狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的作用研究

目的：通过建立H2O2 导致人脐静脉内皮细胞损伤的模型来研究狭鳕鱼皮胶原蛋白肽作用。方法：用人脐静脉内皮细胞作为体外研究对象,采用不同的浓度（40M、200M、400M）胶原蛋白和维生素E预处理12h,然后在加入50uM H2O2继续培养12h造成损伤模型。模型成功后用CCK-8检测吸光度,根据试剂盒操作检测细胞内及培养上清液谷胱甘肽过氧化物酶（GXH-PX）,一氧化氮（NO）、过氧化氢酶（CAT）,丙二醛（MDA）等指标的含量和活性变化。结果：经胶原蛋白预保护后细胞增值率升高,GXH-PX、CAT等活性增强,NO含量升高,丙二醛含量降低。     

牛蒡根药材的质量标准研究

目的:建立牛蒡根药材的质量标准。方法:采用薄层色谱(TLC)法对牛蒡根中的齐墩果酸进行定性鉴别;对药材的水分、总灰分、浸出物进行测定。采用高效液相色谱(HPLC)法测定牛蒡根药材中绿原酸的含量:色谱柱为Alltima C18(250 mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液(13∶87,V/V),流速为1 ml/min,柱温为30℃,检测波长为327 nm。结果:TLC鉴别中,供试品在对照品、对照药材色谱相应位置上显示相同颜色的荧光斑点;对药材水分、总灰分、浸出物含量进行了限定;绿原酸进样量在0.140 8¹.056 0μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为99.48%(RSD=1.34%,n=6)。结论:该方法专属性强,能准确进行定性和定量检测,可用于牛蒡根药材的质量控制。     

中波紫外线诱导HaCaT细胞凋亡与扇贝多肽的影响：肿瘤坏死因子α/肿瘤坏死因子受体1通路的研究

背景：扇贝多肽可以通过Fas通路及NF-κB通路发挥对中波紫外线照射后的人角质形成细胞株(HaCaT)的保护作用。 目的：观察中波紫外线辐射后HaCaT细胞的凋亡情况和细胞内肿瘤坏死因子α/肿瘤坏死因子受体1的活化情况,以及扇贝多肽的干预作用。 方法：实验以20 mJ/cm2中波紫外线辐照HaCaT细胞0.5 h建立细胞辐射损伤模型,药物低、中、高剂量组、阳性对照组、抑制剂组分别在造模前2 h加入1.42,2.84,5.69 mmol/L的扇贝多肽、5.68 mmol/L的维生素C及50 mg/L的抗肿瘤坏死因子α单克隆抗体。 结果与结论：中波紫外线辐照后,HaCaT细胞凋亡增多,肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子受体1 mRNA及磷酸化JNK蛋白表达量增加;1.42,2.84,5.69 mmol/L的扇贝多肽均可降低中波紫外线辐照引起的细胞内肿瘤坏死因子α、肿瘤坏死因子受体1 mRNA及磷酸化JNK表达,抑制HaCaT细胞凋亡,以5.69 mmol/L扇贝多肽的作用效果最明显,与5.68 mmol/L维生素C的作用相当,且50 mg/L抗肿瘤坏死因子α单克隆抗体也可明显降低中波紫外线辐照引起的细胞内磷酸化JNK表达。说明扇贝多肽能抑制中波紫外线辐照引起的HaCaT细胞凋亡,其可以通过肿瘤坏死因子α/肿瘤坏死因子受体1通路发挥抗凋亡作用。     

柱前衍生化HPLC法检测兔血浆和肝组织中左卡尼汀及其代谢物的含量

目的：建立兔血浆和肝组织中左卡尼汀（LC）及其代谢物的柱前衍生化高效液相（HPLC）的分析方法,检测兔内源性LC、乙酰卡尼汀（ALC）和丙酰卡尼汀（PLC）及单次灌胃后LC、ALC和PLC在血浆和肝组织的含量。方法：采用新西兰大耳兔,以1mL/kg的剂量单次灌胃给予左卡尼汀,在药前（0h）和药后取血浆（1、3、7h）和肝组织（7h）,采用柱前衍生化HPLC法检测血浆和肝组织中LC、ALC和PLC的含量。结果：兔血浆和肝组织中LC、ALC和PLC的线性范围分别是2～200、0.2～40和0.1～8μmol/L;日内、日间精密度均小于4.12%;平均方法回收率在80%～95%之间。空白兔血浆LC、ALC和PLC的浓度分别为15.8、2.2和0.5μmol/L,空白兔肝组织的浓度分别为24.8、4.6和2.1μmol/g。给药7h后,LC、ALC和PLC在血浆和肝组织中的浓度明显升高。结论：本方法简单、可靠、精密度高。给药7h后,LC在体内的吸收过程中,发生了左卡尼汀乙酰化和丙酰化的过程,LC代谢成为ALC和PLC,并且其在肝组织中的浓度明显大于血浆,证明LC、ALC和PLC很快从血浆转移到肝组织中去。     

睫状神经营养因子对应激大鼠体质量的影响及其机制探讨

①目的　探讨睫状神经营养因子 (CNTF)对躯体性和心理性应激大鼠体质量的影响及其与下丘脑促肾上腺皮质素释放激素 (CRH)含量的关系。②方法　建立应激大鼠动物模型 ,应用鼠脑立体定向方法 ,在应激前给予大鼠双侧海马微量注射CNTF ,称量大鼠应激前后的体质量变化 ,并用放射免疫分析法测定大鼠下丘脑CRH含量的变化。③结果　在应激前及应激期间给予双侧海马微量注射CNTF ,可以有效改善应激引起的大鼠体质量的下降 (t=2 .16 3.86 ,P <0 .0 5 ,0 .0 1) ,改善应激引起的下丘脑CRH含量的升高 (t=3.0 5 4.0 3,P <0 .0 1)。④结论　CNTF可以改善应激对大鼠生长的损害 ,其机制可能与CNTF降低应激大鼠下丘脑CRH的含量有关。     

药理学实验教学改革探讨

目的探讨高等医学院校实施药理学实验教学改革的意义和手段.方法实验教学模式改革：二步法实验教学模式的实施及多种教学方法的应用;教学手段的改革：更新设备及多媒体的应用;根据实际情况对实验教材及实验内容的调整;对实验考核方式及内容的改革.结果通过四方面的改革提高了学生的实践能力和创新意识,激发了学生的学习兴趣和学习主动性,有利于药理学实验教学质量与科研水平的提高.结论我院所采用的四方面教学改革对药理学实验教学的质量与科研水平的提高具有重要意义.     

羊栖菜多糖对氧化应激人成纤维细胞的保护作用

目的研究羊栖菜多糖对氧化应激的人皮肤成纤维细胞的保护作用及机制。方法以0.8 mmol/L H2O2诱导人皮肤成纤维细胞建立氧化应激模型,MTT法测定不同浓度羊栖菜多糖(15、30、60mg/L)对过氧化氢(H2O2)损伤人皮肤成纤维细胞增殖的影响,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡,流式细胞仪测定细胞周期分布。测定细胞丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、还原性谷胱甘肽(GSH)水平和活性氧(ROS)水平。结果羊栖菜多糖可抑制H2O2对人皮肤成纤维细胞增殖活性的下降和凋亡率的上升,维持细胞正常形态。流式细胞仪检测表明,羊栖菜多糖能显著降低H2O2损伤的细胞G0/G1期阻滞现象;升高SOD和GSH-Px活力,降低MDA和ROS水平,升高GSH水平,差异有统计学意义且具有剂量依赖性(P<0.05,P<0.01)。结论羊栖菜多糖能减轻H2O2对人皮肤成纤维细胞的氧化损伤,具有较好的抗氧化保护作用,与其增强抗氧化酶活性,降低脂质过氧化有关。     

创新型实验教学体系的改革实践——参与人体内源性左卡尼汀及其酰化物血浆浓度检测的启发与收获

创新型实验将实验室及实验手段向学生开放,学生可以自主进行实验设计、调试、操作和结果的分析和处理,其目的是让学生在掌握有关知识和技能的同时,获得较高的创新意识和创新能力,创新型实验给学生提供一个充分开放和自由的实验环境,在教师有限的指导下由学生自己去设计实验内容,自己去完成某一个具体项目和任务。人体内源性左卡尼汀及其酰化物血浆浓度检测实验,使学生首次学会自主设计实验方案,制定实验步骤,实施实验过程,讨论分析实验结果,激发了学生学习的主动性,充分发挥其想象力和创造力,培养了发现问题、解决问题和团结协作的能力。     

医学机能实验学课程体系的构建与实践

以世界医学教育联合会提出的《医学教育国际标准》为参照,以我国制定的《中国医学教育本科标准》为依据,根据学校、学院人才培养定位,提出实验教学改革的思路是:坚持"加强基础、拓宽知识、培养能力、激励个性、提高素质"的人才培养思想,突出"能力"核心,以培养学生深厚的人文素质、扎实的医学基本技能、严谨的科学素养和良好的创新能力为目标,以满足我国社会经济发展对高素质医学专业人才的需求。以科学设置的教学内容与课程体系、充分有效的教学手段和方法、先进可行的教学运行和管理机制、合理匹配的教学组织形式为保障,建立新型的医学机能学实验教学体系。该独立课程已成为医学和教育心理学各专业学生的必修课程,并获山东省高等教育教学成果三等奖。     

扇贝多肽对H2O2诱导HaCaT细胞氧化损伤的作用

目的了解扇贝多肽对H2O2诱导的HaCaT细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法取对数生长期HaCaT细胞,随机分为正常对照组（细胞正常培养）、模型组（200μmol/L的H2O2作用12h）、扇贝多肽不同浓度组（低、中、高浓度,分别用1.42、2.84、5.68mmol/L的扇贝多肽预处理2h后,再给予200μmol/L的H2O2作用12h）,应用Hochest33258染色方法检测各组细胞凋亡率,CCK8检测细胞存活率,以二氢荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）为荧光探针、流式细胞术检测细胞内的活性氧（ROS）含量,蛋白印迹法检测生长阻滞和DNA损伤诱导修复基因45a（Gadd45a蛋白）的表达。结果与正常对照组比较,模型组的细胞凋亡率明显升高（F=439.80,q=38.24,P〈0.01）,细胞存活率下降（F=191.40,q=214.10,P〈0.01）,细胞内ROS含量增加（F=121.10,q=31.02,P〈0.01）,Gadd45a蛋白表达升高（F=66.59,q=14.57,P〈0.01）;与模型组比较,扇贝多肽各浓度组细胞凋亡率明显降低（q=9.60～25.82,P〈0.01）,细胞存活率升高（q=13.47～54.86,P〈0.01）,细胞内ROS减少（q=4.20～12.14,P〈0.01）,Gadd45a蛋白表达降低（q=4.04～15.55,P〈0.01）;扇贝多肽各浓度组间比较,随扇贝多肽浓度升高,细胞凋亡率下降,细胞存活率升高,细胞内ROS含量降低,Gadd45a的表达降低,差异有显著性（q=3.96～23.36,P〈0.05）。结论 1.42～5.68mmol/L扇贝多肽能够清除细胞内的ROS,抑制Gadd45a蛋白的表达,从而保护H2O2诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤。