调控组织因子基因表达的药物筛选研究

本研究建立TF启动子转录活性的荧光素酶基因稳定细胞株,应用该细胞模型筛选调控TF基因表达的药物,并为深入研究其分子机制打下基础。构建TF启动子的一系列5′端截短型的荧光素酶报告基因质粒(包括-2174 bp~+128 bp,-684 bp~+128 bp,-247 bp~+128 bp,-201 bp~+128 bp),将质粒电转染至U937细胞中,建立表达荧光素酶报告基因的稳定细胞株。应用ATRA验证该细胞株的功能;应用bortezomib、尿多酸肽(CDA-II)等药物处理该细胞株24小时,分析荧光素酶基因活性,筛选出能够调控TF基因表达的药物。结果发现,5 nmol/L bortezomib能激活其转录活性,上调TF转录本表达水平;1 mg/ml CDA-Ⅱ抑制TF启动子的转录活性,下调TF转录本的表达水平。TF启动子逐步截短功能分析发现,bortezomib及CDA-ⅡII调控TF启动子转录活性的区域位于-201 bp—0 bp之间。结论:本研究建立了表达TF启动子荧光素酶活性的U937稳定细胞株,并筛选出能够调控TF基因转录的药物CDA-II及bortezomib,为将来筛选新药物及深入研究其分子机...     

化疗对女性淋巴瘤患者生育能力影响的研究进展

随着淋巴瘤诊断技术的提高及化疗、骨髓移植技术的不断完善,淋巴瘤的整体治愈率显著提高,对于获得长期生存的育龄期女性患者来说,其生育能力是否能够保留受到了越来越多的关注.对于女性淋巴瘤患者,化疗对生育能力损伤程度的大小,与化疗药物种类、剂量及化疗方案以及年龄有关.但不同化疗药物的联合应用、化疗剂量、化疗周期、年龄等因素对患者生育力的损伤程度尚未完全明确.因此针对淋巴瘤化疗对女性生育能力的影响进行研究十分必要,本文就化疗对于女性淋巴瘤患者生育能力的影响及其研究进展进行综述.     

全反式维甲酸下调NB4细胞膜联蛋白Ⅱ表达及其机制探讨

目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞膜联蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)的表达影响,分析在ATRA的作用下AnnexinⅡ启动子的荧光素酶活性。方法:培养NB4细胞,用RT-PCR和Western blot技术分别检测1μmol/L ATRA作用的NB4细胞在不同时间点的AnnexinⅡ表达。构建AnneixnⅡ启动子,用电转染将重组质粒p GL4.15-AnnexinⅡ-promoter瞬时转染NB4细胞,在24 h后用1μmol/L ATRA处理转染的NB4细胞,分析AnnexinⅡ启动子的荧光素酶活性。结果:在转录水平,AnnexinⅡ的表达在48 h时逐渐下降;在蛋白水平,AnnexinⅡ的表达在24 h开始下降,而在48 h时下降明显。同时通过ATRA作用AnnexinⅡ启动子,发现ATRA可使AnnexinⅡ启动子活性下降,且随时间的延长荧光素酶活性越来越弱。结论:ATRA可诱导NB4细胞中AnnexinⅡ下调;ATRA可使转染细胞NB4中Annexin启动子荧光素酶活性随时间的延长而逐渐减弱,本研究为深入探讨其分子机制奠定了基础。     

过表达HMGB1蛋白的K562稳定细胞株的建立

本研究目的建立过表达HMGB1蛋白的K562稳定细胞株(K562-HMGB1)及不表达该蛋白的对照细胞株(K562-pcDNA3.1),为研究hm gb1基因在白血病发生及进展中的作用与机制建立基础。从U937白血病细胞提取总RNA,逆转录合成cDNA。以cDNA为模板应用PCR技术扩增hm gb1编码基因,将其连接入PMD18-T vector(PMD18-T-HM BG1vector),并转化至大肠杆菌DH5a中。对氨苄青霉素筛选的阳性克隆进行扩增、质粒抽提,应用限制性内切酶KpnI/XhoI酶切鉴定,最终应用DNA测序得到序列正确的阳性克隆;然后将PMD18-T-HM BG1vector克隆中的hm gb1基因应用限制性内切酶KpnI/XhoI切出,并连接入真核表达载体pcDNA3.1(+),得到重组质粒pcDNA3.1-HM BG1。将pcDNA3.1-HM BG1、pcDNA3.1质粒分别电转染至K562细胞,电转染后48小时后加入终浓度800μg/m l的G418进行药物加压筛选,2周后得到有效转染pcDNA3.1-HM BG1及pcDNA3.1载体的K562细胞株(K562-HM BG1,K562-pcDNA3.1)。通过RT-PCR和W estern b lot技术分别在转录及蛋白表达水平检测K562稳定细胞株中HMGB1蛋白过表达情况,验证建立的K562稳定株的功能。结果表明,成功构建pcDNA3.1-HM BG1表达载体,并转染至K562细胞中,建立了过表达HMGB1蛋白的K562稳定细胞株(K562-HM BG1)。在转录及蛋白水平上验证了该稳定细胞株过表达HMGB1蛋白。结论:已成功建立了过表达HMGB1蛋白的K562稳定细胞株及对照细胞株即K562-HM BG1细胞及K562-pcDNA3.1细胞,为研究hm gb1基因在白血病发生及进展中的作用及机制建立了基础。     

高迁移率族蛋白B1在血液恶性肿瘤中的研究进展

高迁移率族蛋白(high mobility group protein,HMG)是真核细胞内继组蛋白之后含量最为丰富的一组染色质蛋白质,维持核小体稳定、在DNA重组、复制、修复及基因转录中起重要作用。代表性的高迁移率族蛋白B1(high mobility group box1protein,HMGB1)具有三个结构域A Box、B Box、C-tail。B Box引起炎性反应,A Box具有拮抗B Box的功能,C-tail可与其他蛋白相互作用,影响与DNA的亲和力。HMGBl几乎组成性地表达于所有细胞,胞核中HMGB1可通过乙酰化"主动分泌",但主要在凋亡或坏死后以"被动方式"释放至细胞外。细胞外HMGB1主要与细胞外受体如晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)、Toll样受体-4(Toll-like receptor4,TLR-4)等结合,活化相应信号通路,促进细胞的生长、增殖及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)-C/D的表达;还可促进纤溶酶、基质金属蛋白酶的活化,降解细胞外基质,促进肿瘤细胞的侵袭转移。细胞内HMGB1则作为转录因子调控下游靶基因,重塑染色质结构。血液肿瘤如淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病均存在HMGB1的高表达,并可能与血液肿瘤细胞的侵袭转移、肿瘤细胞生长耐药等有关。血液肿瘤HMGB1的表达情况及其效应有待于深入研究,并可能成为部分血液肿瘤的治疗靶点。     

成人复发/难治性费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病的免疫治疗进展

酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)联合标准化疗显著提高了费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病(Philadelphia chromosome-positive acute lymphoblastic leukemia,Ph⁺-ALL)患者的预后,化疗联合第一代或第二代TKI治疗Ph⁺-ALL患者的3年总生存(overall survival,OS)率为40%～60%,联合第三代TKI如帕纳替尼,其6年OS率可达75%。但是,复发/难治性Ph⁺-ALL患者在初次挽救性治疗后2年OS率仅为20%,这需要探索新的治疗策略如免疫治疗。免疫治疗主要包括单克隆抗体的使用如贝林妥欧单抗(抗CD3和CD19双特异性抗体)、奥加伊妥珠单抗(抗CD22单克隆抗体),以及针对不同靶点的嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T-cell,CAR-T)疗法。然而,免疫治疗后长期生存期改善有限,一般建议患者达到完全缓解后桥接异基因造血干细胞移植(allogeneic hema...