TACE联合CIK治疗原发性肝癌方案分析

目的探讨对原发性肝癌患者进行肝动脉栓塞化疗（TACE）联合CIK细胞免疫治疗方案的临床价值。方法选取治疗效果明显的1例原发性肝癌病例进行分析,患者于TACE术后2周开始序贯完成3个疗程经肝动脉CIK细胞回输及3个疗程经外周静脉CIK细胞回输,同时对患者各项检查指标进行持续监测。结果 18个月后复查结果显示肝功能未见明显异常,AFP正常,HBV-DNA拷贝降低转阴,机体免疫水平提高,肝脏CT未见复发。结论 TACE联合CIK细胞免疫治疗是一种新型的原发性肝癌综合治疗方法,它在杀伤肿瘤细胞的同时还能明显降低乙肝病毒体内含量,提高机体免疫力,从而阻断致癌因素,对抑制肝癌的复发和转移具有重要意义。     

慢性乙型肝炎患者幽门螺杆菌感染分析

<正>当前全世界感染过乙型肝炎病毒(HBV)的人数达20亿以上,其中约有3～3.5亿人成为慢性HBV感染者,我国作为HBV感染大国,HBsAg携带者约有1.2亿人,约占世界HBV感染者的1/3[1]。近年来,国内外流行病学研究发现慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化和原发性肝癌患者幽门螺杆菌血清阳性率明显高于健康者[2]。木研究采用病例对照     

乳腺癌特异性转导小肽融合表达载体的构建以及目的蛋白的表达

目的构建乳腺癌特异性转导小肽PI-增强型绿色荧光蛋白融合蛋白的原核表达载体,并进行目的蛋白的表达、分离和纯化。方法合成PI的DNA序列,将其定向插入到p EGFPN2中,经双酶切获取PI-EGFP的核苷酸序列,再将其克隆入原核表达质粒pET-28a(+),构建出pET-28a(+)-PI-EGFP的原核表达载体;重组质粒转化BL21(DE3)pLysS感受态细胞,经IPTG诱导表达,利用His-tag对蛋白进行分离纯化,SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹免疫分析(Western blot)鉴定纯化蛋白质。结果成功构建了pET-28a(+)-PI-EGFP的原核表达载体;其经诱导后,在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白以可溶性形式存在;SDS-PAGE分析显示,在相对分子量约33kD的位置出现目的蛋白条带,与理论值相符;经His TALONTM Cartridge亲和层析纯化获得了高纯度的重组的PI-EGFP融合蛋白,Western blot鉴定结果显示获得了目的蛋白。结论成功构建出乳腺癌特异性转导小肽PI-增强型绿色荧光蛋白融合蛋白原核表达载体,并能够表达出PI-EGFP的融合蛋白,为进一步研究小肽的乳腺癌特异性转导功能奠定基础。     

靶向磁性热疗对小鼠结肠癌皮下移植模型作用的观察

目的:以小肠黏膜下层(SIS)吸附磁颗粒作为热疗介质,研究靶向磁热疗对小鼠结肠癌皮下移植模型的作用.方法:选择Balb/c雌性小鼠66只,4～6周龄,体质量22～25 g,CT26结肠癌细胞皮下注射建立小鼠模型.将磁流体颗粒沉淀于置备好的SIS上,手术植入实验组小鼠结肠癌组织周围进行包裹.每24 h将实验组小鼠暴露在突变磁场下60 min,共3次.对应设置空白对照组,SIS对照组,磁流体对照组,磁场对照组进行对比研究,每组11只.观察各组小鼠的肿瘤生长情况和小鼠生存时间,检测各组小鼠各主要脏器的病理变化.结果:磁热疗作用后,实验组肿瘤中心温度在15 min后稳定在43℃,而正常组织温度则始终稳定在24℃.病理检测显示,各组小鼠各主要脏器未见明显结构异常.与各对照组相比较,实验组小鼠肿瘤生长受到显著抑制,P＜0.05;生存时间显著延长,P＜0.05.结论:以SIS吸附磁颗粒作为热疗介质的靶向磁热疗能显著抑制小鼠结肠癌模型的肿瘤生长,延长小鼠生存时间.靶向磁热疗的进一步研究有可为结肠癌治疗提供新的方法.     

人源性CD3抗体诱导食蟹猴T淋巴细胞培养方法的建立

目的： 在初步分析人、食蟹猴和猪CD3蛋白同源性的基础上,建立利用人源性CD3抗体诱导食蟹猴外周血T淋巴细 胞的体外分离培养技术。 方法： 从NCBI 查询获取人类、食蟹猴和猪CD3蛋白各自的氨基酸序列,并用DNAMAN 软件进行序列 比对、同源性分析和构建系统进化树。Western blotting检测三种T细胞膜上CD3蛋白的表达水平。分离健康食蟹猴PBMC,分为 3组,A组加入抗人CD3抗体单刺激、B组加入IL-2单刺激、C组加入抗人CD3抗体和IL-2共刺激。倒置显微镜下观察细胞生 长状态并计数,绘制细胞生长曲线,锥虫蓝染色检测细胞活性,流式细胞术检测T细胞表面标志物CD3、CD4、CD8的表达。 结 果： 食蟹猴、猪的CD3蛋白氨基酸序列与人类的同源性分别为86.9% 、65.6%,T细胞膜上CD3蛋白的表达量分别为人的79%、 17%。A组细胞不增殖;C组细胞增殖能力、细胞活性及CD3表达率［(93.8±3.6)% vs (70.3±4.7)%,P<0.01］均显著高于B组,细胞 生长曲线呈S形,符合Logistic生长曲线;C组T细胞高表达CD3,T细胞纯度较高,且CD8 + T 细胞占比较多。 结论： 食蟹猴外周血 T淋巴细胞膜表面能表达和人同源性很高的CD3蛋白,在人源性CD3抗体、IL-2和1%PHA共刺激下能诱导食蟹猴外周血T淋巴 细胞的增殖分化,获得生长状态良好、增殖能力强、纯度较高的T淋巴细胞。     

人乳腺癌细胞特异性多肽跨膜转导机制初步研究

目的:初步探讨人乳腺癌细胞MDA-MB-231特异性多肽PI的跨膜转导机制.方法:合成PI肽链,并在其N端进行FITC标记;探讨FITC-PI的跨膜转导与MHC-Ⅰ表达的关系,利用MHC-Ⅰ抗体阻断MDA-MB-231细胞和Calu-1细胞表面MHC-Ⅰ抗原,聚合酶链反应-序列特异性引物法进行基因分析;探讨FITC-P...     

CXCR4-siRNA表达载体的构建及其对体外乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的 构建趋化因子受体（CXCR4）小分子干扰RNA ( siRNA) 表达载体,研究其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法 选择CXCR4高表达的乳腺癌MDA-MB-231细胞株,设计合成人CXCR4基因不同靶点的能编码siRNA的2条双链DNA序列,克隆到真核表达载体pGE-1-U6/kna中构建siRNA表达载体,体外脂质体介导转染MDA-MB-231细胞,用Western blot分析CXCR4蛋白表达,transwell 小室检测细胞的侵袭能力。结果 成功构建了CXCR4-siRNA表达载体,瞬时转染乳腺癌细胞后能显著降低CXCR4的蛋白表达,可有效抑制人类乳腺癌MDA-MB-231细胞的侵袭能力。结论 CXCR4- siRNA表达载体通过降低CXCR4基因的蛋白表达能显著抑制人类乳腺癌细胞的侵袭能力,有望为乳腺癌转移的基因治疗开辟新途径。     

动脉介入法向猪胰腺注射Fe3O4磁流体

目的 探讨通过动脉介入方式向猪的胰腺注射Fe3O4磁流体的可行性。方法采用seldinger法,经股动脉将SP管插到脾动脉,向胰腺供血动脉注射浓度为100mg/ml的Fe3O4磁流体1ml。磁流体注射6天后处死实验动物,取其胰腺及其他内脏器官,行组织切片HE染色。结果通过动脉介入的方式成功向胰腺内注射磁流体,经病理检查显示磁流体分布于注射部位胰腺内,其他脏器未见明显的磁流体分布。结论通过动脉介入方式向胰腺内注射磁流体是可行的,并没有引起胰腺组织的明显损伤。     

不同新辅助化疗方案对三阴性乳腺癌治疗疗效临床分析

目的观察新辅助化疗提高三阴性乳腺癌(TNBC)手术切除的近期疗效及3种不同新辅助化疗方案的治疗效果.方法 150例局部晚期TNBC患者随机分为3组,每组各50例,A组采取TAC(多西他赛+表阿霉素+环磷酰胺)方案,B组采取TC(多西他赛+环磷酰胺)方案,C组采取CEF(表阿霉素+氟尿嘧啶+环磷酰胺)进行新辅助化疗,观察化疗后近期疗效与不良反应.结果 TAC组有效率为92.0%,TC组为84.0%,CEF组为76.0%,3组化疗方案1~5周期均使同侧腋淋巴结缩小,且TAC组优于TC、CEF组(P<0.05),3组中不良反应因予预防干预,均较少.结论 TNBC对多西他赛+表阿霉素+环磷酰胺较多西他赛+环磷酰胺及表阿霉素+氟尿嘧啶+环磷酰胺新辅助化疗更敏感,更易获c CR.     

乳腺癌特异性多肽介导的HSV-TK/GCV系统的构建及其靶向杀伤效应

目的:研究乳腺癌MDA-MB-231细胞特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统对乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外靶向杀伤作用。方法:以PCR从质粒pORF-HSV-TK中扩增目的基因PI-TK,克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建pET-28a(+)-PI-TK载体,转化宿主菌,经IPTG诱导表达PI-TK融合蛋白,利用His-Tag对其进行纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白。将不同质量浓度的PI-TK融合蛋白与MDA-MB-231细胞共培养,联合更昔洛韦(ganci-clovier,GCV)作用后,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,CCK-8法检测MDA-MB-231细胞的增殖。结果:成功构建了重组原核表达载体pET-28a(+)-PI-TK,获得纯化的PI-TK融合蛋白,SDS-PAGE及Western blotting鉴定PI-TK融合蛋白表达正确。单独PI-TK融合蛋白不影响MDA-MB-231细胞的形态和增殖,但PI-TK融合蛋白联合GCV能剂量依赖性靶向抑制MDA-MB-231细胞的增殖,200μg/ml PI-TK+10 mg/LGCV作用的抑制率达(68.9±7.57)%;PI-TK联合GCV抑制MDA-MB-231细胞的IC50值为152.64μg/ml。上述各作用对MDA-MB-435细胞均无影响(P<0.05)。结论:乳腺癌特异性转导多肽PI介导的HSV-TK/GCV抗瘤系统可靶向杀伤MDA-MB-231细胞。