RNAi沉默HMGN5基因对肺癌A549细胞增殖的影响

目的构建HMGN5基因的shRNA慢病毒载体,并在肺癌A549细胞上鉴定其沉默效率,观察其对细胞增殖能力的影响。方法筛选HMGN5基因特异性siRNA靶点,合成短发卡结构shRNA,与LentiLox3.7慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,包装shRNA慢病毒颗粒,感染肺癌A549细胞,设阴性组及干涉组,应用Real-time PCR和Western印迹的方法检测HMGN5在mRNA和蛋白水平的沉默效率,MTT和克隆形成实验观察HMGN5基因沉默对A549细胞增殖的影响。结果构建的shRNA慢病毒颗粒感染A549细胞后,干涉组HMGN5基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组下降了71.7%,显著抑制其蛋白表达;MTT结果表明细胞增殖能力明显降低,干涉组克隆形成能力较阴性组明显减弱。结论成功构建了HMGN5基因的shRNA慢病毒表达载体,其能够在肺癌A549细胞上有效沉默靶基因。HMGN5基因具有影响肺癌细胞恶性增殖的能力,为肺癌的基因治疗奠定了实验基础。     

霍奇金淋巴瘤治疗进展

霍奇金淋巴瘤（Hodgkin lymphoma,HL）是起源于淋巴造血组织的恶性肿瘤。随着化疗药物和放射技术的进步,尤其是化、放疗综合治疗的应用,早期HL的5年生存率超过90%。晚期HL的5年无失败生存率为60%～70%。对于早期HL而言,治愈率已经很高,研究方向是在保持现有疗效的基础上,减少化疗周期数、降低放射剂量、缩小照射范围,以降低远期毒性,改善患者的生存状态。对于早期预后不良和晚期HL,复发率仍然很高,近年来国际上研究的方向是寻求合理、个体化的放、化疗综合治疗模式,探索新药和新的化疗方案,以期进一步提高患者的生存率,改善生活质量。此外,一些新的靶向药物如抗CD30单抗的复合物,去组蛋白乙酰化抑制剂等也进入了临床前和临床研究,有望进一步提高疗效。     

诱骗受体3对肺纤维化动物模型早期的作用

目的:探讨诱骗受体3(DcR3)对肺纤维化动物模型早期的作用。方法:博莱霉素(BL)气管内灌注复制大鼠肺纤维化模型,ELISA检测支气管肺泡上清中的TGF-β的含量,HE和MASSON染色观察大鼠模型肺组织病理变化。结果:BL+DcR3组TGF-β的含量与对照组比较无统计学差异(P0.05),与BL组比较有统计学意义(P0.05)。BL+DcR3组2周的炎症程度和4周的肺纤维化程度明显低于BL组。结论:DcR3早期应用可抑制肺纤维化动物模型TGF-β的产生,从而延缓或阻止肺纤维化的发生。     

三氧化二砷对T315I突变细胞株KBM5R细胞周期的影响

目的：探讨三氧化二砷（ATO）对T315I突变的伊马替尼（IM）耐药慢性粒细胞白血病（CML）细胞株KBM5R细胞周期的影响,为对抗CML患者的IM耐药性提供理论依据。方法：选择野生型KBM5细胞作为T315I点突变KBM5R细胞的阴性对照组,根据是否经过ATO处理将实验分为KBM5R细胞空白对照组、KBM5R细胞ATO处理组、KBM5细胞空白对照组和KBM5细胞ATO处理组。应用MTT法检测IM和ATO作用后KBM5和KBM5R细胞的增殖活性;流式细胞术检测ATO作用后KBM5和KBM5R细胞周期的变化;Western blotting法检测ATO作用后KBM5和KBM5R细胞周期调节相关蛋白P21和P27表达的变化。结果：IM作用后耐药组KBM5R细胞IC50与野生型KBM5细胞比较明显增高（P<0.01）;不同浓度（0.5、1.0、2.0、4.0和8.0 μmol·L-1）ATO于不同时间点（24、48、72和96 h）作用于KBM5和KBM5R细胞,与空白对照组比较,ATO处理组细胞均表现为显著的增殖抑制,且随药物浓度增加或作用时间延长细胞的增殖抑制率显著增加（P<0.05）;在相同的药物浓度和时间点,ATO对KBM5R细胞的增殖抑制作用强于野生型KBM5细胞（P<0.05）;2.0、4.0和8.0 μmol· L-1 ATO作用细胞48 h后,KBM5和KBM5R细胞周期中G2/M期细胞所占比例均随药物剂量的增加而增加,且相同药物浓度时KBM5R细胞周期中G2/M期细胞所占比例与KBM5细胞比较差异无统计学意义(P>0.05); ATO作用KBM5和KBM5R细胞48 h后,2.0、4.0和8.0 μmol·L-1 ATO处理组与空白对照组比较细胞内P21和P27蛋白表达均增加,且随药物剂量增加而增加。结论：ATO通过上调P21和P27蛋白水平使KBM5R细胞周期阻滞于G2/M期,细胞周期阻滞是ATO抑制T315I点突变细胞株KBM5R增殖的原因之一。     

三氧化二砷对T3151突变细胞株KBM5R的诱导凋亡作用

本研究旨在探讨三氧化二砷(ATO)对耐伊马替尼(IM)并有T3151点突变的慢性髓系白血病(CML)细胞株KBM5R的诱导凋亡作用.选择T3151点突变的CML细胞KBM5R和野生型细胞KBM5为研究对象,用MTT 法检测KBM5R细胞对IM的耐药性及ATO对KBM5、KBM5R细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测ATO诱导KBM5、KBM5R细胞凋亡;Western blot法检测ATO对KBM5、KBM5R细胞凋亡相关蛋白caspase-3、-8、-9的影响.结果表明,①IM作用于KBM5R细胞的IC50值为12.66±0.565 μmol/L,明显高于对KBM5细胞的IC50值(0.303±0.031)μmol/L,两者比较差异具有显著性(p＜0.01);②不同浓度ATO作用于KBM5、KBM5R细胞24、48、72、96小时均表现出显著的增殖抑制作用,且具有浓度依赖性和时间依赖性;相同的药物浓度和时间点ATO对KBM5R细胞的增殖抑制作用强于对KBM5细胞;③ATO(2、4、8 μmol/L)作用于细胞48小时后KBM5、KBMSR 细胞凋亡率均以药物浓度依赖形式增加,且相同药物浓度时KBM5R细胞凋亡率较KBM5细胞高;④4 μmol/L ATO作用于KBM5、KBMSR细胞24小时后,细胞内cleaved caspase-3、-8、-9蛋白表达明显增加.结论:KBM5R细胞对IM具有显著的耐药性;ATO对KBM5、KBM5R细胞均具有增殖抑制和诱导凋亡作用,与野生型细胞KBM5比较,ATO对13151突变的KBM5R细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用更强;ATO通过活化凋亡相关蛋白caspase-3、-8、-9诱导细胞KBM5和KBM5R的凋亡.     

生物标志物在非小细胞肺癌中的研究进展

<正>肺癌是世界范围内常见的癌症且是导致癌症患者死亡的主要原因之一[1],非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占肺癌的80%⁸5%,总体而言,晚期非小细胞肺癌的预后仍然较差,5年生存率不到15%[2]。因此,寻求NSCLC新的治疗手段以及个体化治疗至关重要。当今,NSCLC患者个体化治疗中,利用分子标志物判断预后和指导治疗成为研究热点。通过检测分子标志物指导个体化治疗,能够选择最有效的治疗策略,使疗效最大化,最大程度降低毒性。然而,影响肺癌发病机制的分子生物学机制十分复     

软组织肉瘤治疗进展

肉瘤是一组少见的具有不同临床和病理特征的间叶来源的肿瘤。整体上肉瘤可分为两大类,软组织来源的肉瘤和骨肉瘤。肉瘤大约占成人恶性肿瘤的1%,占儿童恶性肿瘤的15%。软组织肉瘤包含50多种不同的组织学亚型,最常见的亚型包括未分化多形性肉瘤、胃肠间质瘤、脂肪肉瘤、平滑肌肉瘤、滑膜肉瘤和恶性外周神经鞘瘤等。手术是软组织肉瘤最主要的治疗方法,但术后复发率高,预后差,化疗疗效仍不理想。随着人们对其生物学行为认识的加深,近些年涌现的一系列新型靶向药物取得了不错的疗效。总之,软组织肉瘤的治疗需根据疾病的组织学亚型、分子遗传学特点、分期及预后因素采取包括手术、放疗、化疗以及分子靶向治疗在内的个体化治疗模式。      

淋巴瘤的免疫治疗进展

近年来淋巴瘤的发病率逐渐上升,已经成为最常见的恶性肿瘤之一.新的化疗方案、单克隆抗体、小分子靶向药物等治疗方式已经显著改善了淋巴瘤患者的生存.但是,淋巴瘤患者出现复发或耐药的比例仍然很高,因此针对这些患者寻找新的治疗方式至关重要.细胞免疫治疗可以通过引发特异有效的抗肿瘤免疫反应杀灭肿瘤.继承性细胞免疫疗法、免疫调节药物、免疫检查点治疗等免疫治疗方式在复发/难治淋巴瘤患者的治疗中取得了显著的疗效,逐渐开启了淋巴瘤治疗的新时代.     

人HMGN5基因shRNA慢病毒载体构建与RNAi效率的鉴定

目的构建人HMGN5基因的shRNA慢病毒载体并鉴定在肺癌A549和H1299细胞上的沉默效率。方法设计HMGN5基因特异性siRNA靶点,构建于慢病毒pLL-3.7载体,并筛选获得有效的shRNA慢病毒载体,在293T细胞包装成病毒颗粒,将其感染肺癌A549和H1299细胞,应用Real-time PCR方法从mRNA水平上检测HMGN5的沉默效率。结果构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确,包装病毒后滴度达到5×108TU/ml。shRNA慢病毒颗粒感染A549和H1299细胞后HMGN5基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组分别下降了71.7%和50.7%。结论成功构建了HMGN5基因的shRNA慢病毒表达载体,在分子水平能够有效沉默靶基因,为探讨HMGN5在肿瘤基因治疗中的作用奠定了基础。     

肺泡微石症患者磷酸钠协同转运蛋白基因的检测及其变异

目的 检测3例肺泡微石症患者的磷酸钠协同转运蛋白基因(SLC34A2)基因变异情况,探讨该基因对人肺泡上皮细胞A549系(简称A549细胞)中钙、磷转运的影响.方法 采用分段PCR和基因测序的方法对3例肺泡微石症患者的SLC34A2基因进行检测,用Trizol法从新鲜肺组织中获得RNA,逆转录-PCR调取目的 基因,构建该基因真核表达载体,质脂体方法转染A549细胞,逆转录-PCR检测SLC34A2 mRNA的表达,检测细胞上清液中钙、磷含量.细胞实验分为转染组(5×105/孔,4孔)、对照组(5×105/孔,1孔)和空白组(5×105/孔,1孔),实验重复6次.计量资料采用单因素方差分析,多组问两两比较采用SNK-q检验.结果 3例肺泡微石症患者中未发现变异的外显子.获得完整的SLC34A2 cDNA,成功构建peDNA3.1(+)-SLC34A2真核表达载体,并转染A549细胞.转染组SLC34A2 mRNA的吸光度值(2.48.±0.45)明显高于对照组(0.55±0.07)和空白组(0.60±0.06),差异均有统计学意义(q值分别为16.25和15.78,均P＜0.01);转染组细胞上清液中钙、磷含量[(0.110±0.016)mmol/L和(3.8±0.4)mmol/L]明显低于对照组[(0.254±0.047)mmol/L和(7.3±0.8)mmol/L]和空白组[(0.262±0.041)mmoL/L和(7.1±0.4)mmol/L],差异均有统计学意义(q值为8.657～13.892,均P＜0.01).结论 随着SLC34A2基因的表达量增加,细胞外液钙、磷含量随之下降.SLC34A2的变异可能未发生在基因组水平.