常氧培养与低氧培养肺间充质细胞凋亡的比较

背景:小鼠间充质细胞在体外培养扩增困难,细胞凋亡是否是其原因之一,目前未知.目的:观察常氧和低氧条件下,小鼠肺间充质细胞的凋亡率是否有差别.方法:用组织块培养法获得 C57BL/6J 雄性小鼠肺间充质细胞,分别在常氧(体积分数 20%氧)和低氧(体积分数 5%的氧)条件下培养,观察细胞内活性氧水平、凋亡率和超微结构的变化.结果与结论:体积分数为 5%和 20%氧气培养的细胞随代数的增加造血细胞均逐渐减少.体积分数20%氧气培养的小鼠肺间充质细胞内的活性氧水平明显高于体积分数 5%氧气培养的细胞.体积分数 20%氧气培养的肺间充质细胞的凋亡现象较常见,体积分数 5%氧气培养的细胞凋亡现象较少见.提示常氧培养条件下,细胞的凋亡率增加,降低氧浓度可减少细胞的凋亡率.     

脐带间充质干细胞体外分化为有功能的低免疫原性肝细胞样细胞

目的 观察人脐带来源的间充质干细胞(UC-MSCs)体外诱导分化为肝细胞样细胞(DHC)后,是否具有肝细胞的生物学特性和功能,以及其免疫原性的变化.方法 采用改良的二步法肝细胞分化培养体系体外诱导UC-MSCs向肝细胞分化,并用RT-PCR和免疫荧光染色法检测诱导后不同时间DHC肝细胞特异性标记的表达;采用ELISA法检测细胞培养液中白蛋白(ALB)和尿素的浓度,以及混合淋巴细胞培养检测DHC对淋巴细胞增殖能力的影响.结果 UC-MSCs低表达甲胎蛋白(AFP)、ALB和细胞角蛋白-19(CK-19)的mRNA和蛋白,成肝诱导分化后14和28 dDHC均高表达肝细胞标志AFP、ALB、CK-19以及色氨酸2,3-加双氧酶基因.诱导后的DHC能够以时间依赖方式产生ALB和分泌尿素,不表达人白细胞DR抗原,而且能够抑制淋巴细胞增殖.结论 UC-MSCs在体外能够分化为有功能的DHC且具有低免疫原性的特征.     

体外诱导小鼠胚胎干细胞血管形成

目的探讨体外定向诱导胚胎干细胞向内皮细胞分化的条件,模拟体内血管生成和血管新生过程,为研究新血管的形成提供一种新思路。方法体外培养小鼠胚胎干细胞诱导形成胚胎小体,将11 d的胚胎小体种植到胶原中诱发出芽性血管新生;通过免疫组织化学染色方法检测胚胎小体及其出芽向内皮细胞和功能血管的分化。结果胚胎干细胞在体外能自发形成胚胎小体,其内部含有血管样结构,并伴有平滑肌的分化;种植到胶原中的胚胎小体能再现出芽性血管新生。结论胚胎干细胞存体外不但能定向分化成内皮细胞,还能再现体内血管生成、血管新生及动脉生成过程。     

胎儿真皮间充质干细胞中的全能性相关转录因子的表达

背景:人真皮纤维母细胞或间充质干细胞可形成诱导性多能干细胞,但不同研究者所用的转录因子组合却并不相同。目的:分离人胎儿真皮间充质干细胞,检测其全能性相关转录因子的表达。方法:水囊引产5月龄胎儿,按照既往分离培养间充质干细胞的方法,得到胎儿真皮间充质干细胞。结果与结论:胎儿真皮间充质干细胞高表达Oct4和C-myc、中度表达Sox2,是形成诱导性多能干细胞较好的体细胞。     

用组织块培养法从骨髓滤网颗粒物中分离大量骨髓间充质干细胞

本研究探讨能否从废弃的骨髓滤网颗粒物中获得间充质干细胞(MSC)。应用组织块培养法,对2例正常供者骨髓滤网中的颗粒物进行分离培养,计数获得的MSC数量,对其表型和分化能力进行鉴定。结果表明:骨髓滤网颗粒物中存在大量的MSC,经过3代扩增后其数量接近107;这些细胞具有典型的MSC形态和表型特征,可以分化为骨、软骨和脂肪细胞。结论:用组织块培养法可以从骨髓滤网颗粒物中获得大量MSC。     

胎儿真皮间充质干细胞中的全能性相关转录因子的表达***◆

背景：人真皮纤维母细胞或间充质干细胞可形成诱导性多能干细胞,但不同研究者所用的转录因子组合却并不相同。 目的：分离人胎儿真皮间充质干细胞,检测其全能性相关转录因子的表达。 方法：水囊引产5月龄胎儿,按照既往分离培养间充质干细胞的方法,得到胎儿真皮间充质干细胞。 结果与结论：胎儿真皮间充质干细胞高表达Oct4和C-myc、中度表达Sox2,是形成诱导性多能干细胞较好的体细胞。     

牙胚组织中可分离得到大量间充质干细胞

背景：已经有研究从牙髓、牙囊和牙周组织中分离得到间充质干细胞。牙胚是牙的前体,能否从中直接分离间充质干细胞,目前未知。目的：从人流产胎儿牙胚中分离间充质干细胞,检测其生物学特征。方法：无菌条件下挖出水囊流产胎儿牙床中的整个牙胚,剪碎后分别用胶原酶Ⅱ和胰酶消化,过滤除去颗粒物后,细胞悬液用培养液洗涤,培养、扩增得到贴壁细胞,进行细胞形态学观察、免疫表型测定和多向分化功能鉴定。结果与结论：经过3次传代后,从单个胎儿牙胚中即可获得超过107形态均匀的、梭形贴壁细胞,其表达CD105、CD73、CD90和CD44等表面标志,不表达CD34、CD45标志;在体外向成骨、成脂分化,在体内可以分化为软骨细胞。提示用贴壁法可从人胎儿牙胚中分离得到大量的间充质干细胞。     

常氧培养与低氧培养肺间充质细胞凋亡的比较

背景：小鼠间充质细胞在体外培养扩增困难,细胞凋亡是否是其原因之一,目前未知。 目的：观察常氧和低氧条件下,小鼠肺间充质细胞的凋亡率是否有差别。 方法：用组织块培养法获得C57BL/6J雄性小鼠肺间充质细胞,分别在常氧(体积分数20%氧)和低氧(体积分数5%的氧)条件下培养,观察细胞内活性氧水平、凋亡率和超微结构的变化。 结果与结论：体积分数为5%和20%氧气培养的细胞随代数的增加造血细胞均逐渐减少。体积分数20%氧气培养的小鼠肺间充质细胞内的活性氧水平明显高于体积分数5%氧气培养的细胞。体积分数20%氧气培养的肺间充质细胞的凋亡现象较常见,体积分数5%氧气培养的细胞凋亡现象较少见。提示常氧培养条件下,细胞的凋亡率增加,降低氧浓度可减少细胞的凋亡率。     

IL-27通过信号通路p38MAPK和P13K途径调节中性粒细胞Mac-1、fMLP-R及IL-1β表达

本研究探讨IL-27调节人外周血中性粒细胞中黏附分子Mac-1、趋化因子受体fMLP—R和促炎因子IL-1β表达的信号通路。采用Ficoll密度梯度离心及低渗裂解残存红细胞方法分离高纯度的外周血中性粒细胞。用RT-PCR方法检测中性粒细胞IL-27受体（WSX-1／TCCR和gp130）mRNA表达。分别应用IL-27及信号通路p38MAPK、P13K和ERK抑制剂SB203580、LY294002、U0126处理中性粒细胞,用实时定量RT-PCR检测作用前后fMLP-R和IL-1βmRNA水平变化;应用放射免疫法检测作用前后培养上清液中IL-1β的水平变化;流式细胞术检测作用前后Mac-1表达水平变化。结果表明：人外周血中性粒细胞协同表达IL-27受体的两个亚单位WSX-1／TCCR和gp130,IL-27下调中性粒细胞表面黏附分子Mac-1表达（P〈0．05）,SB203580阻断了IL-27对Mac-1的下调作用（P〈0．05）,而LY294002及U0126无阻断作用（P〉0．05）。相反,IL-27上调中性粒细胞中fMLP-R和IL-1BmRNA的表达并能增加IL-1β释放（P〈0．05）,LY294002阻断了IL-27对fMLP-R和IL-1β的上调作用（P〈0．05）。而SB203580及U0126无阻断作用（P〉0．05）。结论：IL-27与IL-27R相互作用,可能通过p38MAPK和PI3K信号途径调节人外周血中性粒细胞中Mac-1、fMLP-R及IL-1β表达。