类鼻疽伯克霍尔德菌经鼻感染BALB/c小鼠模型的构建与评价

目的 构建类鼻疽伯克霍尔德菌（Burkholderia pseudomallei, BP）经鼻感染BALB/c小鼠动物模型,为后续类鼻疽菌的毒力研究和急性类鼻疽的致病机制研究提供可靠的动物模型。方法 采用经鼻主动吸入的感染途径,通过大体解剖、组织病理和组织匀浆计数菌落等方法观察类鼻疽伯克霍尔德菌感染小鼠的病理生理反应、脏器病理损伤和细菌定植情况,分析急性类鼻疽感染小鼠模型的生物学特征,并比较致病性类鼻疽临床株与非致病性类鼻疽泰国株（伯克霍尔德菌）感染BALB/c小鼠的不同表现。结果 急性类鼻疽菌经鼻感染模型中,BALB/c小鼠死亡多集中在感染后第3到第5天,3×10⁵~3×10⁶ CFU可作为急性类鼻疽BALB/c小鼠病死模型的合适攻毒剂量,而半数致死量约在3×10⁴~3×10⁵ CFU。大体解剖和组织HE染色均可见肺脏、脾脏和肝脏组织中形成脓肿或坏死病灶,其中在脾脏最明显,并与攻毒剂量呈正相关。类鼻疽菌感染的小鼠血液、肺脏、脾脏及肝脏中均发现类鼻疽菌定植,且定植量与组织特异性有关,血液中分离到的活菌浓度最高[Log₂对数值：（10.28±0.34） CFU/mL],定植总量最高的脏器是肺脏[Log₂对数值：（7.54±2.11） CFU]。虽然类鼻疽伯克霍尔德菌与伯克霍尔德菌株在细胞水平上的生物学效应类似（多核巨细胞形成、胞内增殖等）,但是对BALB/c小鼠的毒性差异显著。伯克霍尔德菌即使在高剂量（8×10⁷ CFU）时对小鼠仍是非致死性的,而且无法在小鼠脏器中有效定植。结论 成功构建了经鼻吸入性感染BALB/c小鼠的急性类鼻疽动物模型,明确了类鼻疽菌造成的组织病理损伤特点,发现了类鼻疽伯克霍尔德菌与伯克霍尔德菌株在动物水平上的显著生物学差异。     

医学检验专业新生研讨课对职业规划讨论的实践与思考

正由于国家教育部对医学检验专业本科教育的修订改革,全国各普通高校自2013年起按四年制理学学士培养方案安排招生培养工作。作为目前全国唯一的五年制本科医学检验专业,如何应对学制的改革,在转变中培养人才是当务之急。通过新生研讨课的方式,对本校五年制检验本科专业新学员开展未来职业规划的探讨,初探本专业新生研讨课的教学改革实践,分析开设新生研讨课的基本思路,探讨并总结能够激发学     

肠道病原体疫苗研究进展(续)

肠道感染每年在世界范围内造成约170万～250万人死亡,居所有疾病的第三位.引起肠道感染的病原体主要有病毒(如肠道腺病毒、星状病毒、人杯状病毒和轮状病毒)和细菌(如空肠弯曲菌、致病性大肠杆菌、志贺菌、伤寒沙门菌和霍乱弧菌).目前伤寒和霍乱疫苗的效力较好,但尚无有效预防人杯状病毒、弯曲菌、产肠毒素大肠杆菌和志贺菌的疫苗.新型口服轮状病毒疫苗已得到研发,并准备申请上市.本文综述了预防肠道病毒或细菌性传染病的疫苗的研发状况.     

幽门螺杆菌Cag毒力岛

幽门螺杆菌有一个长约40kb的毒力岛,名为细胞毒素相关基因(Cag),编码CagA等毒力因子。具有Cag毒力岛的幽门螺杆菌在临床上表现出与胃炎、胃溃疡及胃癌更为密切的关系。本文就幽门螺杆菌的Cag毒力岛作一介绍。     

幽门螺杆菌Cag毒力岛

幽门螺杆菌有一长约４０ｋｂ的毒力岛，名为细胞毒素相关基因，编码ＣａｇＡ等毒力因子。具有Ａａｇ毒力岛的幽门螺杆菌在临床上的表现出与胃炎、胃溃疡及胃癌更为密切的关系。本文就幽门螺杆菌的Ｃａｇ毒力岛作一介绍。     

免疫磁分离及免疫比浊分析对福氏志贺菌的自动快速定量检测

目的 以SPA包被的磁珠和富含SPA的金黄色葡萄球菌分别与福氏志贺菌的多抗血清结合,制备福氏志贺菌特异的多抗磁珠和抗体致敏的金黄色葡萄球菌作为协同凝集试剂与免疫比浊试剂,利用免疫比浊分析探索其在福氏志贺菌自动快速定量检测中的初步应用.方法 福氏志贺菌F1a免疫日本大耳白兔制备多抗血清,磁珠包被SPA后再与多抗偶联,制成多抗免疫磁珠.以该磁珠捕获模拟标本的福氏志贺菌,接种MH平板37℃培养18～24 h,菌落计数后计算免疫磁珠的特异富集作用.富含SPA的金黄色葡萄球菌(No 1800株)经甲醛灭活后,与福氏志贺菌的多抗血清结合,制备特异抗体致敏的金黄色葡萄球菌,作为协同凝集试剂和自动定量检测的免疫比浊试剂,在日立7060全自动生化分析仪编制程序进行自动检测并进行初步的方法学评价.结果 福氏志贺菌Fla免疫日本大耳白兔获得了高质量的多抗血清,特异性好,凝集效价达1:320;制备多抗免疫磁珠对福氏志贺菌具有一定的富集作用,菌落计数显示磁珠处理的细菌捕获效率约为30%;抗体致敏的金黄色葡萄球菌,作为协同凝集试剂和自动定量检测的免疫比浊试剂,在玻片上能与待测福氏志贺菌产生明显的凝集现象,在日立7060全自动生化分析仪上定量检测灵敏、特异、线性良好.结论以福氏志贺菌的多抗血清分别致敏SPA包被的磁珠和富含SPA的金黄色葡萄球菌,制备特异的多抗磁珠对福氏志贺菌有一定的特异捕获与富集作用,抗体致敏的金黄色葡萄球菌作为协同凝集试剂与免疫比浊试剂对福氏志贺菌的自动、快速、定量检测具有较好的效果,为病原菌的快速诊断和自动定量分析提供了新的思路.     

临床免疫学与免疫检验课程设计性实验教学的探索与实践

以“酶联免疫吸附试验检测乙肝表面抗原方法的建立”设计性实验的实施过程为例对临床免疫学与免疫检验课程设计性实验教学中的选题、实施、总结及教学方法进行了探索与实践,进一步阐明了设计性实验对学生实践能力、观察能力、分析能力、解决问题能力、创新能力培养的重要作用。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA与IntiminC300融合蛋白的构建表达

目的构建表达肠血性大肠杆菌（EHEC）0157：H7Ⅲ型分泌蛋白EspA与紧密粘附素G端免疫保护性片断（Intindn C300）的融合蛋白（EspA-IntiminC300）。方法采用PCR技术从EHEC0157lH7基因组中扩增EspA的编码基因espA及IntiminC300的编码基因eaeC300，T-A克·隆后依次构建至表达载体pET-28a（＋），转化宿主细胞E．coliBL21（DE3），测序鉴定，IPTG诱导表达，SDS-PAGE检测其表达量及表达形式，亲和层析法纯化目的蛋白，免疫印迹分析免疫反应性。结果PCR法自EHEC0157tH7基因组中分别扩增出了约580bp（espA）和900bp（eaeC300）的目的片段，将二者融合构建了重组质粒pET-28a（＋）-espA-eaeC300，测序结果与理论预测值一致性为99．9％（1501／1502）。融合蛋白在工程菌中表达量约40％，PAGE初步测定目的蛋白的相对分子量（Mr）约54×10^3Da，破菌后电泳证实目的蛋白主要以包涵体形武表达，包涵体洗涤后纯化，获得目的蛋白纯度约90％。免疫印迹显示融合蛋白能分别与兔抗EspA和IntiminC300血清发生免疫反应。结论高效表达了融合蛋白（EspA-IntiminC300），此融合蛋白具有良好的免疫反应性和免疫原性，为研制EHEC0157：H7多亚单疫苗奠定了基础。     

MLST分析在病原微生物基因分型应用中的研究进展

鉴别细菌的方法有很多,其中有针对其表型、特异性的血清型的方法;还有单克隆抗体等免疫学分型,(这些方法的缺点是其有限的抗原不能够代表全基因组的,不能预测分型反应)。然而随着分子生物学技术的不断发展,微生物的基因分型已占据了十分重要的地位。尤其是病原微生物在其存活     

单克隆抗体技术的启发式教学

单克隆体技术为二十一世纪生物研究的三大实验技术之一（另两项为生物化学分离技术和DNA重组技术）,极大地推动了医学生物学和免疫学的发展。检验医学专业也把单克隆抗体技术作为免疫学检验课程的重要内容。此技术操作一个流程需数月时间,不适地安排此内容的教学实习,一般仅限于理论课讲授,这给学生掌握此技术带来了一定困难。作通过以下教学方式的改进,使学生易于掌握这部内容,收到了一定的效果