三氧化二砷诱导T315I突变细胞KBM5R凋亡机制研究

伊马替尼( Imatinib,IM)是以bcr-abl融合蛋白为作用靶点的治疗慢性髓系白血病(CML)最有效的酪氨酸激酶抑制剂(TKI),但长期应用可使部分CML患者产生IM耐药性[1],特别是bcr-abl基因T315I点突变的CML患者对第一代和第二代TKI均具有较强的耐药性[2].我们前期临床试验已经证明,三氧化二砷( ATO)对T315I突变的KBM5细胞(KBM5R)增殖具有明显的抑制作用,可导致细胞G2/M期阻滞、诱导细胞凋亡,并且ATO对KB M5R细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用明显强于野生型KBM5细胞[3-4].我们通过检测ATO对KBM5、KBM5R细胞bcr-abl mRNA和蛋白水平的变化及其对下游相关信号传导途径PI3K-AKT、JAK-STAT5的影响,探讨ATO对T315I突变KBM5R细胞诱导凋亡的作用机制.     

三氧化二砷对T315I突变细胞株KBM5R细胞周期的影响

目的：探讨三氧化二砷（ATO）对T315I突变的伊马替尼（IM）耐药慢性粒细胞白血病（CML）细胞株KBM5R细胞周期的影响,为对抗CML患者的IM耐药性提供理论依据。方法：选择野生型KBM5细胞作为T315I点突变KBM5R细胞的阴性对照组,根据是否经过ATO处理将实验分为KBM5R细胞空白对照组、KBM5R细胞ATO处理组、KBM5细胞空白对照组和KBM5细胞ATO处理组。应用MTT法检测IM和ATO作用后KBM5和KBM5R细胞的增殖活性;流式细胞术检测ATO作用后KBM5和KBM5R细胞周期的变化;Western blotting法检测ATO作用后KBM5和KBM5R细胞周期调节相关蛋白P21和P27表达的变化。结果：IM作用后耐药组KBM5R细胞IC50与野生型KBM5细胞比较明显增高（P<0.01）;不同浓度（0.5、1.0、2.0、4.0和8.0 μmol·L-1）ATO于不同时间点（24、48、72和96 h）作用于KBM5和KBM5R细胞,与空白对照组比较,ATO处理组细胞均表现为显著的增殖抑制,且随药物浓度增加或作用时间延长细胞的增殖抑制率显著增加（P<0.05）;在相同的药物浓度和时间点,ATO对KBM5R细胞的增殖抑制作用强于野生型KBM5细胞（P<0.05）;2.0、4.0和8.0 μmol· L-1 ATO作用细胞48 h后,KBM5和KBM5R细胞周期中G2/M期细胞所占比例均随药物剂量的增加而增加,且相同药物浓度时KBM5R细胞周期中G2/M期细胞所占比例与KBM5细胞比较差异无统计学意义(P>0.05); ATO作用KBM5和KBM5R细胞48 h后,2.0、4.0和8.0 μmol·L-1 ATO处理组与空白对照组比较细胞内P21和P27蛋白表达均增加,且随药物剂量增加而增加。结论：ATO通过上调P21和P27蛋白水平使KBM5R细胞周期阻滞于G2/M期,细胞周期阻滞是ATO抑制T315I点突变细胞株KBM5R增殖的原因之一。     

DcR3 mRNA在白血病细胞中的表达及意义

目的:探讨DcR3 mRNA在急性白血病(AL)细胞中的表达及其临床意义。方法：选择AL患者46例,其中急性髓系白血病（AML）28例,急性淋巴细胞白血病（ALL）18例,27例非恶性血液病患者作为对照组,采用RT-PCR方法检测骨髓单个核细胞（BMNC）中DcR3 mRNA的表达水平,并分析其与临床参数的关联性。结果：AL组DcR3 mRNA表达阳性率（67.4％）及表达水平（0.56±0.09）高于对照组（40.7％,0.39±0.19）（P<0.05）;AML组DcR3 mRNA表达阳性率(71.4%)及表达水平（0.56±0.09）与ALL组(61.1%,0.53±0.08)比较差异无显著性（P>0.05）;AL患者DcR3 mRNA的阳性表达率在白细胞计数≥30×10⁹•L-1时升高。结论：DcR3基因可能通过抑制白血病细胞凋亡途径参与白血病发病过程。     

老年高脂血症患者治疗前后细胞粘附分子的变化

目的：观察存在血管内皮细胞的粘附分子在高脂血症患者中的变化。方法：测定了21例高脂血症患者（普伐他汀治疗组10例；控制饮食治疗组11例）治疗前后血脂、细胞间粘附分子（ICAM－1）的变化。结果：普伐他汀治疗组在治疗后除血清脂质有意义地下降外（P＜0．001），血清ICAM－1有意义地升高（P＜0．05）。结论：ICAM－1在改善动脉粥样硬化过程中起重要作用。     

缺铁性贫血

缺铁性贫血 (ＩＤＡ)是由于体内贮存铁消耗殆尽 ,不能满足正常红细胞生成的需要而发生的贫血。属于小细胞低色素性贫血。ＩＤＡ是最常见的一种贫血 ,在育龄期妇女和婴幼儿中发病率很高。据世界卫生组织调查 :世界人口的 10 %～ 2 0 %存在缺铁现象 (在出现贫血之前的阶段称为缺铁 ) ,全球约有 6～ 7亿人患缺铁性贫血。1　铁的代谢铁的分布 :体内的铁分为二部分 :①功能性铁 ,包括存在于血红蛋白、肌红蛋白、各种细胞内的酶和辅酶 ,在血浆中运输的铁 ;②贮存铁 ,主要是铁蛋白和含铁血黄素 ,贮存于单核 -巨噬细胞系统 ,机体一旦需要 ,这部分的…     

转录因子Sox2在人肺癌中的表达及其临床意义

目的通过观察干细胞转录因子Sox2在鳞癌中的表达,分析其表达情况与病理类型、分化程度和淋巴结转移等的相关性,探讨Sox2在肺癌中的临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测48例已确诊的不同类型肺癌组织和10例正常肺组织病理标本中Sox2的表达水平。结果 Sox2蛋白在肺鳞癌组织中的阳性表达率为69%,在肺腺癌组织中表达为4.5%,在小细胞肺癌组织中表达为70%,正常组织中无表达,差异具有显著性。Sox2蛋白表达与患者的年龄、性别、分化程度、有无淋巴结转移无明显相关性。结论 Sox2在鳞癌中高表达,在腺癌中几乎不表达,可作为非小细胞肺癌鉴别诊断的辅助指标。     

原发性甲状腺淋巴瘤1例

1临床资料患者,女,60岁,1年前发现颈部肿物,2个月前出现声音嘶哑,因呼吸困难,不能平卧加重2 d入院。20年前曾因甲状腺左叶肿物行甲状腺左叶切除术。查体:颈前不对称,双侧可见肿物隆起,甲状腺左叶及右叶分别可触及直径约2.0 cm×2.0 cm及2.0 cm×3.0 cm大小肿物,质硬,表面光滑,无压痛,活动度欠佳。辅助检查:甲状腺彩超(2012-05-07):甲状腺右叶厚2.9 cm,左叶厚3.6 cm,峡部厚0.8 cm,甲状腺体积明显增     

三氧化二砷对T3151突变细胞株KBM5R的诱导凋亡作用

本研究旨在探讨三氧化二砷(ATO)对耐伊马替尼(IM)并有T3151点突变的慢性髓系白血病(CML)细胞株KBM5R的诱导凋亡作用.选择T3151点突变的CML细胞KBM5R和野生型细胞KBM5为研究对象,用MTT 法检测KBM5R细胞对IM的耐药性及ATO对KBM5、KBM5R细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测ATO诱导KBM5、KBM5R细胞凋亡;Western blot法检测ATO对KBM5、KBM5R细胞凋亡相关蛋白caspase-3、-8、-9的影响.结果表明,①IM作用于KBM5R细胞的IC50值为12.66±0.565 μmol/L,明显高于对KBM5细胞的IC50值(0.303±0.031)μmol/L,两者比较差异具有显著性(p＜0.01);②不同浓度ATO作用于KBM5、KBM5R细胞24、48、72、96小时均表现出显著的增殖抑制作用,且具有浓度依赖性和时间依赖性;相同的药物浓度和时间点ATO对KBM5R细胞的增殖抑制作用强于对KBM5细胞;③ATO(2、4、8 μmol/L)作用于细胞48小时后KBM5、KBMSR 细胞凋亡率均以药物浓度依赖形式增加,且相同药物浓度时KBM5R细胞凋亡率较KBM5细胞高;④4 μmol/L ATO作用于KBM5、KBMSR细胞24小时后,细胞内cleaved caspase-3、-8、-9蛋白表达明显增加.结论:KBM5R细胞对IM具有显著的耐药性;ATO对KBM5、KBM5R细胞均具有增殖抑制和诱导凋亡作用,与野生型细胞KBM5比较,ATO对13151突变的KBM5R细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用更强;ATO通过活化凋亡相关蛋白caspase-3、-8、-9诱导细胞KBM5和KBM5R的凋亡.     

原发性免疫性血小板减少症患者外周血细胞miRNA差异表达分析

本研究通过建立原发性免疫性血小板减少症(ITP)外周血细胞微小RNA(miRNA)表达谱,探讨miRNA在ITP患者和正常健康对照者外周血细胞中的表达差异。应用Exqion miRCURYTM芯片分析ITP患者和正常对照者外周血白细胞miRNA差异表达;分层聚类分析ITP患者和正常对照者之间miRNA表达谱的差异;应用实时PCR方法对表达差异miRNA进行验证。结果表明,在ITP患者与正常对照者外周血白细胞间有159个差异表达的miRNA,其中79个表达显著上调,80个表达显著下调。分层聚类分析显示,ITP存在特异性miRNA表达谱。实时PCR检测结果与芯片分析结果一致。结论:ITP患者外周血细胞存在miRNA表达异常,提示miRNA表达变化可能参与了ITP的发病。