类鼻疽伯克霍尔德菌经鼻感染BALB/c小鼠模型的构建与评价

目的 构建类鼻疽伯克霍尔德菌（Burkholderia pseudomallei, BP）经鼻感染BALB/c小鼠动物模型,为后续类鼻疽菌的毒力研究和急性类鼻疽的致病机制研究提供可靠的动物模型。方法 采用经鼻主动吸入的感染途径,通过大体解剖、组织病理和组织匀浆计数菌落等方法观察类鼻疽伯克霍尔德菌感染小鼠的病理生理反应、脏器病理损伤和细菌定植情况,分析急性类鼻疽感染小鼠模型的生物学特征,并比较致病性类鼻疽临床株与非致病性类鼻疽泰国株（伯克霍尔德菌）感染BALB/c小鼠的不同表现。结果 急性类鼻疽菌经鼻感染模型中,BALB/c小鼠死亡多集中在感染后第3到第5天,3×10⁵~3×10⁶ CFU可作为急性类鼻疽BALB/c小鼠病死模型的合适攻毒剂量,而半数致死量约在3×10⁴~3×10⁵ CFU。大体解剖和组织HE染色均可见肺脏、脾脏和肝脏组织中形成脓肿或坏死病灶,其中在脾脏最明显,并与攻毒剂量呈正相关。类鼻疽菌感染的小鼠血液、肺脏、脾脏及肝脏中均发现类鼻疽菌定植,且定植量与组织特异性有关,血液中分离到的活菌浓度最高[Log₂对数值：（10.28±0.34） CFU/mL],定植总量最高的脏器是肺脏[Log₂对数值：（7.54±2.11） CFU]。虽然类鼻疽伯克霍尔德菌与伯克霍尔德菌株在细胞水平上的生物学效应类似（多核巨细胞形成、胞内增殖等）,但是对BALB/c小鼠的毒性差异显著。伯克霍尔德菌即使在高剂量（8×10⁷ CFU）时对小鼠仍是非致死性的,而且无法在小鼠脏器中有效定植。结论 成功构建了经鼻吸入性感染BALB/c小鼠的急性类鼻疽动物模型,明确了类鼻疽菌造成的组织病理损伤特点,发现了类鼻疽伯克霍尔德菌与伯克霍尔德菌株在动物水平上的显著生物学差异。     

中老年与青年特发性膜性肾病临床病理特点分析研究

目的 探讨不同年龄段的特发性膜性肾病(IMN)患者临床病理特点。方法 回顾性分析2014年1月~2020年3月首都医科大学附属北京天坛医院经肾活检确诊并排除继发因素的IMN患者,根据年龄分为青年(≤35岁),中年(36~59岁)和老年(≥60岁)组。比较3组之间的临床和病理资料。结果 共有79 例患者纳入研究。与青、中年组IMN患者比较,老年组患者病程长(P=0.037),合并高血压(P=0.028)、糖尿病比例高(P=0.000),肾小球滤过率低(eGFR)(P=0.000),血红蛋白低(P=0.001)。3组收缩压、舒张压、24h尿蛋白定量、血尿、尿素氮、尿酸、白蛋白、甘油三酯、总胆固醇比较,差异无统计学意义。病理方面,与中青年组IMN患者比较,老年组肾小球硬化比例高,差异有统计学意义(P=0.048)。老年组肾小管萎缩、肾小管间质纤维化、炎性细胞浸润比例均高于中、青年组,但差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 不同年龄段的IMN 患者临床病理特点差异有统计学意义,老年IMN患者起病时临床病理表现重的比例增加。     

益肾缓衰口服液对肾大部切除大鼠残肾内VEGF表达的影响

目的：探讨益气养血活血的中药复方益肾缓衰口服液（HSR）对血管内皮生长因子（VEGF）在肾大部切除（SNX）大鼠残肾内表达的影响及其意义。方法：雄性Wistar大鼠76只,随机分为假手术组（n=16）,模型组（n=20）：5／6肾切除＋自来水10ml·kg^-1·d^-1灌胃,益肾缓衰口服液组（n=20）：5／6肾切除＋HSR 10ml·kg·d灌胃,氯沙坦钾（LST）组（n=20）：5／6肾切除＋Losartan40mg·kg^-1·d^-1灌胃。分别于术后2、4、8、12周采样,测血清Scr、尿蛋白定量,分别行光镜和电镜观察残肾组织病理变化;免疫组化SP法进行VEGF染色,ELISA法检测皮质部肾组织相对VEGF含量,分析VEGF表达的动态变化对肾功能和蛋白尿排泄量的影响以及与肾小球硬化指数的关系。结果：在SNX大鼠模型中,VEGF的表达随观察时间的延长而逐渐降低,与Scr、Upro的动态变化均呈负相关,r分别为：-0．59和-0．48;与肾小球硬化指数呈负相关（r=-0．73,P〈0．01）。与模型组比较,缓衰方组和氯沙坦组的VEGF表达水平在整个观察周期内相对稳定,肾功能损害和病理改变相对较轻。结论：在SNX大鼠中,HSR与血管紧张素Ⅱ受体1拮抗剂（氯沙坦）具有相似的作用,均可减少蛋白尿、保护肾功能、减轻肾小球硬化,这种肾保护作用可能与其稳定残余肾内VEGF表达水平有关。     

马兜铃酸和庆大霉素对大鼠急性肾小管坏死模型肾组织氧合水平的影响

目的 探讨马兜铃酸(AA)及庆大霉素所致急性肾小管坏死(ATN)大鼠的肾组织氧合水平特点.方法 28只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=12)、马兜铃酸钠模型组(AAN组,n=7)和庆大霉素组(GM组,n=9),分别背部皮下注射生理盐水、马兜铃酸钠盐生理盐水溶液(AA-I25 mg·kg-1·d-1)和庆大霉素(200 ng·kg-1·d-1)共4 d,于给药后第7天处死.给药后第4天及第7天行大鼠肾脏BOLD MR成像,并留取血、尿及肾脏标本,观察肾功能及肾脏病理改变.结果 AAN组大鼠第7天时血肌酐及尿NAG酶水平显著增高,肾脏病理结果显示,病变部位主要位于皮髓交界区,表现为肾小管弥漫性坏死,无间质水肿或炎细胞浸润.BOLD-MRI显示,AAN组与对照组相比,肾髓质R2*在第4天[(50.6±15.6)/s vs(35.6±4.3)/s,P＜0.01)和第7天[(58.4±14.8)/svs(37.8±3.6)/s,P＜0.01)均显著升高,肾皮质R2*在第7天较对照组显著升高[(40.3±14.7)/svs(28.7±3.2)/s,P＜0.05].GM组大鼠第7天时血肌酐及尿NAG酶水平均显著升高,但其肾脏R2*变化趋势与AAN组明显不同,主要表现为肾皮质R2*值在第7天较对照组明显降低[(17.7±2.7)/s vs(28.7±3.2)/s,P＜0.01].结论 急性AAN大鼠模型中肾组织存在缺氧,其特征为肾髓质的氧合水平降低早期出现并持续存在,肾皮质的氧合水平在后期逐渐降低,AAN与GM所致ATN有所不同,可能是促进肾间质纤维化持续进展的原因之一.     

两种不同溶剂提取大黄中游离蒽醌化合物的比较实验

目的探讨在实验教学中用95%乙醇替代氯仿作为溶剂,提取大黄中游离蒽醌化合物的可行性。方法分别使用氯仿和95%乙醇作为溶剂进行游离蒽醌化合物的提取,采用pH梯度萃取法进行分离,分别得到大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚及大黄素甲醚,比较所得4种游离蒽醌化合物的平均产量,同时进行化学检识及纸色谱检识。结果使用两种不同溶剂提取分离所得到的4种游离蒽醌化合物平均产量无明显差异,化学检识与纸色谱检识结果基本一致。结论 95%乙醇完全可以替代氯仿,满足实验教学的需要。     

卫生士官药物化学实验课教学改革探索

实验课教学是卫生士官药物化学教学的重要组成部分,通过精心设计实验内容,恰当选用教学方法,既使学员加深理论知识的理解、掌握基本操作技能,又能提高其分析问题、解决问题的能力以及组训能力,并培养其创新意识和创新能力。     

缓衰方对肾大部切除大鼠肾内微血管重塑的影响

目的：探讨益气养血活血的中药复方——益肾缓衰口服液对肾大部切除（SNX）大鼠残肾内微血管重塑的影响。方法：雄性Wistar大鼠76只,随机分为4组。假手术组（n=16）：假手术＋自来水10ml·kg-1·d-1灌胃;模型组（n=20）：5/6肾切除＋自来水10ml·kg-1·d-1灌胃;缓衰口服液组（n=20）：5/6肾切除＋益肾缓衰口服液10ml·kg-1·d-1灌胃;氯沙坦钾组（n=20）：5/6肾切除＋氯沙坦钾40mg·kg-1·d-1灌胃。分别于术后2、4、8、12周取肾组织PAS染色观察病理改变;免疫组化SP法进行APP、FN和Col-Ⅳ染色,结合图像分析,评价肾小球微血管面积和肾间质微血管数动态变化及其与细胞外基质（ECM）成分（FN和Col-Ⅳ）表达的关系。结果：在大鼠SNX模型中,残余肾间质毛细血管数和肾小球毛细血管襻相对面积随时间呈逐渐下降趋势,肾小球的毛细血管襻相对面积与Col-Ⅳ、FN的表达水平呈负相关（r分别为-0.598和-0.601,P〈0.001）;缓衰口服液组和氯沙坦钾组其微血管丢失和ECM积聚程度较轻。结论：在SNX大鼠中,缓衰口服液与血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（氯沙坦钾）具有相似的减少肾内微血管丢失从而减轻肾小球硬化的作用。     

黄芪当归合剂肾脏保护作用的有效部位筛选

目的:以肾间质纤维化模型大鼠的肾功能及肾小管间质损伤指数改善为药理活性指标,对黄芪当归合剂(AA)进行分离和筛选,获得其肾脏保护作用的药物有效部位。方法:应用溶剂法和色谱法逐级对AA进行追踪分离,分别获得11个不同部位。同时将Wistar大鼠随机分为假手术组、单侧输尿管梗阻(UUO)模型组、AA组及不同部位治疗组。灌胃给药后观察AA各部位对UUO大鼠肾损伤的疗效。治疗10 d后经腹主动脉取血检测血清肌酐(Scr)和尿素(Urea)水平;同时观察梗阻侧肾脏的病理变化,并对肾间质细胞浸润、肾小管萎缩和肾间质纤维化等病理损伤的程度(PI-Ⅰ)进行半定量评分,以PI-Ⅰ改善作为主要疗效、肾功能改善作为次要疗效,筛选获得具有最佳药理活性的有效部位。结果:在溶剂法分离获得的7个不同极性部位中,组分I和IC均具有改善肾功能、减轻肾小管间质损伤的疗效,其肾脏保护作用与AA疗效相近;而色谱法分离IC得到的4个部位对Scr,Urea及PI-I均无改善作用。结论:在UUO大鼠模型中,源自复方中药AA的组分I和IC具有与原方剂相似,具有抑制肾间质纤维化的作用,可确认为AA肾脏保护作用的有效部位。