临床分子生物学检验进修生临床教学实践与体会

各个基层医院陆续建立了临床分子生物学实验室并外派人员进修学习,但是进修生水平参差不齐,给教学工作带来一定难度。研究者在充分了解了他们的学习需求后,再结合该院检验科分子生物学组的特色,主要从岗前培训、质量管理、临床检测项目及新项目性能验证和科研能力四个方面对进修生进行教学,使其临床分子生物学检验的理论和实践方面得到提高,进修学习学有所获。     

成人疑似病毒性脑炎、脑膜炎患者xTAG脑脊液病毒多重检测结果分析

目的分析xTAG脑脊液病毒多重检测试剂盒(cerebral spinal fluid viral panels,xTAG CSFVP)对成人疑似病毒性脑炎、脑膜炎病原体检测结果。方法收集2014年10月～2016年9月就诊于北京协和医院的115例疑似病毒性脑炎或脑膜炎的成人患者脑脊液标本115例,使用xTAG CSFVP进行检测并对结果进行分析。结果 115例脑脊液标本中,有28例检测出病毒,阳性率为24.3%,其中单纯疱疹病毒1型的检出率最高(7.8%),水痘-带状疱疹病毒和EB病毒检出率次之(均为6.1%)。共检出病毒30例,其中单一感染占92.86%(26/28),混合感染占7.14%(2/28)。xTAG CSFVP阳性和阴性患者的临床症状和脑脊液生化指标差异无统计学意义(均P0.05)。结论成人病毒性脑炎脑膜炎患者xTAG脑脊液病毒检出率最多的病原体为单纯疱疹病毒1型,水痘-带状病毒和EB病毒,检出2例混合感染。     

实时荧光定量PCR在HLA-B~*5801等位基因检测中的性能评价

目的:评价采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测人类白细胞抗原B位点5801(HLA-B*5801)等位基因的重复性、准确性和最低检出限。方法:选取HLA-B*5801阳性和阴性样本各2例,每一样本每批内测定5次,连续测定2 d,共重复测定10次,评价方法的重复性。收集20例已知阳性和阴性样本,实时荧光定量PCR方法进行检测,同时与金标准DNA测序法的结果进行比对,评价方法的准确性。同时进一步选取其中1例阳性DNA样本进行梯度稀释后再行检测,评价方法的最低检出限。结果:4例样本重复性检测阳性和阴性符合率为100%;实时荧光定量PCR法与DNA测序法检测结果符合率为100%,收集的20例已知阳性和阴性样本中HLA-B*5801阳性8例,阴性12例;实时荧光定量PCR的最低检出限为2.5 ng/μl DNA。结论:实时荧光定量PCR可方便、快捷地检测HLA-B*5801等位基因,其准确度高,重复性好,适用于临床常规样本的检测。     

一种寨卡病毒富集检测方法的性能评价

  目的  对一种无需核酸提取纯化的寨卡病毒实时荧光定量反转录PCR检测方法的性能进行评价。  方法  该检测方法基于实时荧光定量反转录PCR技术, 样本处理采用病毒富集法: 取100~200 μL待测样本, 加入112~224 μL样本处理液Ⅰ, 5~10 μL样本处理液Ⅱ, 混匀后进行离心富集(12 000 r/min, 离心半径8.6 cm, 离心5 min)。离心后弃上清液, 加入20 μL复溶缓冲液重悬沉淀; 取10 μL重悬液, 加入50 μL PCR反应液上机检测。从定量检测下限、交叉反应、抗干扰性、精密度方面评价该检测方法的性能。收集北京协和医院检验科临床样本(血清、尿液、唾液样本), 随机选取约1/5构建寨卡病毒感染模拟临床样本, 进一步评定该检测方法的性能。  结果  该检测方法对MR766、ZKC2/2016毒株的检测下限均为10¹半数组织培养感染剂量(50% tissue culture infective dose, TCID50)/mL; 对17种常见虫媒病原体检测结果均为阴性, 无交叉反应发生; 潜在干扰物质胆红素(15 mg/L)、血红蛋白(100 mg/L)、甘油三酯(2000 mg/L)、IgG(37.5 g/L)和EDTA-Na₂(2.5 g/L)对其检测结果无干扰; 检测低、中、高浓度寨卡病毒的批次内和批次间Ct值变异系数均＜10%, 精密度良好。共收集344份北京协和医院检验科临床样本, 其中构建寨卡病毒感染模拟临床样本73份。采用该检测方法对344份样本进行检测, 结果均与实际相符, 无假阳性和假阴性。  结论  寨卡病毒简单富集后再检测的方法特异性高、重复性好, 检测结果不受干扰物质的影响, 检测下限满足临床需求, 且操作简便, 但应用效果仍需在真实临床样本中进一步验证。     

老年性黄斑变性的治疗现状

年龄相关性黄斑变性(Age-relatedmacalardegeneration,ARMD),又名老年性黄斑变性(Senilemaculardegeneration,SMD),是目前致盲主要的眼病之一。属于中医"视瞻昏渺""暴盲"的范畴。黄斑部脉络膜新生血管膜(CNV)的形成,是致盲的根本原因。目前西医尚无确切有效的方法治疗,也无有效的预防措施,目前西医治疗ARMD均集中于CNV的抑制或消退。CNV所表现的出血、渗出、水肿等引起的瘢痕形成是致盲的最重要因素。目前光动力疗法(PDT)治疗CNV性疾病在临床也取得一定疗效,但依旧无法从本质上阻止CNV的发生,无远期治疗效果。近年来CNV性疾病得到越来越多的重视,随着新的中西医治疗方法逐步出现,中医在其治疗上的优势也得以渐渐体现。本文将主要论述老年性黄斑变性的研究现状及其展望。     

人副流感病毒致重症肺炎2例

2013年4—5月,北京协和医院诊治2例人副流感病毒（human parainfluenza virus,HPIV）感染引起的重症肺炎患者,报道如下。     

儿童社区获得性肺炎的病原体研究

目的 研究儿童社区获得性肺炎(CAP)的常见呼吸道病原体分布,并为儿童CAP的合理用药治疗提供参考依据.方法 收集2011年1月—2012年12月医院的387例住院CAP儿童病例,年龄1月龄～14岁,采集血液、痰液和咽拭子进行细菌培养,同时用直接免疫荧光法检测病毒;应用酶联免疫法测定肺炎支原体、衣原体属或病毒.结果 在387例患儿中病原体感染有312例,其中157例存在混合感染,占40.57％;不同患儿年龄段的病原体分析结果显示,细菌和病毒感染患儿的年龄显著低于非典型病原体感染的患儿年龄(P=0.010).结论 细菌、病毒及非典型病原体均是儿童CAP的常见病原体,大量的混合感染显著增加了儿童CAP病因判断及临床经验用药的难度.     

警惕诺如病毒的流行及暴发

诺如病毒(norovirus, NV)是一种线性单链正向RNA病毒,是引起人急性胃肠炎流行和暴发的主要病原体,其传播途径复杂,低载量即可引起感染。现有实验室检测方法多样,包括直接电镜检测法、免疫检测法和分子生物学检测法。警惕NV的流行及暴发、规范病例管理、保持手卫生、清洁消毒环境、开展健康教育是NV感染防控的关键。     

两种不同方法对轮状病毒和腺病毒抗原检测的比较

目的 比较应用自动粪便前处理系统(简称为仪器法)和手工法对轮状病毒(RV)和腺病毒(AdV)抗原检测的结果。方法 收集2014年9月～10月在北京协和医院肠道门诊就诊的腹泻患者粪便标本100份,分别用仪器法和手工法对粪便进行处理后,检测RV和AdV抗原,并用液相芯片法对阳性标本进行核酸检测验证结果。结果 仪器法检测对RV,AdV及二者共同感染的抗原阳性率分别是17.0%(17/100),25.0%(25/100)和12.0%(12/100),手工法的抗原阳性率分别是4.0%(4/100),13.0%(13/100)和2.0%(2/100)。以核酸检测结果为金标准,仪器法检测RV,AdV及二者共同感染的假阳性率分别是23.5%(4/17),20.0%(5/25)和33.3%(4/12),手工法的假阳性率分别是75.0%(3/4),69.2%(9/13)和50.0%(1/2)。采用配对资料的检验进行χ²统计分析,两种方法检测RV和AdV总阳性率,RV的假阳性率和AdV假阳性率差异均有统计学意义(χ²=15.0,52.8和47.5,P值均<0.05); 两种方法检测结果一致性较差(Kappa值为0.25,Kappa值<0.4)。结论 仪器法检测RV和AdV抗原阳性率及假阳性率方面均优于手工法,更有利于临床应用。     

2013—2018年北京协和医院4种常见性传播疾病病原体检出情况

  目的  探究北京协和医院诊治的疑似性传播疾病(sexually transmitted diseases, STD)患者沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, CT)、解脲支原体(Ureaplasma urealyticum, UU)、生殖支原体(Mycoplasma genitalun, MG)及淋病奈瑟球菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)感染情况,旨在为临床诊治提供依据。  方法  回顾性收集2013年1月—2018年12月北京协和医院疑似STD患者的送检标本(包括尿液标本及生殖道拭子标本)。采用实时荧光核酸恒温扩增检测技术检测样本中CT、UU、MG、NG,并计算其阳性率。  结果  2013—2018年,共接收CT、UU、MG、NG检测标本12 804份。4种病原体阳性率由高至低依次为UU(42.88%,4833/11 271)、CT(8.43%,905/10 739)、MG(5.44%,231/4246)、NG(3.78%,338/8932);合并感染以UU+CT(4.13%,402/9725)、UU+MG(1.98%,74/3745)较常见。女性患者UU阳性率均高于同年龄段男性患者,CT、NG、MG阳性率低于同年龄段男性患者。除女性患者NG、UU单一感染外,4种病原体单一感染率及合并感染率(UU+CT、UU+MG)均以≤20岁患者最高。NG、MG阳性率整体呈下降趋势,CT、UU阳性率呈小范围波动。男性患者中,尿道拭子标本NG阳性率明显高于尿液标本(12.37% 比5.27%,P＜0.001);女性患者中,宫颈拭子标本UU阳性率明显高于尿液标本(61.78% 比54.74%,P＜0.001),CT阳性率低于尿液标本(6.16% 比7.73%,P=0.022)。  结论  2013—2018年北京协和医院诊治疑似STD患者中,4种常见病原体阳性率由高至低依次为UU、CT、MG、NG;UU+CT、UU+MG是常见的合并感染类型;≤20岁患者病原体阳性率较高;不同类型标本中病原体检出率存在差异。