RNA干扰Semaphorin 4D表达对乳腺癌细胞增殖、周期及迁移的影响

目的 :研究Semaphorin 4D(Sema 4D)表达沉默对乳腺癌细胞增殖、周期及迁移的影响,初步探讨该蛋白在乳腺癌发生和发展中的作用。方法 :实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测Sema 4D在不同转移潜能的乳腺癌细胞株MDA-MB-231和MCF-7中的表达水平。采用短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)慢病毒感染法,建立Sema 4D稳定低表达的MDA-MB-231细胞系,然后采用CCK-8法、FCM法、划痕愈合实验及Transwell迁移实验检测细胞增殖、周期分布及迁移能力的变化。结果 :Sema 4D在MDA-MB-231细胞中表达水平明显高于MCF-7细胞(P<0.05);sh RNA慢病毒感染可明显下调MDA-MB-231细胞中Sema4D的表达;与空白对照组比较,Sema 4D干扰组的MDA-MB-231细胞增殖明显被抑制(P<0.05),G0/G1期细胞所占比例明显增高(P<0.05),而细胞迁移能力明显降低(P<0.05)。结论:Sema 4D在高转移潜能的乳腺癌MDA-MB-231细胞中高表达,sh RNA干扰Sema 4D表达可抑制该细胞的增殖和迁移,并阻滞细胞周期于G1期。     

通过骨基质表面培养板检测RANKL诱导破骨细胞骨侵蚀能力

目的探讨以骨基质表面培养板替代骨磨片鉴定破骨细胞骨侵蚀能力的应用方法。方法通过RANKL诱导破骨前体细胞RAW264. 7建立破骨细胞分化模型,运用TRAP染色检测破骨细胞分化程度,并以骨基质表面培养板替代骨磨片行骨陷窝试验检测破骨细胞骨侵蚀能力,以侵蚀面积反映骨侵蚀能力。结果不同浓度的RANKL因子可有效诱导破骨前体细胞RAW264. 7分化为成熟多核破骨细胞,呈浓度依赖性。成熟破骨细胞在骨基质表面培养板上形成不同面积的不规则侵蚀圆环,趋势与破骨细胞分化程度一致。结论使用骨基质表面培养板可有效反映破骨细胞形成及骨侵蚀能力,与TRAP染色结果一致,并且具有操作简便、结果直观、便于统计分析等优点。     

杂交分离手术治疗伴有脊髓压迫症状的胸腰椎转移瘤的疗效观察

目的:评估杂交分离手术治疗伴有脊髓压迫症状的胸腰椎转移瘤的临床疗效。方法 :回顾性分析2013年6月～2018年6月我院收治的28例因伴有脊髓压迫症状的胸腰椎转移瘤行手术治疗患者的临床资料,其中男18例,女10例,年龄57.0±10.8岁(41～77岁)。原发肿瘤类型:肺腺癌12例,肺鳞癌2例,肺神经内分泌癌1例,直肠腺癌6例,肾透明细胞癌3例,乳腺癌2例,肝细胞癌1例,前列腺癌1例。肿瘤侵犯脊柱部位:单发胸椎转移13例、腰椎转移11例,多发胸椎转移2例、腰椎转移1例,胸腰椎转移1例。术前Frankel分级A级1例,B级5例,C级6例,D级16例;疼痛视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)为7.3±0.8分;Tomita评分5.9±0.9分(4～7分);硬膜外脊髓压迫(epidural spinal cord compression,ESCC)评分1b级3例,1c级9例,2级8例,3级8例。均行杂交分离手术,具体方法包括后入路椎体肿瘤部分切除减压、骨水泥钛网支撑、骨水泥填充封闭、椎弓根螺钉内固定术。统计手术时间、术中出血量、术后住院天数,术后即刻及术后3个月时的Frankel分级,术后7d及术后3个月时的VAS评分,美国东部肿瘤协作组(Eastern Cooperative Oncology Group,ECOG)体力状况评分,术中和术后相关并发症情况以及患者生存期。结果 :手术时间为202.0±34.7min(140～285min),术中出血量为819.6±150.0ml(500～1100ml),术后住院日为13.2±3.9d(7～22d)。术中及术后并发症:脑脊液漏3例,切口感染3例,尿路感染1例,肺部感染1例,术后急性神经根刺激症状3例,随访至12个月时发生钛网移位1例。术后7d、3个月VAS评分及ECOG评分与术前比较均有显著性改善(P0.05)。中位随访时间为20.5个月(6～42个月),平均随访时间为21.3±10.0个月,至末次随访有6例存活,其中1例于术后30个月时出现椎体新发转移,行二次手术后仍带瘤生存,至末次随访时存活时间为38个月。结论:杂交分离手术治疗伴有脊髓压迫症状的胸腰椎转移瘤能够明显减轻脊髓压迫,改善患者神经功能,缓解疼痛,提高生活质量。     

siRNA 沉默Sema 4D对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及迁移的影响

目的： 观察siRNA沉默信号素 4D(semaphorin 4D, Sema 4D）对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移的影响。方法： 构建靶向Sema 4D基因的siRNA,脂质体法转染MDA-MB-231细胞系,通过实时荧光定量-PCR、Western blotting检测干扰效率,筛选有效序列。siRNA有效干扰MDA-MB-231细胞Sema 4D表达后,CCK-8法及Transwell迁移实验检测细胞增殖及迁移能力的变化。结果：Sema 4D siRNA转染MDA-MB-231细胞后Sema 4D的（mRNA及蛋白）表达水平明显下降（P<0.05）,其中以siRNA-C最明显（P<0.05）;与空白、阴性对照组相比,siRNA-C沉默MDA-MB-231细胞Sema 4D表达可明显抑制MDA-MB-231细胞增殖（均P<0.05）,同时明显减弱细胞的迁移能力\[穿膜细胞数：（105.60±12.07） vs（196.20±9.04）、（186.40±6.69）个,均P<0.05\]。结论： siRNA沉默Sema 4D可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并抑制细胞迁移,可作为乳腺癌基因治疗的潜在位点。     

成骨前体细胞对乳腺癌细胞表达骨拟态特性及增殖的影响

目的 通过共培养体系探讨成骨前体细胞MC3T3-E1对MDA-MB-231乳腺癌细胞表达骨拟态特性及增殖的影响.方法 实验组将MC3T3-E1及MDA-MB-231细胞采用transwell小室共培养,上室接种MC3T3-E1成骨细胞,下室接种相同数量的MDA-MB-231细胞.对照组上、下室均采用相同数量及密度的MDA-MB-231细胞.实时荧光定量PCR、Western blot法检测实验组及对照组骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的基因及蛋白的表达差异,采用CCK-8法检测各组增殖的差异,结晶紫染色法检测细胞集落形成差异.结果 与对照组相比,实验组OCN、OPN、OPG的基因及蛋白表达均有明显的上调(P＜0.05),MDA-MB-231细胞的增殖能力明显增高(P＜0.01);实验组MDA-MB-231细胞集落形成数量及大小均优于对照组.结论 短期共培养后MC3T3-E1成骨细胞可促进乳腺癌MDA-MB-231细胞表达骨拟态特性,并可促进其增殖及细胞集落形成.     

退行性脊柱侧凸长节段固定融合手术早期并发症的危险因素分析

目的:探讨成人退行性脊柱侧凸(ADS)后路长节段固定融合手术早期并发症的危险因素。方法:回顾性分析2011年12月～2018年12月我院收治的行后路长节段固定融合手术ADS患者的临床资料,按术中和术后6周内是否出现早期并发症(肺部感染、泌尿系感染、切口感染、胃肠道反应或不完全性肠梗阻、硬脊膜破裂、胸腔积液、心律失常、肝功能损害和休克)分为早期并发症组和无早期并发症组。收集患者基本资料,包括性别、年龄、骨密度、合并症;术前风险评估指标,包括麻醉风险分级、营养风险筛查、深静脉血栓风险分级、手术风险评估;术前影像学测量指标,包括主弯冠状面Cobb角、冠状面平衡距离、脊柱失状位轴;术中相关指标,包括患者手术时间、手术固定节段数、手术椎间融合节段数、减压节段数、术中截骨分级、术中失血量和输血量;术后相关指标,包括患者住院输血总量、住院输血次数、术后血红蛋白最低值、术后白蛋白最低值、住院时间。比较两组间各指标差异和单因素Logistic回归分析来发现潜在危险因素,多因素Logistic回归分析筛选发生早期并发症的独立危险因素。结果:纳入研究的64例患者,男性23例,女性41例,平均年龄60.8±7.9(50～78)岁,早期并发症发生率32.8%(21/64)。有合并症(57.1%vs 25.6%)、术前营养风险筛查≥1分(42.9%vs16.3%)、手术风险评估≥2分(52.4%vs 25.6%)和手术时间(279.3±97.8min vs 238.8±59.3min)、手术固定节段数(8.1±1.6 vs 6.9±2.1)两组间比较存在统计学差异(P0.05);性别、年龄、骨密度、冠状面Cobb角、CBD、SVA、术前麻醉风险分级、深静脉血栓风险分级和术中失血量、术中输血量、椎间融合节段个数、减压节段个数、截骨等级以及术后血红蛋白最低值、术后白蛋白最低值、住院时间、住院输血总量、住院输血两组间比较无统计学差异(P0.05)。将有统计学差异的参数进行单因素Logistic回归分析显示术前营养风险筛查分值、术前手术风险评估分值、手术时间、手术固定节段数是早期并发症的潜在危险因素,多因素Logistic回归分析显示,术前营养风险筛查分值和手术时间是ADS长节段固定融合手术早期并发症的独立危险因素。术前营养风险筛查分值每增加1分(OR=3.114,P=0.032)、手术时间每增加1min(OR=1.010,P=0.033),发生手术早期并发症的风险分别增加2.11倍和0.01倍。结论:改善患者营养状况,降低术前营养风险筛查分值、缩短手术时间,对降低退行性脊柱侧凸患者长节段固定融合手术相关早期并发症有益。     

CD147对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(extracellular matrix metalloproteinase inducer,EMMPRIN,EMP,又称CD147)对肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其可能的机制。方法:将CD147过表达慢病毒、短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)干扰CD147表达的慢病毒及阴性对照(negative control,NC)慢病毒分别感染肺癌A549细胞,获得CD147稳定过表达的A549EMP细胞、稳定干扰CD147表达的A549sh EMP细胞和阴性对照A549NC细胞。应用CCK-8(cell counting kit-8)法、细胞划痕实验和Transwell小室法分别检测A549EMP、A549sh EMP和A549NC细胞的增殖、迁移及侵袭能力;蛋白质印迹法检测A549EMP、A549sh EMP和A549NC细胞中β-catenin的核表达情况。结果:A549EMP细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显高于未进行慢病毒感染的空白对照组A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05),而A549sh EMP细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显低于空白对照组A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05)。A549EMP细胞β-catenin的核表达水平明显高于空白对照组A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05),而A549sh EMP细胞β-catenin的核表达水平明显低于空白对照A549细胞和阴性对照组A549NC细胞(P<0.05)。结论:CD147可增强肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与β-catenin的激活有关。