siRNA 沉默Sema 4D对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及迁移的影响

目的： 观察siRNA沉默信号素 4D(semaphorin 4D, Sema 4D）对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移的影响。方法： 构建靶向Sema 4D基因的siRNA,脂质体法转染MDA-MB-231细胞系,通过实时荧光定量-PCR、Western blotting检测干扰效率,筛选有效序列。siRNA有效干扰MDA-MB-231细胞Sema 4D表达后,CCK-8法及Transwell迁移实验检测细胞增殖及迁移能力的变化。结果：Sema 4D siRNA转染MDA-MB-231细胞后Sema 4D的（mRNA及蛋白）表达水平明显下降（P<0.05）,其中以siRNA-C最明显（P<0.05）;与空白、阴性对照组相比,siRNA-C沉默MDA-MB-231细胞Sema 4D表达可明显抑制MDA-MB-231细胞增殖（均P<0.05）,同时明显减弱细胞的迁移能力\[穿膜细胞数：（105.60±12.07） vs（196.20±9.04）、（186.40±6.69）个,均P<0.05\]。结论： siRNA沉默Sema 4D可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并抑制细胞迁移,可作为乳腺癌基因治疗的潜在位点。     

川芎嗪对乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖及凋亡的影响

[目的]评价川芎嗪对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。[方法]以体外培养的乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象,MTT法检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞的增殖作用,流式细胞仪检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞周期的影响,PI单染流式细胞仪检测川芎嗪对MDA-MB-231细胞凋亡的影响。[结果]不同浓度川芎嗪能有效地抑制MDA-MB-231细胞增殖,且随浓度增加和作用时间延长,细胞的增殖抑制率增加。0.50、1.00、1.50mg/ml的川芎嗪作用MDA-MB-231细胞48h,G0/G1期细胞所占细胞周期的比例分别为54.71%±3.83%、64.17%±4.01%和75.06%±4.32%;而对照组G0/G1期比例为40.95%±5.89%。0.50、1.00、1.50mg/ml川芎嗪处理48h后细胞的凋亡率分别为6.59%±2.90%、14.85%±3.41%和22.22%±2.98%。[结论]川芎嗪能抑制MDA-MB-231细胞的体外增殖,且抑制作用表现出时效和量效关系;并能通过阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制乳腺癌细胞凋亡。     

RNA干扰抑制MTA 1的表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响

目的:探讨通过RNA干扰技术抑制MTA1的表达及对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和细胞周期的影响。方法:建立3种稳定表达靶向MTA1的shRNA的MDA-MB-231细胞系。通过反转录-聚合酶链反应(reverse transeription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫组化法验证基因表达的抑制效果;采用细胞计数法及噻唑蓝(thiazolylblue,MTT)法检测细胞的增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期。结果:MTA1基因被抑制后,其mRNA表达明显下降,RT-PCR结果显示,稳定转染3种重组质粒后,MTA1mRNA水平较对照组分别下调了70.07%、82.40%和63.44%;同时,MDA-MB-231细胞的生长明显受抑制,与对照组细胞相比,细胞计数示细胞数目明显减低;MTT分析示细胞增殖下降,流式细胞分析示细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:在MDA-MB-231细胞中,抑制MTA1的表达可有效抑制细胞生长并导致细胞周期的阻滞;利用RNA干扰技术抑制MTA1的表达可能会成为一种有效的乳腺癌基因治疗手段。     

瘦素对人类乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响

 目的 观察不同浓度瘦素对人类乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响,探讨瘦素在乳腺癌发生及发展中的作用。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度瘦素对体外培养的MCF-7细胞生长的增殖作用,流式细胞术分析细胞周期的分布, Annexin V-FITC／PI染色法检测细胞凋亡。结果 MTT比色法结果显示：不同浓度瘦素作用24、48、72 h能够促进MCF-7细胞增殖,浓度与时间不存在交互作用（F＝0.919,P＝0.523）,浓度及时间各自的主效应均差异有统计学意义（F＝12.699,P＝0.000; F＝647.881,P＝0.000）。多重比较结果显示：200　ng／ml及400　ng／ml瘦素组与对照组相比差异有统计学意义（P＝0.007;P＝0.000）,不同时间段之间均差异有统计学意义（P＝0.000）。流式细胞术分析显示100、400 ng／ml瘦素作用48 h后,G0／G1期细胞比例下降14.42 %（F＝10.464,P＝0.044）,S期比例分别上升7.57 %、22.19 %（F＝47.361,P＝0.005）,G2／M期变化差异无统计学意义（F＝1.77,P＝0.311）。未发现瘦素对MCF-7细胞早期凋亡的抑制作用。结论 瘦素能够促进乳腺癌细胞MCF-7的增殖并改变生长周期,但不会抑制凋亡,提示瘦素可能在乳腺癌的发展中发挥促进作用。     

miR-429在鼻咽癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移的影响

目的:探讨微小RNA-429(miR-429)在鼻咽癌细胞中的表达及其对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法:选取本院收治的78例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,另选取同期因其他疾病需进行鼻内镜手术患者33例为对照组.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测两组组织中miR-429的表达.体外培养人鼻咽上皮细胞NP69与鼻...     

碧萝芷对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和转移的影响

目的探讨抗氧化剂碧萝芷对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用,并对观察碧萝芷对MCF-7细胞的转移和迁移功能的影响。 方法用10、20、40 μg/ml的碧萝芷处理乳腺癌MCF-7细胞作为实验组,空白对照组只加入DMEM培养基(无血清), MTT法在处理细胞后24、48、72 h于波长490 nm处测定各组吸光度值;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;用β-半乳糖苷酶染色法检测MCF-7细胞衰老率;用Transwell小室法分别检测各浓度碧萝芷对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响;用Western blot法分别检测乳腺癌MCF-7细胞衰老相关蛋白P53、P21、P16、P27、E2F1以及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)-2、MMP-9的表达。细胞迁移、侵袭数目及各种蛋白的表达水平比较采用单因素方差分析,吸光度值比较采用重复测量的方差分析,两两比较采用LSD法。 结果MTT结果显示,在处理乳腺癌MCF-7细胞24、48、72 h后,各组吸光度值比较,差异有统计学意义(F＝149.439, P<0.001),在不同时间点之间比较,差异有统计学意义(F＝27.922,P<0.001);分组与时间点之间存在交互作用(F＝18.466, P<0.001)。流式细胞仪检测结果显示：空白对照组及10、20、40 μg/ml碧萝芷组的细胞凋亡率分别为(2.36±0.27)%、(6.44±1.43)%、(7.52±2.09)%和(11.68±1.65)%,差异有统计学意义(F＝19.143, P<0.001)。β-半乳糖苷酶染色法结果显示：空白对照组和10、20、40 μg/ml碧萝芷组的细胞衰老率分别为(5.35±1.32)%、(20.08±2.14)%、(40.55±4.61)%和(59.26±4.10)%,差异有统计学意义(F＝150.150, P<0.001)。Transwell小室结果显示：空白对照组及10、20、40 μg/ml碧萝芷组的迁移细胞数目分别为(41±5)、(27±2)、(19±1)、(11±2)个,差异有统计学意义(F＝59.330, P<0.001);侵袭转移的细胞数目分别为(24±4)、(17±1)、(12±2)、(7±2)个,差异也有统计学意义(F＝26.230, P<0.001)。Western blot结果显示：碧萝芷可上调P53、P21、P16、P27蛋白表达(F＝263.905、424.937、217.515、391.115,P均<0.001),下调E2F1蛋白的表达(F＝64.003,P<0.001);同时,各组MCF-7细胞中的MMP-2及MMP-9蛋白表达水平明显降低(F＝44.104、45.594, P均<0.001)。 结论碧萝芷可能是以促衰老的方式抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长,且能抑制细胞的迁移和转移。     

下调ALK2对人乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的:通过表达siALK2的重组腺病毒Ad-siALK2,下调人乳腺癌MDA-MB-468细胞ALK2的表达,研究其对MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:以重组腺病毒Ad-siALK2感染MDA-MB-468细胞为实验组,空载病毒（RFP）作为感染对照,并设空白对照组,通过倒置荧光显微镜观察和RT-PCR检测病毒在MDA-MB-468细胞中的表达水平,通过MTT、平板集落形成、细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力。结果:倒置荧光显微镜观察显示Ad-siALK2感染MDA-MB-468细胞的荧光效率高;RT-PCR证实Ad-siALK2感染的MDA-MB-468细胞ALK2的mRNA表达显著下降;MTT法、平板集落形成实验、细胞划痕实验及Transwell侵袭实验证实MDA-MB-468细胞Ad-siALK2组相比对照组细胞的增殖活力、集落形成率及划痕愈合率均显著降低（P<0.05）,穿膜细胞数也明显减少（P<0.05）。结论:下调ALK2表达后可以在体外抑制人乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖、迁移与侵袭,为后续实验研究奠定了基础。     

微小RNA-206通过干扰CDK4和GAK的表达对前列腺癌细胞生长的影响

目的 探讨微小RNA-206(miR-206)对前列腺癌细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和细胞周期素G相关蛋白激酶(GAK)表达的干扰作用及对前列腺癌细胞生长的影响.方法前列腺癌细胞株DU-145和PC-3为转染对象,转染miR-NC为对照组,转染miR-206为实验组.荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测CDK4和GAK mRNA的表达水平.Western blotting检测CDK4和GAK蛋白的表达水平.流式细胞术检测细胞周期分布.EdU增殖实验和集落形成实验检测细胞增殖能力.结果在DU-145和PC-3细胞株中,miR-NC组CDK4 mRNA表达量分别为1.00±0.09、1.00±0.10,GAK mRNA表达量为1.00±0.05、1.00±0.06;与之相比,两细胞株miR-206组中CDK4 mRNA表达明显下降,分别为0.36±0.18(t=6.572,P=0.001)、0.43±0.17(t=5.794,P=0.001),GAK mRNA表达量亦明显下降,分别为0.23±0.04(t=22.420,P<0.001)、0.32±0.08(t=14.500,P<0.001).Western blotting实验结果与qRT-PCR结果一致.流式细胞术检测结果显示,分别与两细胞株miR-NC组比较,转染miR-206后前列腺癌细胞在S期(23.60%±5.68%∶32.53%±4.52%,t=2.462,P=0.049;22.09%±4.35%∶30.96%±4.86%,t=2.720,P=0.035)和G2-M期(16.28%±7.12%∶26.63%±4.33%,t=2.484,P=0.048;14.60%±1.62%∶24.68%±7.13%,t=2.758,P=0.033)的细胞比例下降,在G0-G1期(60.13%±5.82%∶40.84%±5.37%,t=4.872,P=0.003;63.31%±3.27%∶44.36%±3.82%,t=7.533,P<0.001)的细胞比例升高.EdU增殖实验结果显示,转染miR-206的细胞增殖能力明显减弱(22.56±3.81∶38.90±8.51,t=3.503,P=0.013;25.12±6.42∶48.45±8.92,t=4.244,P=0.005).集落形成实验结果显示,两细胞株miR-NC组形成的集落数分别为218.66±44.59、177.35±24.49,miR-206组形成的集落数分别为125.38±32.80(t=3.370,P=0.015)、82.65±14.05(t=6.708,P=0.001),提示miR-206组细胞增殖能力降低.结论 miR-206可通过干扰CDK4和GAK的表达显著抑制前列腺癌细胞的生长,提示miR-206可能成为前列腺癌的分子靶向治疗工具.     

细胞周期蛋白E小干扰RNA靶向调控乳腺癌细胞的生长

目的 研究乳腺癌细胞中细胞周期蛋白E(cyelin E)对乳腺癌细胞肿瘤生物学特征的影响.方法 用带有cyclin E小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体pEGFP/CCNE2转染乳腺痛细胞系MCF-7.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分别在RNA水平和蛋白水平检测siRNA对细胞内cyclin E表达水平的影响,CCK-8方法检测转染后细胞株生长增殖能力以及对化疗药物的敏感性,流式细胞仪检测细胞周期的变化,裸鼠移植瘤成瘤实验检测转染后细胞成瘤能力的变化.结果 pEGFP/CCNE2转染后,MCF-7细胞内cyclin E的表达受到抑制,cyclin E mRNA相对表达水平为0.23±0.05,蛋白相对表达水平为0.24±0.05;细胞的生长增殖能力下降,抑制率为68.56%±0.08%,对化疗药物的敏感性增加;细胞被大量阻滞在G1期,G1期细胞占77.38%.细胞的成瘤能力降低,移植瘤体积缩小.结论 抑制乳腺癌细胞中cyclin E的表达能够抑制乳腺癌细胞的生长、分化和增殖,提高肿瘤对化疗药物的敏感性.     

慢病毒体外干扰长链非编码RNA LINC00630表达对膀胱癌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨长链非编码RNA LINC00630在膀胱癌细胞中的表达,以及体外干扰其表达对膀胱癌细胞增殖和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测膀胱癌细胞株5637、BIU-87、T24、J82和正常膀胱上皮细胞株SV-HUC-1中LINC00630的表达。选择LINC0063表达量最高的膀...     

MST1 基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响

目的:探讨 MST1 ( mammalian sterile 20-like kinase 1)基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响.方法:构建含有标签蛋白FLAG的MST1质粒pCMV-FLAG-MST1;将构建好的pCMV-FLAG-MST1质粒在脂质体lipofectamine 2000的介导下转染MCF-7细胞,通过Western 印迹法分析MST1在MCF-7中的表达情况;分别在转染后12、24、36和48 h通过MTT法观察MST1对细胞增殖的影响;转染后36 h加入5-溴-2'脱氧尿嘧啶(bromodeoxy uridine,BrdU),通过其掺入比率显示MST1对细胞增殖的影响;转染后36 h加入顺铂,作用14 h后通过Annexin Ⅴ检测其对细胞凋亡的影响.结果:成功构建 pCMV-FLAG-MST1质粒;MTT及BrdU检测显示,转染pCMV-FLAG-MST1质粒后 MCF 7细胞增殖明显受到抑制;Annexin Ⅴ检测结果提示,高表达MST1后,细胞的凋亡率相对增高.结论:在乳腺癌细胞MCF 7中高表达MST1,不仅可以抑制细胞增殖,还可以促进细胞凋亡.     

RNA干扰CXCR4表达抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、黏附和迁移

目的：构建CXC趋化因子受体4（CXC chemokine receptor 4, CXCR4）RNA干扰真核表达载体,研究其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、黏附及迁移能力的抑制作用。方法：构建针对CXCR4的带发夹结构的小RNA干扰序列,并连接到pGCsi-U6-Neo-GFP载体中,转染293T细胞,筛选出干扰效率最高的表达载体。脂质体法转染MDA-MB-231细胞。利用CCK8法、细胞-基质黏附实验和划痕修复实验检测shRNA干扰CXCR4表达对MDA-MB-231细胞增殖、黏附和迁移能力的影响。结果：成功构建CXCR4-shRNA重组质粒,并转染293T细胞,利用RT-PCR及Western blotting检测发现CXCR4沉默效率最高可达81.3%。CXCR4-shRNA转染能显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P<0.05)以及细胞与细胞外基质的黏附(P<005)。CXCR4-shRNA转染组MDA-MB-231细胞的迁移距离明显低于对照质粒组和空白对照组(P<0.01)。结论：CXCR4-shRNA干扰载体能特异性抑制CXCR4的表达,从而抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、黏附及迁移。     

蛇床子素对人鼻咽癌CNE2细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响

目的研究蛇床子素对人鼻咽癌CNE2细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响,并探讨其调节CNE2细胞上皮问质转化（EMT）的分子机制。方法体外培养CNE2细胞,以0、20、40、80μg／ml蛇床子素分别处理CNE2细胞24、48h后,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、Transwell实验分别检测其对细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,以0μg/ml蛇床子素处理组为对照组。反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting方法分别检测EMT标志物上皮钙黏着蛋白（E-eadherin）、波形蛋白（vimentin）及Writ／β-eatenin信号通路组分B．eatenin、细胞周期蛋白D1（cyclinD1）的转录和蛋白表达水平。结果作用24h和48h后,0、20、40、80μ/ml蛇床子素处理组细胞增殖抑制率分别为0．00％±0．00％、7．45％±0．87％、14．12％±2．29％、27．26％±0．43％和0．00％士0．00％、13．44％±0．84％、29．03％±0．78％、57．49％±1．70％,差异均有统计学意义（F=174．33,P〈0．001;F=1041．40,P〈0．001）,进-步两两比较,差异均具有统计学意义（均P〈0．01）。采用不同浓度的蛇床子素（0、20、40、80μg/ml）处理CNE2细胞48h后,细胞迁移细胞数分别为52．13±4．49、29．00±4．49、18．50±1．93、13．75±2．77,差异有统计学意义（F=200．37,P〈0．001）,进-步两两比较,差异均具有统计学意义（均P〈0．01）。采用不同浓度的蛇床子素（0、20、40、80μg/ml）处理CNE2细胞48h后,细胞侵袭数分别为46．63±2．87、24．13±2．87、16．75±5．29、11．00±1．77,差异有统计学意义（F=131．92,P〈0．001）,进-步两两比较,差异均具有统计学意义（均P〈0．01）。采用不同浓度的蛇床子素（0、20、40、80μg/ml）作用于人鼻咽癌CNE2细胞48h后,β-cadherinmRNA（1．00±0．13、2．61±0．03、3．12±0．09、3．60±0．06;F=20．92,P〈0．001）和E-cadherin蛋白表达（0．22±0．03、0．35±0．01、0．60±0．04、0．82±0．03;F=178．63,P〈0．001）差异有统计学意义,进-步两两比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。同时,采用不同浓度蛇床子素（0、20、40、80μg/ml）处理CNE2细胞48h后,vimentin的mRNA表达（1．00±0．12、0．68±0．03、0．56±0．01、0．40±0．09;F=9．48,P〈0．010）、B-eatenin的mRNA表达（1．00±0．14、0．78±0．04、0．69±0．07、0．46±0．12;F=4．84,P〈0．050）和eyelinD1的mRNA表达（1．00±0．09、0．82±0．03、0．58±0．09、0．40±0．03;F=9．49,P〈0．010）差异均有统计学意义,各组间进-步两两比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）;vimentin的蛋白表达（0．85±0．02、0．74±0．01、0．34±0．01、0．27±0．01;F=610．58,P〈0．001）、B-eatenin的蛋白表达（0．83±0．00、0．44±0．02、0．39±0．00、0．23±0．03;F：985．74,P〈0．001）、cyelinD1的蛋白表达（0．86±0．02、0．67±0．00、0．35±0．01、0．25±0．0l;F=910．57,P〈0．001）差异均有统计学意义,各组间进-步两两比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论蛇床子素可抑制CNE2细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与调节Wnt／β-catenin信号通路进而抑制EMT过程有关。     

槲皮素对人乳腺癌裸鼠移植瘤细胞周期的影响

目的　研究槲皮素对人乳腺癌细胞株MCF 7裸鼠移植瘤细胞周期的影响。方法　 2 4只MCF 7细胞株移植成功的裸鼠分为对照组、槲皮素组、阿霉素组及联合用药组 ,每组 6只。用流式细胞仪分析细胞周期分布 ,用免疫组化测定cyclinD1表达水平。结果　G0 /G1期占细胞周期比例对照组明显低于槲皮素组 ,阿霉素组及联合用药组 (P <0 .0 1) ,S期占细胞周期比例对照组明显高于槲皮素组 ,阿霉素组及联合用药组 (P <0 .0 1) ,cyclinD1表达水平对照组明显高于槲皮素组、阿霉素组及联合用药组 (P <0 .0 1)。结论　槲皮素可作用于MCF 7移植瘤的G1/S节点 ,可抑制移植瘤细胞增殖及cyclinD1表达 ,延缓肿瘤生长。     

Numb 基因负性调节 CXCR4表达抑制膀胱癌细胞 BIU-87的增殖和迁移

目的：研究 Numb 基因对趋化因子受体4（CXCR4）表达的影响以及对膀胱癌细胞增殖和迁移的影响。方法实验分为3组：实验组（在膀胱癌细胞 BIU-87中转染 Numb-ORF 表达质粒）、阴性对照组（转染空载体）和空白对照组（未行转染处理）。使用荧光定量 PCR 和 Western blotting 检测各组细胞 Numb 和 CXCR4的表达。使用 MTS 法和 Transwell 小室法检测细胞增殖和迁移能力。结果实验组、阴性对照组和空白对照组中 Numb 基因表达水平分别为31.044±3.350、4.401±0.567和4.287±0.341,差异有统计学意义（F ＝183.418,P ＝0.000）;实验组、阴性对照组和空白对照组的 CXCR4表达水平分别为0.344±0.167、0.996±0.148和1.010±0.106,差异有统计学意义（ F ＝21.355,P ＝0.002）。细胞增殖检测中实验组、阴性对照组和空白对照组的48 h 吸光度值分别为0.615±0.057、0.987±0.063和0.957±0.066,差异有统计学意义（F ＝33.210,P ＝0.001）。迁移实验中,实验组、阴性对照组和空白对照组的穿膜细胞数分别为（164.667±19.858）个、（670.133±38.760）个和（667.533±27.610）个,差异有统计学意义（F ＝286.788,P ＝0.000）。结论 Numb 可能通过负性调节CXCR4表达抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移。     

微RNA-378a-3p靶向SUFU基因促进乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的:研究微RNA(microRNA,miRNA,miR)-378a-3p对乳腺癌细胞体外增殖、凋亡和迁移能力的影响,以及可能的作用机制.方法:利用GEO(Gene Expression Omnibus)数据库分析乳腺癌miR-378a-3p高表达患者与低表达患者的生存情况.使用实时荧光定量PCR法检测人乳腺癌细胞系以...     

HpD—PDT对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制

目的:研究血卟啉衍生物(hematoporphrphyrin derivative,HpD)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡的影响,探讨其可能的作用机制,为HpD-PDT治疗乳腺癌提供理论依据.方法:体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231分为4组:A组(空白对照)、B组(单纯激光)、C组(单纯光敏剂)、D组(激光+光敏剂).应用流式细胞术分析HpD-PDT对细胞周期的影响,免疫组织化学技术检测HpD-PDT对PCNA、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.结果:HpD-PDT作用后,乳腺癌细胞内G0/G1期细胞比显著高于对照组(P<0.05);PCNA阳性表达率明显低于对照组(P<0.01);Bcl-2蛋白的阳性表达率明显下降(P<0.05);Bax蛋白阳性表达率各组间均无统计学差异;实验组HpD-PDT作用后Bax/Bcl-2比值增高,呈时间依赖性变化.结论:HpD-PDT的作用机制可能与抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡有关.     

UBE2D3基因过表达对食管癌细胞迁移增殖及顺铂敏感性的影响

目的 构建过表达人泛素交联酶UBE2D3基因的稳定转染食管癌EC109细胞株,并观察过表达后迁移增殖能力及对顺铂化疗敏感性的改变.方法 食管癌EC109细胞株分别转染pEGFP-C1和pEGFP-UBE2D3质粒后,分为阴性对照组(NC组)和过表达组(OE组),并用G418进行筛选构建稳定转染细胞株.通过实时定量PCR(RT-PCR)法及Western blotting验证过表达效率,用划痕试验检测迁移能力,并用CCK-8法检测细胞增殖,半抑制浓度(IC50)法评价对顺铂的敏感性.结果 相对于亲本细胞,NC组UBE2D3 mRNA表达量为1.010±0.590,OE组为2.026±0.898;NC组UBE2D3蛋白表达量为0.923 ±0.237,OE组为1.520±0.487;NC组UBE2D3 mRNA及蛋白表达水平与空白对照组亲本细胞EC109相近(t=1.005,P＞0.05;t=1.492,P＞0.05),OE组较亲本细胞组表达高(t=6.682,P＜0.05;t=9.150,P＜0.05).在12 h NC组的迁移距离为(0.161±0.062) mm,OE组为(0.052±0.007) mm(=4.370,P＜0.05);在24 h NC组的迁移距离为(0.309 ±0.071) mm,OE组为(0.074 ±0.012) mm(=3.644,P＜0.05);在12 h和24 h时OE组相对于NC组的迁移率分别为0.236±0.051和0.241±0.037,OE组迁移能力明显较NC组降低;在第1天时OE组相对于NC组的增殖率为0.713±0.220(t=13.466,P＜0.05),第2天为0.848±0.241(t =27.241,P＜0.05),第3天为0.742 ±0.233(t=15.107,P＜0.05).使用顺铂处理后,在第1天时OE组的IC50值相对于NC组为0.356±0.154(t =4.326,P＜0.05),第2天为0.445±0.098(t =5.870,P＜0.05),第3天为0.481±0.096(=5.009,P＜0.05),OE组IC50值明显低于NC组;给予5μg/ml顺铂处理后,在第1、2、3天时OE和NC组相对于未使用顺铂处理时的增殖效率均减慢,其中OE组相对于NC组的增殖率分别为0.606±0.283(t=8.872,P＜0.05)、0.759±0.089(t=16.771,P＜0.05)和0.569±0.574(t =7.885,P＜0.05),然而在第1、2、3天时OE组的存活率相对于NC组分别为0.831 ±0.323(t=24.226,P＜0.05)、0.875±0.102(t=33.541,P＜0.05)和0.853±0.359(t=28.187,P＜0.05),顺铂对OE组抑制效率较NC组增加.结论 食管癌细胞EC109中过表达UBE2D3基因,能够抑制其迁移、增殖,增强其对顺铂的敏感性.     

RNA干扰技术沉默Smad4基因表达对ECV304细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨利用RNA干扰技术下调Smad4基因表达对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移能力的影响，初步了解Smad4在血管生成中的作用。方法：设计并合成靶向人Smad4基因的小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）片段siRNA1和siRNA2，脂质体介导转染入人脐静脉内皮细胞株ECV304。应用实时定量RT-PCR和Western印迹法检测转染前后Smad4基因表达水平；应用细胞周期分析和羧乙基锗倍半氧化物（6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester，CFSE）－流式细胞仪检测ECV304细胞转染前后细胞增殖能力的变化；通过单层细胞划痕实验观察细胞转染前后迁移能力的变化。结果：从2条siRNA中成功筛选出1条siRNA，于RNA和蛋白水平可明显下调Smad4基因的表达；ECV304细胞转染Smad4的siRNA后，细胞的增殖和迂移能力明显增强。结论：利用RNA干扰技术能够筛选出高效的特异阻断Smad4基因表达的siRNA；Smad4基因表达下调能够明显促进血管内皮细胞的增殖和迁移。