组和实验Ⅱ组的新鲜周期胚胎移植周期临床妊娠率分别是38.10％、23.08％和8.70％,实验Ⅱ组新鲜周期临床妊娠率明显低于本中心质控标准,该临床实验提前终止.对照组、实验Ⅰ组和实验Ⅱ组未妊娠者已有33例进行了冷冻胚胎移植周期,其临床妊娠率分别为50.00％,63.64％和57.14％.三组均无中重度卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生.结论 拮抗剂方案中应用GnRH-a诱发卵母细胞成熟可以避免中重度OHSS的发生,且不影响胚胎质量.GnRH激动剂诱发卵母细胞成熟对黄体功能和内膜容受性存在不利影响,单纯补充雌孕激素无法替代HCG的作用.     

低氧环境下子宫内膜基质细胞增殖及Prohibitin表达

目的观察常氧和低氧环境下子宫内膜基质细胞(ESCs)的增殖,探讨抗增殖蛋白prohibitin(PHB)在子宫内膜异位症(EMs)病理机制中的作用。方法 10例正常内膜组织(正常对照组)和10例EMs患者在位内膜组织(在位内膜组)各分为两份,分别置于常氧(21%O_2)与低氧(1%O_2)环境中培养。运用BrdU方法检测细胞增殖,并以光密度值(OD)代表细胞的增殖能力;通过流式细胞技术检测细胞凋亡;细胞免疫荧光技术和蛋白质印记法(Western blot)检测细胞中PHB表达。结果在常氧环境,在位内膜组的OD值略高于正常对照组但无统计学差异(P0.05);而在低氧环境,在位内膜组的OD值[(1.400±0.659)]显著高于正常对照组[(0.590±0.021)](P0.001),且显著高于常氧环境的在位内膜OD值[(1.156±0.044)](P0.05)。无论是常氧还是低氧环境,在位内膜组的细胞凋亡率均显著低于对照组[分别为(4.117±0.450)%vs.(7.247±0.707)%及(4.983±0.393)%vs.(9.867±0.675)%],差异均有统计学意义(P0.05)。在常氧环境,在位内膜组ESCs的PHB表达[(0.747±0.026)]显著高于正常对照组[(0.590±0.021)](P0.05);在低氧环境,正常对照组和在位内膜组ESCs的PHB表达水平均较常氧环境的PHB表达水平降低[分别为(0.358±0.071)vs.(0.590±0.021)和(0.458±0.054)vs.(0.747±0.026)],且差异有统计学意义(P0.05)。结论正常子宫内膜组织表达PHB,EMs患者的在位内膜组织PHB表达升高;低氧环境下ESCs的PHB表达水平显著降低,可能与促进ESCs增殖、抑制ESCs凋亡相关,因此PHB在EMs病理机制中起重要作用。     

轻度子宫内膜异位症诊断的研究进展

子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)是一种常见的妇科疾病,可导致盆腔疼痛和不孕.轻度EMs(Ⅰ～Ⅱ期)约占EMs的80％,其病灶常为腹膜型/浅表型,常规的超声检查常无阳性发现.患者早期症状和体征隐匿,缺乏可应用于临床的特异性生物标志物,导致大部分轻度EMs患者诊断及治疗延迟,发展成中重度EMs,因此轻度...     

白细胞介素1受体Ⅱ型在子宫内膜异位症发生机制中的作用

目的:研究白细胞介素1受体Ⅱ型(IL-1RⅡ)在子宫内膜异位症(EMs)发生机制中的作用.方法:体外培养子宫内膜细胞经过可溶性IL-1RⅡ或IL-1RⅡ重组腺病毒(rAd-RⅡ)作用12 h后收集细胞培养液,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养液中IL-6和IL-8的水平.另外应用二维电泳和质谱分析鉴定rad-RⅡ作用后的差异表达蛋白.结果:2.μg/mL的可溶性IL-1RⅡ显著抑制了内膜细胞IL-6和IL-8的分泌.rAd-RⅡ感染内膜细胞后IL-1β刺激IL-8的分泌比磷酸盐缓冲液(PBS)和LacZ重组腺病毒(rAd-LacZ)对照组显著降低,而IL-6表达无显著差异.二维电泳分析有62个差异蛋白点,质谱分析鉴定出34个差异蛋白,大多数蛋白和细胞代谢与增殖相关.结论:IL-1RⅡ能阻断IL-1β对内膜基质细胞的作用,可能为EMs治疗提供新策略.     

血清钙磷水平与体外受精和卵胞浆内单精子注射结局的相关性初步观察

钙离子震荡是卵激活的重要因素,一些因素通过诱发卵内的钙离子震荡,从而完成受精过程并控制早期胚胎发育.血液中生物活性的钙浓度随着月经周期呈现周期性变化[1],而血清中钙和磷水平密切相关,研究发现排卵前卵泡液中的钙离子浓度与血清中高度接近[2,3].血清钙/磷水平与体外受精和卵胞浆内单精子注射(IVF/ICSI)妊娠结局之间的关系研究较少,本文主要通过回顾性病例研究分析血清钙磷水平与IVF/ICSI妊娠结局的相关性.     

小鼠卵巢蛋白质双向凝胶电泳蛋白谱系的初步建立及其功能分析

目的:初步建立性成熟小鼠卵巢蛋白质图谱,并对其中的蛋白质功能进行研究.方法:通过双向电泳和质谱技术分析性成熟小鼠卵巢蛋白质组,并对其中的一种蛋白质进行免疫组化研究.结果:(1)获得高重复性和高分辨率小鼠卵巢蛋白图谱.软件分析显示,3个不同卵巢样品24 cm银染蛋白凝胶上的蛋白点均有±2 000点,胶重复性好,大部分蛋白点位于相对相同的位置.(2)质谱共鉴定出52种蛋白质,按功能对其进行分类:参与细胞代谢、细胞信号传导/交流、细胞结构/运动、细胞/器官防御与抗氧化作用、调节RNA合成、调节蛋白表达及未分类.(3)通过对其中的一种蛋白(GRP78)行免疫组化分析,发现随着卵巢由卵泡早期逐渐生长到排卵前卵泡期成熟并转向黄体期,其在颗粒细胞中的表达信号增强.结论:(1)3个不同卵巢样品蛋白质双向电泳图重复性好.我们通过质谱分析共鉴定出约52种蛋白质,初步构建了小鼠卵巢双向电泳蛋白图谱,对研究卵巢病理与生理、发育过程有着重要的参考价值.(2)行免疫组化分析结果显示,在卵巢周期变化过程中,GRP78蛋白对颗粒细胞的增生、分化、形成黄体颗粒细胞起着重要的调控作用.     

一种L-选择素配体合成酶在子宫内膜异位症种植窗期内膜中的表达

目的检测N乙酰氨基葡萄糖6磺基转移酶(Nacetylglucosamine6Osulfotransferase),一种合成L选择素配体的关键酶,在生育年龄的子宫内膜异位症患者及非子宫内膜异位症妇女种植窗期子宫内膜中的表达。方法采用RTPCR技术检测8例子宫内膜异位症患者和20例非子宫内膜异位症妇女种植窗期子宫内膜中N乙酰氨基葡萄糖6磺基转移酶的表达。结果种植窗期子宫内膜有该酶的表达;子宫内膜异位症组表达的灰度值为0.124±0.069,明显少于对照组0.511±0.25(P<0.05)。结论子宫内膜异位症患者在位子宫内膜种植窗期N乙酰氨基葡萄糖6磺基转移酶的基因表达呈降调状态,这种异常表达可能与子宫内膜异位症患者胚胎的种植率低下以及异位病灶的发病机制有关,成为导致不孕的病理环节之一。     

白细胞介素1受体Ⅱ型在子宫内膜异位症发生机制中的作用

目的：研究白细胞介素1受体Ⅱ型（IL-1RⅡ）在子宫内膜异位症（EMs）发生机制中的作用。方法：体外培养子宫内膜细胞经过可溶性IL-1RⅡ或IL-1RⅡ重组腺病毒（tAd-RⅡ）作用12h后收集细胞培养液,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养液中IL-6和IL-8的水平。另外应用二维电泳和质谱分析鉴定rAd-RⅡ作用后的差异表达蛋白。结果：2．0ug／mL的可溶性IL-1RⅡ显著抑制了内膜细胞IL-6和IL-8的分泌。rAd-RⅡ感染内膜细胞后IL-IB刺激IL-8的分泌比磷酸盐缓冲液（PBS）和LacZ重组腺病毒（rAd-LacZ）对照组显著降低,而IL-6表达无显著差异。二维电泳分析有62个差异蛋白点,质谱分析鉴定出34个差异蛋白,大多数蛋白和细胞代谢与增殖相关。结论：IL-1RⅡ能阻断IL-1β对内膜基质细胞的作用,可能为EMs治疗提供新策略。     

人NR4A1基因的克隆及其重组腺病毒载体的构建

目的:克隆人NR4A1基因,构建其重组腺病毒载体。方法:用RT-PCR的方法从人卵巢组织中扩增NR4A1基因全长,经T/A克隆后,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建穿梭质粒pAdtrack-NR4A1。PmeI酶切pAdtrack-NR4A1,然后分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒pAdtrack-NR4A1转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组。PacI酶切线性化重组质粒AdCMV-NR4A1后转染AD-293细胞进行病毒包装和扩增。通过GFP报告基因观察重组病毒的产生。PCR、Western blot检测NR4A1基因的表达。结果:用RT-PCR方法,从人卵巢组织中扩增出1797bp的cDNA,测序证实为人NR4A1基因。构建了NR4A1基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒。结论:成功地克隆了人NR4A1基因,并构建其重组腺病毒载体,为进一步研究NR4A1基因在相关疾病中的作用奠定了基础。     

白细胞介素1与子宫内膜异位症发生机制

细胞因子在子宫内膜异位症(EMs)的发生、发展中起着重要的作用,白细胞介素1(IL-1)系统在细胞因子网络中占有重要地位,通过调节其他细胞因子和甾体激素的合成与分泌,对病灶部位的炎症反应和逆流到腹腔的内膜细胞的黏附、侵袭和血管形成过程发挥重要的调节作用.深入研究IL-1系统的调节机制将为寻求新的治疗方法提供思路.