维生素D2注射液对老年女性维生素D缺乏患者血清甲状旁腺激素的影响

目的探讨维生素D2注射液对老年女性维生素D缺乏患者血清甲状旁腺激素（PTH）的影响。方法选取2018年12月在浙江省人民医院住院的老年女性维生素D缺乏患者44例,采用随机数字表法分为试验组和对照组各22例。试验组患者在坚持晒太阳的基础上,给予维生素D2注射液60万U肌肉注射,1次/月,直至血清25-羟基维生素D[25（OH）D]≥75nmol/L后停用;而对照组仅坚持晒太阳,连续观察12个月。所有患者每月检测血清25（OH）D、PTH、血钙、血磷、血糖、肌酐、ALT水平,并进行统计分析。结果试验组患者血清25（OH）D水平≥75nmol/L用时（11.6±3.1）个月。试验组患者治疗后血清25（OH）D水平明显高于对照组,血清PTH水平明显低于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）,但两组患者血钙、血磷、血糖、肌酐和ALT水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论维生素D2注射液可有效降低老年女性维生素D缺乏患者的血清PTH水平。     

轮状病毒VP4蛋白酶切片段VP5*、VP8*在原核系统中的表达

目的克隆表达轮状病毒结构蛋白VP4酶切片段VP5＊、VP8＊。方法以猴轮状病毒SA11株细胞培养物提取总RNA为模板,经RT—PCR方法获得VP5＊、VP8＊全长基因片段cDNA,将其重组于pET-30a表达载体,转化大肠杆菌BL21（plyss）,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,表达产物做SDS—PAGE和Western—blotting检测,目的产物用镍柱纯化。结果①重组载体在IPTG诱导下,工程菌表达的两个目的蛋白主要以包涵体形式存在;②SDS—PAGE检测表达产物与目的蛋白大小一致,VP5＊为60kD,VP8＊为28kD,Western—blotting检测发现两目的蛋白所带标签可与抗体反应;③镍柱纯化获得RVSA11VP5＊、VP8＊蛋白,纯度达90％。结论①构建表达载体pET-30a—VP5＊、pET-30a—VP8。;②表达、纯化VP4蛋白的VP5＊、VP8＊片段。     

轮状病毒外壳蛋白VP4在大肠埃希菌中的表达

目的 克隆表达轮状病毒融合素蛋白VP4.方法 以轮状病毒SA11株细胞培养物提取总RNA为模板,经RT-PCR获得VP4全长基因片段cDNA,将其重组于pET-30a(+)表达载体,转化大肠埃希菌BL21(plysS),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并用镍柱纯化.结果 重组载体所含目的基因片段的序列与文献公布序列相符,IPTG诱导表达的目的蛋白主要以包涵体形式存在;SDS-PAGE检测表达产物与目的蛋白大小一致,为88 kD,Western blot检测发现目的蛋白所带组氨酸标签可与标签抗体反应;镍柱纯化获得RV SA11 VP4融合素蛋白,纯度达90%.结论 构建了表达载体pET-30a(+)-VP4,经诱导表达、纯化,获得了RV融合素蛋白VP4.     

轮状病毒感染细胞机制的研究进展

A组轮状病毒是人类婴幼儿胃肠炎的主要病原体.其外壳蛋白VP4、VP7及非结构蛋白NSP4在病毒感染细胞过程中发挥重要作用.目前对轮状病毒的感染的研究很多,但发病机制仍不完全清楚.本文对轮状病毒蛋白致病机理及感染细胞机制等方面的研究进行综述.     

真菌提取物JN219抗轮状病毒机制的研究

目的探讨真菌提取物JN219抑制轮状病毒（RV）入侵宿主细胞的机制。方法构建原核表达载体pET-30a-VP4,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达并用His抗体镍柱亲和层析纯化病毒外壳蛋白VP4,利用体外竞争抑制RV—MA104细胞感染模型,观察与VP4共孵育后含JN219提取物抑制RV活性的变化。结果构建的pET-30a—VP4载体可表达VP4重组蛋白（约88kD）,镍柱纯化的VP4蛋白含量为0．75mg／ml,与VP4作用后JN219提取物抗病毒指数由36．7降低为9．1,半数有效浓度由（0．163±0．02）mg／ml升为（0．702±0．13）mg／ml,半数中毒浓度由5．99mg／ml升至6．38mg／ml,P均〈0．05。结论与病毒外壳蛋白VP4结合,进而阻断病毒穿入细胞可能是JN219抗RV的主要机制之一。