糖尿病性角膜病变发病机制的研究进展

糖尿病性角膜病变(diabetic keratopathy,DK)是糖尿病在眼部的常见并发症之一,其主要临床表现包括干眼症、点状角膜炎、角膜上皮再生迟缓、反复的上皮糜烂、角膜知觉减退和角膜水肿等,主要发病机制为糖基化反应、多元醇通路和蛋白酶改变等。本文就糖尿病角膜病变的主要临床表现相对应的发病机制进行综述,以期对临床治疗提供新思路。     

4种眼压计对近视患者准分子激光原位角膜磨镶术后测压的应用价值比较——附53例报告

目的:比较4种眼压计对近视患者准分子激光原位角膜磨镶术(laser in situ keratomileusis,LASIK)后测压的应用价值.方法:53例近视患者行LASIK,在LASIK前和LASIK后1个月采用超声角膜厚度测量仪行中央角膜厚度测量及分别用动态轮廓眼压计(dynamic contour tonometry, DCT)、非接触式眼压计(non-contact tonometry, NCT)、Goldmann 压平眼压计(Goldmann applanation tonometry,GAT)、Tono-Pen眼压计(Tono-Pen tonometry,TPT)进行眼压测量.对所得的各种眼压测量值及中央角膜厚度值进行统计学分析.结果:53例近视患者105 眼LASIK前测得的中央角膜厚度值为(544±30)μm,LASIK后为(449±40)μm,LASIK前、后中央角膜厚度比较差异有统计学意义(P﹤0.01).LASIK后NCT、GAT和TPT测得的眼压值较LASIK前明显降低,DCT的眼压降低值最小.经直线相关与回归分析,NCT、GAT和TPT测量的眼压降低值与中央角膜厚度改变值均呈正相关(P﹤0.05～0.01),DCT与中央角膜厚度不存在相关性(P﹥0.05).结论:NCT、GAT和TPT受中央角膜厚度值影响较大,DCT受中央角膜厚度值影响小,可作为近视患者行LASIK后测量眼压的首选方法,以减少中央角膜厚度对青光眼诊断的干扰.     

消可宁对高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞增殖的调控效应

背景:中药对早期糖尿病肾病有较好的防治作用,这一作用是基于中药有效成分的多样性而作用于糖尿病肾病不同靶点所引起的。目的:观察消可宁对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增生的影响,并探讨其可能的作用机制。设计:对照观察。单位:南京医科大学第一附属医院内分泌科。材料:实验于2003-07/2004-05在南京医科大学第一附属医院内分泌代谢研究中心细胞培养研究室完成。大鼠系膜细胞株HBZY-1:购自武汉大学中国典型培养物保藏中心。方法:系膜细胞按说明进行传代培养备用。①不同刺激浓度分组:高糖 消可宁组(消可宁分别取20.0,40.0,60.0,80.0,120.0,200.0g/L);正常糖对照组,细胞液中葡萄糖浓度为5.6mmol/L;高糖对照组,细胞液中葡萄糖浓度为30mmol/L,分别刺激72h进行观察。不同刺激时间分组:正常糖对照组,细胞液中葡萄糖浓度为5.6mmol/L;高糖对照组,细胞液中葡萄糖浓度为30mmol/L;高糖 消可宁组,细胞液中葡萄糖浓度为30mmol/L,消可宁浓度为60g/L;3组分别在刺激24,48,72h给予观察。②将配置好的细胞悬液放入96孔培养板,每孔加200μL。培养板放置体积分数为0.05CO2,37℃孵箱24h后,取出弃上清,加入各组含不同药物及浓度的细胞液,每孔200μL。将96孔板放入37℃含体积分数为0.05的CO2空气和100%湿度培养箱中孵育。不同刺激浓度组别于72h后分别向板孔中加20μL4-甲基偶氮四唑蓝(5g/L),不同刺激时间组别于24,48,72h后分别向板孔中加20μL4-甲基偶氮四唑蓝(5g/L),之后均在37℃培养箱中温育4h,置镜下观察4-甲基偶氮四唑蓝掺入细胞内,吸出上清,加入150μL二甲基亚砜使用甲醇溶解,用平板摇床摇匀振荡30s,于酶标仪492nm波长读数,并记录吸光度值。主要观察指标:不同培养时间及不同消可宁培养浓度下系膜细胞增殖情况(吸光度值)。结果:①不同刺激时间各组系膜细胞增殖的情况:(下转第201页)高糖对照组刺激24,48,72h系膜细胞吸光度值分别为0.685±0.010,0.750±0.087,0.659±0.018,高于正常糖对照组(0.586±0.054,0.598±0.040,0.527±0.047,P<0.05),高糖对照组及正常糖对照组葡萄糖刺激系膜细胞48h吸光度值高于24h(P<0.05),刺激72h吸光度值低于48h,(P<0.05)。高糖 消可宁组药物刺激72h后系膜细胞吸光度值为0.538±0.023,低于高糖对照组(P<0.05)。②不同浓度消可宁刺激系膜细胞增生情况:消可宁自浓度为60.0g/L起,可明显的阻止高糖对系膜细胞的过度刺激作用,并随着浓度的增加,这种作用逐渐增强,但过高的浓度(120.0g/L)则出现细胞脱落死亡,极高的药物浓度(200.0g/L)则不见存活的细胞。结论:高糖培养的系膜细胞在消可宁刺激72h后表现出较强的抑制系膜细胞增殖的作用,在一定范围内呈剂量依赖的方式,但过高的药物浓度又表现出很强的细胞毒性。     

DNMT1蛋白通过沉默MEG3基因促进视网膜母细胞瘤增殖

目的 探讨 DNMT1 蛋白是否通过沉默 MEG3 基因诱导视网膜母细胞瘤增殖。方法 通过转染 pcDNA-DNMT1 或si-DNMT1上调或干扰DNMT1的表达水平;通过转染pcDNA-MEG3或si-MEG3上调或干扰MEG3的表达水平;用Western blot检测视网膜母细胞瘤细胞系中DNMT1蛋白表达量;用CCK-8法及EdU法检测细胞的增殖能力;用实时荧光定量PCR技术检测转染后的视网膜母细胞瘤细胞中MEG3表达量的变化;干扰DNMT1表达后,用甲基化特异性PCR检测MEG3基因启动子DNA甲基化水平的变化。结果 视网膜母细胞瘤SO-RB50及HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达量显著升高（P<0.05）。转染了 pcDNA-DNMT1 的 HXO-RB44 细胞中 DNMT1 蛋白表达增加,细胞增殖能力增加,MEG3 表达量降低;转染了 siRNADNMT1的SO-RB50细胞DNMT1蛋白表达减少,细胞增殖能力降低,MEG3表达量增加（P<0.05）。干扰DNMT1蛋白表达后,MEG3基因启动子DNA甲基化水平降低（P<0.05）。逆转DNMT1蛋白对MEG3基因的调控后,DNMT1蛋白调控RB细胞增殖的能力减弱（P<0.05）。结论 在视网膜母细胞瘤细胞中,DNMT1蛋白表达的上调,诱导了MEG3基因启动子DNA甲基化失活,最终导致细胞异常增殖。     

基质金属蛋白酶、血管内皮生长因子在翼状胬肉中的表达及相关性

目的 探讨基质金属蛋白酶(MMP)和血管内皮生长因子(VEGF)在翼状胬肉组织发生和进展过程中的表达及相关性.方法 采用免疫组化染色法检测正常结膜、翼状胬肉及翼状胬肉静止期、进展期MMP-1、MMP-9、VEGF的表达.结果 MMP-1、MMP-9、VEGF在翼状胬肉组织中各层均有表达,而在正常结膜组织中几乎不表达.翼状胬肉组织中MMP-1、MMP-9、VEGF的阳性表达均强于正常结膜组织(P均＜0.05);MMP-9、VEGF阳性表达进展期强于静止期(P均＜0.05);翼状胬肉组织中MMP-1与MMP-9 、MMP-1与VEGF、MMP-9与VEGF之间的表达均呈正相关(r分别为0.325、0.389、0.505,P均＜0.05).结论 MMP和VEGF与翼状胬肉的发生和发展有密切关系.     

表面麻醉下激光间接检眼镜早产儿视网膜光凝手术临床分析

目的:观察表面麻醉下激光间接检眼镜早产儿视网膜光凝手术的效果,探讨表面麻醉下激光间接检眼镜早产儿视网膜光凝手术的应用价值.方法:阈值前1期及阈值期早产儿视网膜病变患儿共50例(100只眼),在实施心电监护后的表面麻醉下,行激光间接检眼镜早产儿视网膜光凝手术.随访时间3 ～ 12个月.结果:本组病例中,所有激光手术过程中均未出现对视网膜正常组织的误光凝.所有患儿术中均未出现呼吸暂停.患儿术后均获得良好效果.结论:表面麻醉下激光间接检眼镜早产儿视网膜光凝手术,是一种治疗早产儿视网膜病变安全、可靠的手术方式.     

实验性自身免疫性葡萄膜炎T淋巴细胞亚群与Treg细胞的表达研究

目的　探讨实验性自身免疫性葡萄膜炎（ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｕｖｅｉｔｉｓ,ＥＡＵ）新西兰兔模型外周血单个核细胞（ｐｅ-ｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ,ＰＢＭＣ）Ｔ淋巴细胞亚群的变化及其与疾病特征的相关性。方法　选取健康成年雄性新西兰大白兔４０只作为动物模型,用２０ｇ·Ｌ－１牛血清蛋白（ｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎ,ＢＳＡ）静脉注射和玻璃体内注射法建立ＥＡＵ模型,并观察模型眼炎症反应及ＰＢＭＣＴ淋巴细胞亚群特征。结果　ＣＤ４＋Ｔ细胞在ＥＡＵ兔的外周血中比例明显增加,且随时间的进展呈进行性增加,并与炎症反应呈正相关,相同的趋势可见于ＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ细胞比例。此外,Ｔｒｅｇ细胞趋势与ＣＤ４＋Ｔ细胞及ＣＤ４＋Ｔ／ＣＤ８＋Ｔ细胞比例相反,与炎症反应呈负相关。结论　ＣＤ４＋Ｔ细胞的优势性选择性克隆增殖及Ｔｒｅｇ细胞的降低有可能引发免疫功能紊乱并导致针对自身组织的免疫应答失去有效的负性调控,导致ＥＡＵ的发生及进行性加重。     

Ad-siICOS阻断ICOS共刺激通路抑制大鼠角膜移植排斥反应的实验研究

目的 观察携带报告基因GFP且表达ICOS-siRNA的重组腺病毒(Ad-siICOS-EGFP)阻断可诱导共刺激分子(inducible costimulator,ICOS)共刺激通路对角膜移植急性免疫排斥的抑制作用.设计实验性研究.研究对象Wistar大鼠(供体)及SD(受体)大鼠.方法 取Wistar大鼠(供体)...     

lncRNA-MEG3通过P53途径介导视网膜母细胞瘤凋亡

目的 探讨MEG3是否参与视网膜母细胞瘤的形成及其分子机制.方法 应用实时荧光定量PCR技术检测视网膜母细胞瘤组织及瘤旁正常视网膜组织标本中MEG3的表达水平;通过转染pcDNA-MEG3或siRNA-MEG3上调或干扰视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50及HXO-RB44中MEG3的表达水平,随后用流式细胞仪检测转染后的细胞凋亡率变化,用Western blot检测转染前后P53蛋白表达水平的变化.结果 视网膜母细胞瘤组织中MEG3的表达较瘤旁正常视网膜组织出现显著下降(P=0.014).转染了pcDNA-MEG3的SO-RB50细胞MEG3表达显著增加(P =0.002),转柒了siRNA-MEG3的HXO-RB44细胞MEG3表达显著减少(P=0.004).流式细胞仪检测结果显示,MEG3表达上调后的SO-RB50细胞凋亡率显著增加(P＜0.05);干扰MEG3表达后的HXO-RB44细胞凋亡率显著减少(P＜0.05).Western blot检测结果显示,转染了pcDNA-MEG3的SO-RB50细胞中P53蛋白的表达较阴性对照组显著增加(P＜0.05),转染了siRNA-MEG3的HXO-RB44细胞中P53蛋白的表达较阴性对照组显著减少(P＜0.05).结论 视网膜母细胞瘤组织中MEG3的表达下调,且MEG3可能通过促进P53蛋白的表达诱导视网膜母细胞瘤细胞的凋亡,从而影响视网膜母细胞瘤的发生和发展.     

色素上皮衍生因子对角膜碱烧伤后新生血管形成的抑制

背景：角膜新生血管导致角膜透明性降低,造成严重的视觉障碍。色素上皮衍生因子是一种内源性血管生成抑制剂,其对于角膜新生血管是否具有抑制作用尚不清楚。 目的：探索局部运用色素上皮衍生因子对大鼠角膜碱烧伤后角膜新生血管的抑制作用。 方法：将20只大鼠随机分为生理盐水组与色素上皮衍生因子组,每组10只。用NaOH溶液将大鼠右眼角膜烧伤诱导产生新生血管。碱烧伤后2组每日分别给予生理盐水和色素上皮衍生因子点眼,并采用裂隙灯显微镜观察和测量各组角膜新生血管生长情况。碱烧伤后12 d处死大鼠,将角膜组织固定切片,行苏木精-伊红染色观察,并进行免疫组织化学染色检测各组大鼠角膜血管内皮生长因子和CD31的表达。 结果与结论：大鼠角膜碱烧伤后3,7,12 d,色素上皮衍生因子组大鼠角膜新生血管面积均小于生理盐水组(P < 0.05)。角膜碱烧伤后12 d,苏木精-伊红染色显示生理盐水组大鼠角膜产生大量新生血管,角膜组织结构紊乱;色素上皮衍生因子组新生血管较少,角膜组织结构趋于整齐。角膜碱烧伤后12 d,免疫组织化学染色示生理盐水组大鼠角膜上皮和基质层可见血管内皮生长因子大量表达,角膜基质层可见血管内皮生长因子和CD31大量表达;色素上皮衍生因子组新生血管稀少,CD31表达较弱。证实局部应用色素上皮衍生因子可有效抑制大鼠角膜化学伤后的血管新生。