高低转移人大肠癌细胞系基因表达谱差异

目的 用自制肿瘤转移相关基因cDNA微阵列研究人大肠癌高转移细胞系Lovo、SW620及低转移细胞系SW480、LS174T的基因表达谱差异，筛选与大肠癌转移相关的特异基因。方法 分别提取4种大肠癌细胞系及对照的正常大肠上皮组织的mRNA，逆转录成cDNA探针，经cy3和cy5标记后分别与含有399个肿瘤转移相关基因的微阵列杂交．用专用软件分析杂交信号强度。结果 高转移细胞系与低转移细胞系的基因表达谱有显著差异，其中有104个基因的表达值有意义，包括上调基因44个、下调基因60个。结论 大肠癌转移是由其发生过程中多个基因表达的复杂变化决定的，高转移细胞系与低转移细胞系比较存在差异的基因可能与高转移特性有关。     

5个不同肺癌细胞株的基因差异表达谱

目的 :希望获得细胞间基因表达的异同 ,对癌细胞的形成和发展中基因参与提供分析线索。方法 :选用 5个不同转移潜能及来源的体外培养肺癌细胞株H12 99,HLAMP ,PAa ,PGCL3和NiS作为研究对象 ,以永生化的支气管上皮细胞 16HBE为对照 ,采用含有 80 0个基因探针的肺癌相关基因芯片LUs,研究了基因表达的差异。结果 :5个肺癌细胞株差异表达的基因共有 35 5个 ,但共同上调或下调的基因仅有 4个 ,基因表达的变化在不同细胞株之间明显表现出多态性。比较三个高转移细胞株和两个低转移细胞株 ,有 12个基因表达改变出现在高转移细胞株而在低转移株未见明显变化 ,其中有 3个已报道的转移相关基因和 9个未报道和转移相关的基因 ,这些基因大多是膜蛋白、细胞骨架蛋白或 /和细胞信号转导有关 ,基因功能复习提示和肿瘤转移有可能的关联性。结论 :cDNA芯片对于肺癌相关基因的筛选是一个非常有效的研究手段 ;对于临床诊断应用 ,需要在大规模数据收集的基础上建立必要的模式 ,通过多基因系统分析 ,才能获得有效的应用。     

肿瘤转移相关基因cDNA芯片的制备与应用

目的：建立制备肿瘤转移相关基因cDNA基因芯片的方法，并探讨其在肿瘤转移表达谱应用方面的意义。方法：选择了399个已知转移相关基因克隆，经PCR扩增纯化后，以Cartesian Pixsys5500芯片点样仪点布于多聚赖氨酸包被的玻片上；采用Gy3-dUTP和Cy5-dUTP双重荧光标记人大肠癌和肺癌细胞、正常组织、大肠癌和肺癌组织总RNA并与阵列进行杂交。结果：经ScanArrayTM4000共聚焦荧光扫描仪检测，图像背景均匀，信号清晰，效果满意。对大肠癌细胞系和组织标本及肺癌标本表达基因扫描结果行联合聚类分析发现：两种癌的基因表达大多数相同，仅少数有差别，有30种在两种转移癌中呈持续上调或下调的基因，包括运动因子基因、粘附分子、蛋白水解酶、癌基因、抑癌基因、抑制或促进凋亡基因以及诱导血管增生和信号转导的基因等。结论：优化的cDNA基因芯片制备技术用于基因表达分析有较高的效率和可靠的实用性能。检测的肿瘤转移相关基因的表达在两种癌无明显差别，表明不同癌其浸润和转移的分子机制大致相同。     

多发性骨髓瘤的基因表达谱分析

目的 :研究MM患者与正常人骨髓基因的差异表达。方法 :应用cDNA芯片技术对 1 0例初诊多发性骨髓 (MM)患者和 1 0名正常骨髓的单个核细胞的mRNA进行检测。结果 :在 2 0 4 8条基因中共发现差异表达基因5 6 6条。在MM中 2 37条表达增加 ,32 9条表达降低。结论 :MM的发生发展涉及多基因的改变 ,cDNA芯片技术可高效研究多个基因的表达水平     

多发性骨髓瘤的基因表达谱分析

目的：研究MM患者与正常人骨髓基因的差异表达。方法：应用cDNA芯片技术对10例初诊多发性骨髓(MM)患者和10名正常骨髓的单个核细胞的mRNA进行检测。结果：在2048条基因中共发现差异表达基因566条。在MM中237条表达增加，329条表达降低。结论：MM的发生发展涉及多基因的改变，cDNA芯片技术可高效研究多个基因的表达水平。     

高低转移人大肠癌细胞系基因表达谱差异

目的 用自制肿瘤转移相关基因cDNA微阵列研究人大肠癌高转移细胞系Lovo、SW620及低转移细胞系SW480、LS174T的基因表达谱差异,筛选与大肠癌转移相关的特异基因。方法 分别提取4种大肠癌细胞系及对照的正常大肠上皮组织的mRNA,逆转录成cDNA探针,经cy3和cy5标记后分别与含有399个肿瘤转移相关基因的微阵列杂交,用专用软件分析杂交信号强度。结果 高转移细胞系与低转移细胞系的基因表达谱有显著差异,其中有104个基因的表达值有意义,包括上调基因44个、下调基因60个。结论 大肠癌转移是由其发生过程中多个基因表达的复杂变化决定的,高转移细胞系与低转移细胞系比较存在差异的基因可能与高转移特性有关。     

cDNA微阵列技术对肺鳞癌、肺腺癌基因表达谱的研究

目的：利用cDNA微阵列技术研究肺鳞癌、肺腺癌基因表达谱，并与肺炎性假瘤基因表达谱进行比较，筛选肺鳞癌、肺腺癌的差异表达基因，及肺鳞癌、肺腺癌的共同表达基因，为研究肺癌的分子机制及肺癌的早期诊断和治疗提供线索。方法：用含4096个基因的人基因表达谱芯片研究肺鳞癌、肺腺癌及肺炎性假瘤的基因表达谱。结果：肺鳞癌差异表达基因591个，其中筛选出在肺炎性假瘤中没有差异表达的基因476个，上调的有293个，下调的有183个；肺腺癌差异表达基因524个，其中在肺炎性假瘤中没有差异表达的基因460个，上调的有214个，下调有246个；有113个基因在肺鳞癌与肺腺癌中均出现差异表达。结论：肺鳞癌、肺腺癌存在不同的基因表达谱，筛选出的特异表达基因和共同表达基因为进一步研究肺癌的发生、发展和肺鳞癌与肺腺癌的分子特征提供了重要线索。     

肿瘤转移相关基因cDNA芯片的制备与应用

目的建立制备肿瘤转移相关基因cDNA基因芯片的方法,并探讨其在肿瘤转移表达谱应用方面的意义。方法选择了399个已知转移相关基因克隆,经PCR扩增纯化后,以Cartesian Pixsys 5500芯片点样仪点布于多聚赖氨酸包被的玻片上;采用Cy3-dUTP和Cy5-dUTP双重荧光标记人大肠癌和肺癌细胞、正常组织、大肠癌和肺癌组织总RNA并与阵列进行杂交。结果经ScanArrayTM 4000共聚焦荧光扫描仪检测,图像背景均匀,信号清晰,效果满意。对大肠癌细胞系和组织标本及肺癌标本表达基因扫描结果行联合聚类分析发现:两种癌的基因表达大多数相同,仅少数有差别,有30种在两种转移癌中呈持续上调或下调的基因,包括运动因子基因、粘附分子、蛋白水解酶、癌基因、抑癌基因、抑制或促进凋亡基因以及诱导血管增生和信号转导的基因等。结论优化的cDNA基因芯片制备技术用于基因表达分析有较高的效率和可靠的实用性能。检测的肿瘤转移相关基因的表达在两种癌无明显差别,表明不同癌其浸润和转移的分子机制大致相同。     

人肺腺癌转移相关基因的初步筛选及验证

目的 利用建立的人肺癌高转移细胞系筛选转移基因,为研究肺癌转移的分子标志奠定基础. 方法 人肺癌细胞系SPC-A-1和相应的高转移细胞系SPC-A-1sci常规培养后提取总RNA,采用cDNA芯片技术检测两种细胞中差异表达基因,对部分有差异表达的基因进行蛋白免疫印迹（Western blot）分析验证. 结果 通过基因芯片技术筛选出了7 649个可能与肺癌转移相关的基因,其中上调基因3 891个,下调基因3 758个,功能涉及细胞黏附、凋亡、转录、信号传导、细胞周期和代谢等.经过Western分析,CD44与CDC42EP3在SPC-A-1sci中的表达明显高于SPC-A-1,而FNI的结果则相反.这与基因芯片的结果相一致. 结论 基因芯片高通量筛选提示7600余条基因可能与人肺癌转移相关,为进一步研究肺癌的转移机制和发现新的转移相关基因提供了较为有价值的线索.     

STIL对胃癌细胞基因表达谱的影响

目的 采用基因表达谱芯片联合生物信息学分析,初步探索STIL促进胃癌发生发展的分子机制。方法 采用靶向STIL的慢病毒ShRNA(ShSTIL)以及乱码序列ShRNA(ShCon)转染SGC-7901胃癌细胞系,提取总RNA,合成cDNA,反转录合成生物素标记的核酸探针,片段化后与全基因组表达谱芯片杂交,采集数据,利用生物信息学对差异表达基因(DEGs)进行基因本体(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)、转录因子调控和蛋白互作分析。结果 与ShCon组相比,ShSTIL组显著上、下调的基因分别为417个、87个(P<0.05,差异倍数>1或<-1)。GO和KEGG分析显示,DEGs位于胞浆、外泌体、高尔基复合体及生物膜,与泛素介导的蛋白水解、干细胞多能性调控及P53信号通路有关。KEGG通路相关基因、转录因子调控及蛋白互作联合分析显示,IGF1R、STUB1、SKP2、FOXO1位于网络的中心位置,可能与胃癌发生发展密切相关。结论 STIL可能通过互作激活E3泛素连接酶STUB1或SKP2,促进转录因子FOXO1降解,调控IGF1R表达,从而促进胃癌的发生发展。     

KAI1/CD82基因表达与非小细胞肺癌转移关系的初步研究

目的：探讨KAI1／CD82基因表达与非小细胞肺癌转移的关系。方法：S-P免疫组化法对61例非小细胞肺癌及相应正常肺组织、23例转移灶中KAI1／CD82蛋白的表达进行检测分析。结果：在正常肺泡上皮、支气管鳞状上皮等有良好表达，在癌组织中表达水平明显下降，阳性表达率31．15％(19／61)，表达减弱24．59％(15／61)，表达缺失44．26％(27／61)。在肿瘤细胞膜上表达分布不均，呈粗颗粒状。转移组原发灶KAI1／CD82蛋白的表达水平显著减弱于无转移组(P=0．0004)，阳性表达率分别占7．14％，51．52％。23例转移灶与原发癌表达水平配对比较分析，转移灶中KAI1蛋白表达水平有下降趋势，二者KAI1／CD82蛋白表达缺失率有显著差异(P=0．0230)。结论：KAI1／CD82低表达可能与非小细胞肺癌转移有关，可作为预测肿瘤转移潜能的标记物。     

非小细胞肺癌与淋巴结转移癌组织中FHIT基因异常表达的相关性

目的 :检测脆性组氨酸三联体 (FHIT)基因在正常肺组织、非小细胞肺癌 (non smallcelllungcancer)与淋巴结转移癌组织中表达 ,探讨FHIT基因与肺癌发生及转移的关系。方法 :用免疫组化SP(streptavidinperoxidaseconju gatedmethod ,SP)法检测 2 0例无淋巴结转移的肺癌组织 ,2 0例肺癌及其相应的淋巴结转移癌组织和 15例正常肺组织中FHIT基因的表达水平 ,用图像分析系统测量FHIT蛋白表达的阳性率和平均光密度。结果 :FHIT蛋白在正常肺组织、无淋巴结转移的肺癌、肺癌及其相应的淋巴结转移癌组织中的阳性率分别为 89.1%、6 0 .5 %、5 4 .1%、30 .4 % ,平均光密度分别为 (0 .2 74± 0 .0 2 3)、(0 .16 5± 0 .0 16 )、(0 .0 87± 0 .0 0 4 )、(0 .0 4 9± 0 .0 0 7)。肺癌组织FHIT蛋白表达阳性率和强度明显低于正常肺组织 (P <0 .0 1) ,淋巴结转移癌组织FHIT蛋白表达明显低于其它 3组 (P <0 .0 1)。结论 :在肺癌发生、浸润、转移病变阶段中 ,FHIT基因表达下调 ,这揭示肺癌的演进过程与FHIT有密切关系。     

非小细胞肺癌组织中p16基因表达的意义

目的探讨p16基因蛋白在人非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法应用免疫组化SP法检测45例非小细胞肺癌组织、21例肺良性疾病组织中p16基因蛋白的表达情况。结果肺良性疾病中p16蛋白阳性率85．7％,高于肺癌组织的51．1％,差异有统计学意义（P=0．004）;p16蛋白表达阳性率肺癌Ⅰ、Ⅱ期高于Ⅲ、Ⅳ期,无淋巴结转移者高于有淋巴结转移者（P〈0．05）。结论p16基因蛋白的表达情况与非小细胞肺癌的发生、发展有关。     

EGFR mRNA和COX-2 mRNA在NSCLC组织中表达的临床意义

目的　探讨表皮生长因子受体 (epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)mRNA及环氧合酶 2 (cyclooxygenase 2 ,COX 2 )mRNA在非小细胞肺癌 (non smallcelllungcancer,NSCLC)组织中表达的临床意义。 方法　抽取 4 8例NSCLC组织中的RNA ,应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测其中EGFRmRNA及COX 2mRNA的表达。结果　在 2 8例肿瘤组织中存在EGFRmRNA的表达 ,T3 4期的患者的EGFRmRNA表达率显著高于T1 2期的患者 (P <0 .0 5 ) ;在 36例肿瘤组织中存在COX 2mRNA的表达 ,肺腺癌COX 2mRNA的表达率显著高于肺鳞癌(P <0 .0 5 ) ,COX 2mRNA的表达率与 pTNM分期关系密切 (P <0 .0 5 ) ,COX 2mRNA的表达强度与原发肿瘤、淋巴结转移及 pTNM分期的关系密切 (P <0 .0 5 )。COX 2mRNA阳性表达的患者其EGFRmRNA表达率显著高于COX 2mRNA阴性表达的患者 (P <0 .0 5 ) ;EGFRmRNA与COX 2mRNA两者有显著相关性 (相关系数rs=0 .380 7,P <0 .0 5 )。结论　NSCLC中EGFRmRNA和COX 2mRNA的表达在NSCLC的发生、发展和转移中具有重要意义 ,二者可能有协同作用 ,可作为评估NSCLC进展及判断预后的重要指标。     

狭缝印迹杂交分析癌转移抑制基因nm23在人肺癌中的表达

为探讨癌转移抑制基因（ｎｍ２３）在人肺癌发生、发展中的作用，采用狭缝印迹杂交技术检测了不同部位、不同性质人肺组织中的ｎｍ２３－Ｈ１和ｎｍ２３－Ｈ２基因的ｍＲＮＡ表达。结果发现，ｎｍ２３－Ｈ１和ｎｍ２３－Ｈ２基因的ｍＲＮＡ表达，都有从正常肺组织、肺良性病变组织、非癌肺组织及癌旁组织、癌灶组织、到癌转移淋巴结组织逐渐降低的趋势。其中，肺癌组织较正常肺组织的ｎｍ２３－Ｈ２基因ｍＲＮＡ表达显著降低（Ｐ＜０．０５），癌转移淋巴结组织较正常肺组织的ｎｍ２３－Ｈ１和ｎｍ２３－Ｈ２ｍＲＮＡ表达均显著降低（Ｐ＜０．０５）。肺癌组织的ｎｍ２３基因表达与淋巴结有无癌转移无明显相关关系（Ｐ＞０．０５）。提示ｎｍ２３基因表达降低可能与肺癌发生有关，未发现ｎｍ２３有癌转移抑制作用。     

Bcl-xL在非小细胞肺癌中的表达研究

目的:观察非小细胞肺癌组织与癌旁组织中Bcl-xL的基因转录和蛋白表达水平,探讨Bcl-xL在非小细胞肺癌发生发展中的可能作用,为非小细胞肺癌的诊断和治疗提供参考。方法:反转录PCR和免疫印迹的方法分别检测60例临床确诊的非小细胞肺癌组织与癌旁组织中Bcl-xL基因表达和Bcl-xL蛋白的水平,并与肺良性病变组织比较。结果:非小细胞肺癌组织的Bcl-xL mRNA水平明显高于癌旁组织和肺良性病变组织(P<0.01),mR-NA水平与临床分期呈正相关,与其他临床病理相关因素(性别、年龄、肿瘤大小、发生部位、组织学类型、分化程度)无明显相关,而癌旁组织和肺良性病变组织Bcl-xL mRNA水平之间没有差别(P>0.05)。蛋白表达检测结果与mR-NA水平高度一致。结论:非小细胞肺癌组织中Bcl-xL基因和蛋白表达水平明显升高,可能促进了肿瘤的发生发展,可以考虑作为非小细胞肺癌临床分期和评价临床预后的参考指标。     

肺癌细胞株EGFR和MRP基因mRNA表达相关性研究

目的 研究肺癌细胞株表皮生长因子受体基因（EGFR gene)mRNA与多药耐药性相关蛋白基因－MRP基因（MRPgene)mRNA表达相关性。方法 原位分子杂交技术检测耐药性／非耐药性肺癌细胞株EGFR、MRP基因mRNA表达。结果 耐药性／非耐药性肺癌细胞株均有不同程度EGFR、MRP基因mRNA表达,其表达与肺癌细胞株耐药性相关,且EGFR和MRP基因mRNA表达有明显相关性。结论 EGFR基因MRP基因密切相关并影响肺癌细胞耐药性。     

非小细胞肺癌早期淋巴转移机理的研究

目的 探讨非小细胞肺癌及癌周淋巴管形态学特征与淋巴结转移的机理。方法 应用双重免疫组化及图象分析和透射电镜观察55例非小细胞肺癌组织及癌周组织内淋巴管的细微分布、形态和结构。结果 发现非小细胞肺癌组织内有新生的毛细淋巴管,癌周组织中毛细淋巴管的分布明显高于正常组织,淋巴结转移组的Vv,NA,及Lv平均值较非转移组的增高。随着癌的浸润发展,癌周组织毛细淋巴管数量增多,密度增加,形态结构变异,内皮细胞间连接呈开放状态,并可见癌细胞通过开放的连接通道进入淋巴管。结论 非小细胞肺癌及癌周组织内淋巴管增生,形态结构变异是癌细胞淋巴道转移的可能原因。     

肺癌脊椎转移的外科治疗探讨

２０例肺癌脊转移患者,经前方椎体切或／或减主骨水泥填充固定共１８例。３例同期行椎体转移癌和部病变切除;化疗和放疗作为辅助手段。结果：１２例疼痛得到缓解,截瘫或轻瘫除１例外获完全或部分恢复,平均存活８个月。基于临床资料,认为外科手术可改善生存质量。