呼吸道感染患者分离奈瑟菌属菌种的生物学与16S rRNA鉴定

目的 了解引起呼吸道感染的常见致病性奈瑟菌属菌种以及从慢性呼吸道感染患者分离的致病性奈瑟菌属的鉴定方法.方法 采集249例不同年龄慢性呼吸道感染患者的痰标本,分别进行革兰染色镜检和接种血琼脂培养基分离培养;分离的奈瑟菌样革兰阴性双球菌,分别进行常规细菌学方法和染色体16S rRNA基因检测鉴定以及药物敏感(K-B法)试验.结果 在184例患者的痰标本内分离出227株.占73.9％,呈明显优势生长甚至惟一生长的革兰阴性双球菌,常规细菌学方法鉴定分别为干燥奈瑟菌、黏液奈瑟菌、微黄奈瑟菌、金黄奈瑟菌、多糖奈瑟菌、嗜乳糖奈瑟菌、脱氨奈瑟菌及灰色奈瑟菌;各菌种通过16S rRNA基因PCR检测和序列测定,发现与常规细菌学方法鉴定的符合率＞64.0％;来自不同患者的各种奈瑟菌对临床常用抗菌药物的敏感性相似,存在许多耐药或多药耐药菌株.结论 人体上呼吸道正常菌群奈瑟菌属的许多菌种,是引起呼吸道感染患者慢性继发性呼吸道感染的常见致病菌,这些菌种的生物学特性及其广泛的耐药性,使其成为影响慢性呼吸道感染的病原学诊断与治疗效果的重要因素,常规细菌学与16S rRNA检测相结合,能够提高呼吸道条件致病性奈瑟菌鉴定的准确率.     

男性泌尿生殖道感染非淋病奈瑟菌的毒力相关基因检测

目的检测男性泌尿生殖道分离的非淋病奈瑟菌毒力相关基因,探讨非淋病奈瑟菌的致病机理。方法采用PCR扩增和核苷酸序列分析技术,检测从男性泌尿生殖道感染患者生殖道分离的6个菌种12株非淋病奈瑟菌的毒力相关基因orf1,nspA,PIA,PIB,opa,iga,pilE。结果 12个分离菌株中8株(检出率66.67%)检出毒力相关基因,其中orf1的阳性率为25.00%(3/12),opa为25.00%(3/12),PIB为16.67%(2/12),nspA为8.33%(1/12),各菌株均未检出PIA,pilE与iga。结论感染男性泌尿生殖道的部分非淋病奈瑟菌具有淋病奈瑟菌的毒力相关基因。但这些毒力相关基因并不是非淋病奈瑟菌引起男性生殖道感染的唯一致病因素,非淋病奈瑟菌的男性生殖道致病性可能与其黏膜寄生性等生物学特性有关。     

沉默lncRNA TUG1对肾透明细胞癌细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探究沉默lncRNA TUG1对肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:选用37例ccRCC组织及癌旁组织样本，通过提取样本总RNA并行逆转录及转染，利用qRT-PCR检测lncRNA TUG1在ccRCC组织、细胞系及癌旁组织中的表达，并通过CCK-8法、流式细胞检测法及划痕实验检测沉默lncRNA TUG1对ccRCC细胞A704、A498增殖、凋亡及迁移的影响，采用统计软件进行数据处理，探究lncRNA TUG1在ccRCC中的表达及临床意义。结果:qRT-PCR检测lncRNA TUG1表达情况，结果显示:lncRNA TUG1在ccRCC组织中的表达显著高于癌旁组织，在肾细胞癌细胞系A704和A498中的表达明显高于正常细胞系HK2，差异有统计学意义（P＜0.05）；CCK-8检测细胞增殖情况，结果显示:A704和A498细胞经转染干扰后细胞增殖活性较对照组显著降低（P＜0.05），沉默lncRNA TUG1可抑制细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡情况，结果显示:A704和A498细胞凋亡比例较空白对照组明显增多（P＜0.05），沉默lncRNA TUG1可促进细胞凋亡；划痕实验检测细胞迁移能力，结果显示:A704和A498细胞迁移能力较空白对照组降低（P＜0.05），沉默lncRNA TUG1可抑制细胞迁移。结论:沉默lncRNA TUG1可诱导ccRCC细胞凋亡，抑制其增殖、迁移，可作为临床研究的新靶点。     

男性泌尿生殖道感染患者奈瑟菌属菌种的基因检测

目的:检测从男性泌尿生殖道感染患者分离的奈瑟菌属菌种的基因并探讨非淋病奈瑟菌的致病性以及奈瑟菌属菌种感染的实验室诊断方法。方法:用聚合酶链反应及核苷酸序列测定方法,检测男性泌尿生殖道感染患者泌尿生殖道分离的奈瑟菌属菌种的淋病奈瑟菌核酸扩增荧光检测试剂的反应及其染色体上16SrRNA基因、淋病奈瑟菌DNA甲基转移酶基因orf1、隐蔽性质粒基因cppB及外膜蛋白基因nspA。结果:男性泌尿生殖道感染患者泌尿生殖道分离的14株奈瑟菌属菌种经16SrRNA基因检测鉴定为淋病奈瑟菌2株、粘液奈瑟菌3株、灰色奈瑟菌3株、干燥奈瑟菌2株、微黄奈瑟菌2株、嗜乳糖奈瑟菌1株、多糖奈瑟菌1株,其中淋病奈瑟菌核酸扩增荧光检测试剂阳性反应的9株、cppB阳性反应1株、orf1阳性反应5株、nspA阳性反应3株。16SrRNA基因检测与常规细菌学方法鉴定结果比较,两者的符合率85.7%。结论:引起男性泌尿生殖道感染的非淋病奈瑟菌缺乏cppB,大多数菌株缺乏淋病奈瑟菌毒力相关的orf1与nspA并且可在淋病奈瑟菌核酸扩增荧光检测试剂检测中显示阳性反应,从而造成淋病奈瑟菌鉴定与淋病诊断的误诊以及其他奈瑟菌感染的漏诊。在疑似奈瑟菌属菌种感染的实验室检查中联合使用常规细菌学方法与基因检测方法,可有助于提高奈瑟菌属菌种鉴定及其感染诊断的准确率。     

呼吸道感染患者奈瑟菌属致病性相关基因的检测

目的 检测呼吸道感染患者分离奈瑟菌属的致病性相关基因,探讨非淋病奈瑟菌、非脑膜炎奈瑟菌的致病性.方法 采用PCR扩增和序列分析技术,对慢性呼吸道感染患者下呼吸道分离奈瑟菌属致病性相关基因orf1与nspA进行检测.结果 从呼吸道感染患者标本分离的230株奈瑟菌属,orf1基因阳性35株,序列比对与淋病奈瑟菌TCDC-NG08107 orf1序列同源性达95.0％～99.0％;nspA无阳性反应.结论 人体上呼吸道正常菌群奈瑟菌属缺乏nspA基因,少数菌株可具有淋病奈瑟菌及脑膜炎奈瑟菌致病性相关基因orf1,提示该基因并不是人体上呼吸道正常菌群奈瑟菌属致病性和引起呼吸道继发性感染的毒力因素     

慢性呼吸道感染患者呼吸道分泌物分离奈瑟菌的cppB与pJD1基因检测

目的检测慢性呼吸道感染患者分离奈瑟菌属菌种的cppB、pJD1,探讨cppB与pJD1检测对奈瑟菌属菌种鉴定及奈瑟菌感染诊断的意义。方法用常规聚合酶链反应(PCR)和real-time PCR方法,分别检测慢性呼吸道感染患者呼吸道分离的209株不同菌种奈瑟菌cppB以及pJD1基因。结果分离菌种的43株可检出cppB(阳性率20.6%),29株对检测pJD1的淋球菌核酸扩增荧光检测试剂呈阳性反应(阳性率13.9%),其中4株的cppB及pJD1检测均为阳性反应(阳性率1.9%)。结论引起慢性呼吸道感染的奈瑟菌属许多菌种具有淋球菌隐蔽质粒cppB,可与检测pJD1的淋球菌核酸扩增荧光检测试剂呈阳性反应。     

Survivin和Caspase-3在肝细胞癌中表达的相关性及其生物学意义

目的研究Survivin和Caspase-3在肝细胞癌中表达的相关性及其生物学意义。方法利用组织芯片和免疫组织化学技术检测70例肝细胞癌及其癌旁肝组织、15例肝硬化及10例正常肝组织中Survivin和Caspase-3蛋白的表达。结果在HCC中Survivin蛋白的阳性率和阳性强度明显高于癌旁肝组织、肝硬化和正常肝组织（P〈0．01）；Survivin蛋白的表达强度与HCC的分化程度及肿瘤的大小明显相关（P〈0．01），分化愈差和肿瘤愈大，Survivin蛋白的表达愈强。Caspase-3蛋白在HCC中的表达率和表达强度明显低于癌旁肝组织、肝硬化和正常肝组织（P〈0．01），HCC分化愈差和肿瘤愈大，Caspase-3蛋白表达愈弱（P〈0．01）。统计学分析显示在Hcc、癌旁肝组织及肝硬化组织中survivin和caspase-3蛋白的表达强度呈明显负相关（P〈0．01）。结论在HCC的发生和发展过程中存在survivin蛋白表达水平的改变；Survivin蛋白可能通过抑制caspase-3蛋白的活性抑制细胞凋亡和促进细胞增殖．加速细胞的恶性转化和Hcc的发生。     

蝇蛆肽对衰老小鼠的抗氧化作用

目的探讨蝇蛆肽对衰老模型小鼠的抗氧化作用。方法建立D-半乳糖(D-gal)衰老小鼠模型,将3月龄小鼠分为正常对照组(K组),模型组(A组),维生素C组(V组),蝇蛆肽低、中、高剂量组(L组、M组、H组)。各处理组灌胃7 w后,测定胸腺、脾脏和肝脏指数,测定血清、肝脏和脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)及肝脏和脑组织的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)。结果与A组比较,M、H组胸腺、脾脏和肝脏指数显著升高(P<0.05或P<0.01),血清、肝脏和脑组织中SOD、CAT活性显著升高和MDA含量显著降低(P<0.05或P<0.01),肝脏和脑组织中GSH-Px活性显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论蝇蛆肽具有较好的抗氧化活性,其可能通过增强机体内抗氧化物酶活性和自由基的清除,从而减少脂质过氧化物的生成,发挥抗脂质过氧化作用。     

HP-L型体外胆汁诱导及实验室诊断研究

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌的主要致病因素,1994年被世界卫生组织/国际癌症研究机构(WHO/IARC)定为Ⅰ类致癌原。近年的研究[1]发现,HP感染也可引起胃、十二指肠以外的其他器官的某些疾病,其在胆囊内携带及其与胆囊疾病的关系也受到广泛重视。文献报