内皮抑素基因转移对乳腺癌细胞生长影响的体内和离体研究

目的：探讨内皮抑素(ES)基因转移在乳腺癌抗血管新生中的作用。 方法: 通过建立逆转录病毒介导的ES基因转移系统，用ES病毒转染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231。以聚合酶链反应（PCR）、MTT法和裸鼠成瘤实验分析ES的生物学特性及其功能。 结果： 脂质体转染与交互感染策略获得ES病毒生产细胞；以ES病毒转染MDA-MB-231细胞后，经PCR分析显示其内有ES基因整合并持续表达，其分泌的ES能明显抑制内皮细胞EA.hy926的增殖(P<0.05)，但对肿瘤细胞的离体生长无明显影响（P>0.05）；裸鼠皮下移植瘤模型表明，ES基因表达可明显抑制MDA-MB-231细胞的生长(P<0.01)；实验组的肿瘤微血管密度（MVD）和血管内皮生长因子(VEGF)表达低于对照组(P<0.05)。 结论: 逆转录病毒载体介导的ES基因在乳腺癌细胞中可有效表达，能明显抑制血管内皮细胞生长，并通过旁分泌方式抑制血管新生，具有显著的抗肿瘤生长的作用。     

下调RNF138基因对胶质瘤细胞株U251增殖、凋亡及细胞周期影响的研究

目的探讨RNA干扰下调胶质瘤细胞株高表达基因RNF138对胶质瘤细胞株U251体外增殖、凋亡以及细胞周期的影响。方法构建下调RNF138基因的siRNA,通过慢病毒转染导入胶质瘤细胞株U251,设立阴性干扰对照组及空白对照组,荧光显微镜观察转染效率;实时荧光定量PCR检测敲减效率;运用Cellomics仪器连续检测U251体外增殖情况;流式细胞仪检测U251凋亡及细胞周期变化情况。结果慢病毒载体高效、稳定转染U251细胞,靶向RNF138的siRNA有效抑制RNF138基因表达,使RNF138mRNA表达减少60%,U251体外增殖明显减缓,凋亡明显增加,细胞阻滞在G2/M期。结论 RNA干扰抑制RNF138基因表达可以明显抑制胶质瘤细胞株U251体外增殖,促进其凋亡,影响细胞周期,阻滞细胞分裂。     

SHG-44绿色荧光裸鼠原位模型的建立

目的 建立SHG-44绿色荧光裸鼠原位模型.方法 将C57BL/6J-增强绿色荧光蛋白(ECFP)转基因小鼠与裸小鼠进行交配,在继代时严格挑选都表达EGFP基因的无毛雄鼠(♂)与有毛母鼠(♀)交配,通过肉眼、荧光显微镜和分子生物学等方法观察EGFP基因在裸小鼠全身各组织中的表达;将胶质瘤细胞株SHG-44(15μl,含1×106个细胞)注射于绿色荧光裸鼠的脑内制成原位模型.结果 每只种鼠平均产仔7～8只,其中纯合裸仔鼠有3～4只,比例接近1∶1;每代仔鼠通过小动物活体成像系统出生后2d就可鉴别其是否表达EGFP基因;器官及组织冰冻切片荧光显微镜下观察均见有绿色荧光;聚合酶链反应(PCR)结果表明脑组织、皮下肌肉、鼠尾和脚趾全部表达EGFP基因;原位模型的成瘤率达100％,瘤细胞依然具有人脑胶质瘤的基本特征.结论 表达EGFP基因的裸小鼠可用于肿瘤移植实验.     

塞来昔布对实验性结肠癌原位移植瘤生长及血管形成的影响

目的:探讨塞来昔布对实验性结肠癌原位移植瘤生长及血管形成的影响。方法:使用对数生长期的人结肠癌细胞(HT-29)于裸鼠皮下接种成瘤后原位种植。术后随机分为对照组(C组)及塞来昔布高、中、低剂量组(H、M、L组)共四组进行研究。结果:24只裸鼠实验期间无1只死亡,成瘤率为100%,比较各组原位移植瘤体积和瘤质量差异有统计学意义,P值均<0·05。L、M和H组的抑瘤率分别为25·30%、38·80%和76·92%,与对照组比较差异有统计学意义,P=0·000,且存在明显的剂量依赖。干预组瘤组织中MVD、VEGFmRNA、MMP-2mRNA和匀浆上清中PGE2含量与对照组相比差异有统计学意义,P值分别为0·050、0·050、0·050和0·010,随着剂量增加,MVD、VEGFmRNA、MMP-2mRNA和匀浆上清中PGE2含量逐渐降低。瘤组织中PGE2含量与瘤质量,以及MVD与VEGFmRNA、MMP-2mRNA均存在显著的正相关性,r=0·8814,P=0·000;r=0·8573,P=0·000;r=0·6427,P=0·001。结论:塞来昔布通过抑制人结肠癌裸鼠原位移植瘤环氧化酶-2活性,抑制PGE2合成、VEGFmRNA和MMP-2mRNA表达,抑制肿瘤的血管形成,从而对结肠癌的生长有抑制作用。     

转染GKLF基因对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:研究转染GKLF基因对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠皮下移植瘤的作用,探讨GKLF在胃癌中可能的作用机制.方法:将外源性重组真核质粒pcDNA3.1-GKLF转染到人胃癌细胞株SGC-7901内,经G418筛选并建立高表达GKLF的稳定转染细胞株.稳定表达该基因的细胞为SGC7901-peDNA3.1-GKLF组...     

塞来昔布联合5-Fu对人结肠癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响

 目的 探讨选择性环氧化酶 2（Cyclooxygenase 2，Cox 2）抑制剂 塞来昔布（celecoxib）联合5 氟尿嘧啶（5 fluorouracil ，5 Fu）对实验性人结肠癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响及作用机制。方法 建立人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型，模型建立后32只实验裸鼠随机分为四组，分别给予塞来昔布及5 Fu药物干预后观察各组皮下移植瘤体积、瘤重和裸鼠实验前后的体重变化，计算抑瘤率。电镜观察细胞凋亡形态,原位凋亡染色检测凋亡指数（AI），免疫组化及Western blot印迹法检测细胞色素C、caspase 3及caspase 9表达。结果 塞来昔布干预组、5 Fu干预组和联合干预组肿瘤生长明显抑制，塞来昔布干预组、5 Fu干预组抑瘤率分别为27.81%和53.02%，联合干预组抑瘤率为78.37%（P<0.01）。干预组较对照组肿瘤细胞凋亡明显增加，干预组各组之间凋亡指数比较差异有统计学意义（P<0.01）。透射电镜下见干预组瘤细胞呈现明显凋亡形态改变，联合干预组凋亡表现尤为典型，对照组无明显凋亡形态改变。免疫组化及Western blot印迹法显示干预组其细胞色素C、caspase 3及caspase 9的表达明显高于对照组，且干预组各组之间比较其表达差异也有统计学意义（P<0.05）。结论 塞来昔布及5 Fu均具有明显的抗肿瘤作用，联合应用时具有协同作用，可显著抑制人结肠癌裸鼠皮下移植瘤的生长，其作用机制可能与上调细胞色素C、caspase 3及caspase 9蛋白表达、激活细胞色素C依赖性凋亡信号通路有关。     

E-选择素对脑缺血再灌注损伤的作用研究

目的探讨有效治疗急性期脑缺血再灌注损伤的新药物.方法采用线栓法制备大鼠大脑中动脉再灌注模型,将E-选择素溶于生理盐水后注入大鼠股静脉中,建立模型后1h、4h和1周断头取脑组织做病理切片及计算梗死体积.结果 E-选择素治疗组比对照组坏死体积明显减少.结论 E-选择素抗体对脑缺血再灌注损伤组织有明显保护作用.     

可溶型尿激酶受体基因的表达及其对肿瘤生长的影响

目的建立逆病毒介导的可溶型尿激酶受体基因转移系统,并分析可溶型尿激酶受体(suPAR)基因转移对乳腺癌细胞生长的影响。方法应用PCR技术从人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中克隆suPAR基因,并建立逆病毒介导的suPAR基因转移系统;用获得的病毒感染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,PCR检测靶细胞中suPAR基因的整合与表达;在裸鼠体内观察基因表达的乳腺癌细胞的生长情况。结果从内皮细胞中克隆的suPAR基因可编码301个氨基酸,其GenBank注册号为AY029180;通过脂质体转染与交互感染策略获得病毒生产细胞PT67/suPAR,其病毒滴度约为3.5×105CFU/ml;PCR分析显示靶细胞中有suPAR基因的整合和表达;转染该基因的MDA-MB-231在裸鼠体内的生长受到抑制(P<0.05)。结论成功地构建了逆病毒介导的可溶型尿激酶受体基因转移系统;可溶型尿激酶受体基因表达具有抗乳腺癌细胞生长的作用。     

人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型的建立

目的　建立人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型。方法　使用对数生长期的人结肠癌细胞(HT- 2 9)在裸鼠皮下接种4周形成稳定的皮下移植瘤,再将皮下移植瘤组织块原位接种于2 4只裸鼠盲肠浆膜下,以完成原位移植瘤模型的制备。术后随机分四组,对照组(C组)、塞来昔布(celecoxib)高、中、低剂量组(H、M、L组) ,分别给予纯水及含有不同浓度(15 0 0 ppm、10 0 0ppm和5 0 0 ppm)的塞来昔布的饮水,饲养4 2d后处死裸鼠,观察各组原位移植瘤的成瘤率、瘤体积、重量以及裸鼠实验前后的体重变化,计算抑瘤率。结果　2 4只裸鼠实验期间无一只死亡,成瘤率为10 0 % ,荷瘤鼠实验前后体重变化比较在统计学上无显著差异(P >0 .0 5 ) ,各组原位移植瘤体积P <0 .0 5和瘤重P <0 .0 1比较差异有显著性,L组、M组和H组的抑瘤率分别为2 5 .30 %、38.80 %、76 .92 % ,与对照组比较差异有显著性(P <0 .0 5 )。结论　本实验成功建立了人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型,为研究人结肠癌发病机制和干预策略提供了较为理想的动物模型,塞来昔布对人结肠癌原位移植瘤生长具有明显的抑制作用,且有一定的量效关系。