丹黄通脉方对大鼠颈动脉粥样硬化性狭窄模型炎性反应的影响

目的研究丹黄通脉方(DHTMD)对大鼠颈动脉粥样硬化性狭窄模型炎性反应的影响。方法将大鼠随机分为四组,每组10只。三组采用高脂加高蛋氨酸复合饲料喂养4 W后行颈总动脉球囊拉伤术法制备大鼠颈动脉狭窄模型,空白组给予普通饲料喂养,其余三组给予高脂加高蛋氨酸复合饲料喂养,阳性药组给予辛伐他汀2.5 mg/kg,DHTMD组给予DHTMD 20 g/kg生药量,配制成10 mL/kg的药液,灌胃给药,一天两次。继续喂养8 W后,检测血脂四项、TNF-α、CRP、ICAM-1及Hcy的水平。结果与空白组比较,4W时其它三组大鼠的TC和Hcy明显升高(P<0.05);治疗8 W后与模型组比较,DHTMD组和阳性药组的Hcy、CRP、TNF-α、ICAM-1、TC、TG、LDL-C水平均有显著降低(P<0.05);与阳性药组比较,DHTMD组的Hcy、CRP、TNF-α、ICAM-1及LDL-C水平降低且有统计学意义(P<0.05)。结论 DHTMD具有调节血脂代谢和抗炎作用,能够抑制颈动脉粥样硬化的形成,防治缺血性脑血管疾病。     

心肌细胞面积与其活力缺乏相关关系

目的:建立培养心肌细胞活力的测定与简便的面积测量方法,观测不同培养条件下,新生大鼠心肌细胞面积与活力的关系.方法:采用一步伊红染色法与NIH Image软件测量心肌细胞面积.MTT比色法测量心肌细胞的A490 nm值,以A490 nm/总细胞数之比作为衡量心肌细胞活力的指标.结果:心肌细胞面积随培养时间延长而增大,随接种密度增加而减小,且有血清培养组的面积明显大于无血清培养组(P<0.01).心肌细胞的A490 nm值与A490 nm/总细胞数之比随培养时间延长均保持不变,当细胞接种密度为4.5×104/cm2时,A490 nm/总细胞数之比达峰值,且无血清培养组的A490 nm值与A490 nm/总细胞数之比皆明显低于有血清组(P<0.01).结论:在培养时间与细胞接种密度不同的培养条件下,培养新生大鼠心肌细胞面积的改变并未对其活力产生明显影响,即面积与活力之间缺乏相关关系.     

铅暴露对生长发育期大鼠肝、肾功能及血液学指标的损伤作用研究

目的通过检测铅中毒大鼠肝、肾功能及部分血液学指标,阐明铅暴露对发育期大鼠肝、肾功能及血液学指标的损伤作用,为铅中毒的毒性效应研究以及防治提供实验依据。方法大鼠醋酸铅饮水染毒建立模型,通过模型肝、肾功能及血液学指标的改变,探讨铅暴露对大鼠肝、肾功能的损伤作用。结果染铅大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平较对照组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);血清胆碱酯酶(CHE)水平较对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),提示肝细胞损伤;染铅大鼠血清尿素氮(BUN)、胱抑素C(CYS-C)水平较对照组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),提示肾小球率过滤及肾功能损伤;铅暴露大鼠红细胞、血红蛋白、血小板数量下降显著,差异有统计学意义(P<0.05),提示贫血及凝血机制障碍。结论慢性铅暴露可以引起生长发育期大鼠的肝、肾功能损伤及贫血的发生。     

ndrg2基因2种亚型重组腺病毒载体的构建

目的：构建表达N-myc下游调节基因2（ndrg2）2种亚型的重组腺病毒载体,为与ndrg2相关肿瘤的基因治疗奠定基础.方法：采用腺病毒表达系统ViraPowerTM Adenoviral Expression System构建腺病毒载体.首先将ndrg22种亚型（长短2种亚型分别命名为ndrg2L,ndrg2S）利用酶切、连接、转化、扩增后提取质粒等方法克隆入入门载体pENTR2B以获得入门克隆pENTR2B-NDRG2L和pENTR2B-NDRG2S,经双酶切及PCR鉴定正确后,用重组酶LR Clonase^TMⅡ Enzyme Mix进行入门克隆与表达载体pAd-CMV/V5-DEST间的重组反应,以获得表达克隆pAd-CMV/V5-DEST-NDRG2L和pAd-CMV/V5-DEST-NDRG2S的质粒.表达克隆经PCR鉴定后用限制性内切酶PacⅠ线性化后转染HEK293A包装细胞得到重组腺病毒（分别命名为Ad-NDRG2L和Ad-NDRG2S）,经过反复的感染扩增后,用半数组织培养感染剂量法（TCID50）检测病毒滴度,用Western Blot法检测重组病毒载体是否能正确表达NDRG2蛋白.结果：证实入门克隆pENTR2B-NDRG2L/S和表达克隆pAd-CMV/V5-DEST-NDRG2L/S经酶切鉴定和PCR鉴定质粒构建正确,转染HEK293A细胞并反复扩增后获得的病毒滴度分别为：Ad-NDRG2L,4.0×10^12空斑形成单位（PFU）/L;Ad-NDRG2S,6.3×1012PFU/L.且这2个病毒能正确表达NDRG2蛋白.结论：成功构建了ndrg2基因长短2种亚型的重组腺病毒载体,并包装扩增病毒,可为肿瘤基因治疗的研究提供依据.     

新生大鼠心肌细胞培养技巧

0　引言　原代培养心肌细胞作为一种主要的研究模型 ,被广泛应用于心血管研究之中 .我们实验室经过长期尝试 ,摸索出了一些行之有效的方法 ,并积累了一些经验 ,现总结如下 :1　新生大鼠鼠龄的选择　新生大鼠心肌细胞在出生后 3ｄ内具有部分的增殖能力 ,成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞 ,不再具有分裂增殖能力 .因此 ,大鼠出生时间越短 ,其心肌细胞分离后成活率越高 ,越容易贴壁生长 .大量观测表明 ,选择 13ｄ龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想 .其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳 .2　消化酶的选择及使用　新生大鼠心肌细胞…     

DDR2/Fc融合基因真核表达载体的构建及表达

目的:构建DDR2/Fc真核表达载体,使其在HEK293细胞中进行表达. 方法:采用PCR技术,分别从大鼠脑组织、含人IgG1 Fc全长互补DNA(cDNA)的质粒中扩增出盘状结构域受体2(DDR2)的DS区域、Fc段,以定向克隆的方法将其串联至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,获得重组表达载体DDR2/Fc-pcDNA3.1(-);采用脂质体转染技术转染HEK293细胞; RT-PCR、免疫印迹检测融和蛋白的表达. 结果:DNA测序和限制型酶切鉴定证明两段基因正确克隆至pcDNA3.1(-)的多克隆位点,细胞裂解物中检测到融合蛋白的表达,其分子质量与预期大小一致,该融合蛋白能正确表达于HEK293细胞中. 结论:成功构建了DDR2/Fc融和表达载体,表达了融合蛋白.     

复合营养素对寒冷暴露大鼠骨骼肌功能的保护作用

目的观察复合营养素对寒冷暴露大鼠骨骼肌功能的保护作用。方法雄性SD大鼠32只,按体重随机平均分为饮用水灌胃室温对照组(n=8)、复合营养素灌胃室温对照组(n=8)、饮用水灌胃寒冷暴露组(n=8)和复合营养素灌胃寒冷暴露组(n=8)。灌胃3周后进行急性寒冷暴露,暴露温度-15℃,时间6h。观察每组大鼠骨骼肌细胞ATP含量变化及细胞超微结构的改变。结果①寒冷暴露使大鼠骨骼肌细胞ATP含量下降(1.353±0.873μmol/L),明显低于室温对照组(6.594±0.421μmol/L)(P0.01),电镜结果显示:细胞线粒体肿胀、易位,肌浆网肿胀,Z线紊乱。②复合营养素可以明显增加寒冷暴露大鼠骨骼肌细胞ATP含量(5.887±0.385μmol/L),与室温对照组(6.594±0.421μmol/L)相比差异无统计学意义(P0.05),电镜结果显示:骨骼肌细胞超微结构正常,线粒体形态完整、排列整齐。结论复合营养素对寒冷暴露大鼠骨骼肌功能有很好的保护作用。     

思密达配伍小儿止泻散治疗迁延性腹泻

目的　寻找针对小儿迁延性腹泻的治疗方法。方法　选择 1994年 1月 - 2 0 0 1年 1月 0 - 7岁门诊及住院部就诊符合诊断标准的 137例。随机分组 ,治疗组 10 2例予思密达配伍小儿止泻散治疗 ,对照组 35例行双向对照观察。结果　对照组 35例总有效率 6 5 .71% ,治疗组 10 2例总有效率 91.18% ,治疗组明显优于对照组 ,且疗程缩短 ,一般营养、代谢情况改善。两者比较有统计学意义。结论　小儿止泻散与思密达伍用治疗小儿迁延性腹泻较单用思密达疗效显著 ,值得临床推广。     

人DDR2基因pShuttle-CMV穿梭载体的构建及表达

目的:构建带有flag标签的人DDR2 pShuttle-CMV载体, 检测其真核表达并观察DDR2分子的亚细胞分布. 方法:以含有人全长DDR2 cDNA的质粒为模板,用PCR方法扩增DDR2基因的C-端(DDR2-C),并在其C末端带上含24 bp的flag标签,Nco I/EcoR V酶切后亚克隆入含有DDR2全长序列的pMD18-T载体,即替换掉原有DDR2序列的C-端,引入flag标签,测序正确后再克隆入pShuttle-CMV表达载体,酶切鉴定正确后采用脂质体法瞬时转染HEK293细胞,Western Blot检测DDR2-flag在细胞中的表达. 瞬时转染Hela细胞,通过间接免疫荧光法观察DDR2分子在细胞内的分布情况. 结果:测序及酶切显示DDR2-flag/pShuttle-CMV载体构建符合预期;脂质体法转染HEK293细胞,24 h后用Western Blot方法检测到目的蛋白的表达;对转染了目的载体的细胞应用FITC标记的抗体进行间接免疫荧光实验,激光共聚焦显微镜观察到DDR2分子主要分布于细胞质与细胞膜. 结论:成功构建并表达了C-末端带flag标签的DDR2真核表达载体,使其在真核细胞中表达,并观察到其亚细胞分布.