健脾清肠散结方及其拆方对肠癌HT-29细胞株增殖作用的影响

目的:观察健脾清肠散结方及其拆方对肠癌HT-29细胞株增殖作用的影响,并探讨其关键成分及可能的作用机制。方法:将培养的HT-29细胞随机分为:空白对照组,健脾清肠散结方及其拆方健脾益气方、清肠散结方高、低剂量组,共7组。24 h后换无血清培养液,分别加入不同浓度药物(0、2、20、200μg/ml),用噻唑盐比色法(MTT)分析测定各组在不同浓度及不同作用时间点对HT-29细胞生长抑制率。结果:在浓度为2～200μg/ml时,健脾清肠散结方及其拆方对肠癌HT-29的增殖均有一定的抑制作用,呈现浓度依赖和时间依赖性;其中拆方健脾益气方对肠癌HT-29抑制增殖效果与全方一致。结论:健脾清肠散结方对人大肠癌细胞株HT-29细胞增殖有一定的抑制作用,其关键成分可能是健脾益气药。     

SHR高血压进程中不同类型血管内皮功能损伤及药物修复研究

目的探讨SHR大鼠在高血压发展进程中,不同血管内皮功能损伤程度及抗高血压药物对其的修复。方法以SHR为模型,7～24wk(wk:周龄)给予卡托普利(3.375g.kg-1.d-1),停药观察至32wk。6、18、24和32wk时分别进行病理学切片检查胸主动脉、肠系膜上动脉和心尖小动脉形态结构,及胸主动脉和肠系膜上动脉乙酰胆碱(ACh)浓度依赖性血管舒张功能检测(n=6)。结果SHR在18wk时胸主动脉、肠系膜上动脉和小动脉均出现结构病变,并随时间逐渐加重,三级动脉中胸主动脉病变较之严重,表现为内皮细胞脱落和中膜增厚;随年龄增大SHR胸主动脉和肠系膜上动脉ACh依赖性舒张度均下降,但胸主动脉舒张度降低幅度大于肠系膜上动脉(P=0.10,18wk;P<0.01,24、32wk);卡托普利能抑制18wkSHR胸主动脉舒张度的降低(P<0.05vsSHR),但对肠系膜上动脉没有该作用。结论伴随SHR高血压的发病进程,体内各级动脉内皮细胞均发生损伤,内皮依赖性舒张功能降低,大动脉内皮功能损伤出现早,程度也往往高于中、小动脉,抗高血压药物可抑制大动脉内皮功能障碍,但对中、小动脉内皮功能损伤无作用。     

白及多糖对酪氨酸酶活性及黑色素生成的影响

目的:观察白及多糖对酪氨酸酶(TYR)活性及黑色素形成相关蛋白TYR、小眼畸形相关转录因子(MITF)表达的影响。方法:超声提取白及多糖粗品。用不同浓度的白及多糖(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 g/L)和曲酸(阳性对照,0.1、0.2、0.4 g/L)作用于小鼠B16黑色素瘤细胞,用于检测细胞活性、TYR活性;各组细胞分别加入α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)及不同浓度药物共培养后检测黑色素含量;将细胞分为空白组、模型组(α-MSH)、曲酸组及白及多糖低、中、高剂量组,予相应干预48 h后,应用Western blot检测B16细胞TYR和小眼畸形相关转录因子(MITF)的蛋白表达情况。结果:不同浓度曲酸组、白及多糖(0.05~0.8 g/L)组、空白组间的细胞活性差异无统计学意义(P0.05)。与空白组比较,白及多糖在浓度0.1~0.8 g/L对TYR的活性有显著抑制作用(P0.05,P0.01),其作用与阳性对照曲酸相当;白及多糖在浓度0.1~0.8 g/L有较高的抑制黑色素生成作用(P0.05,P0.01);白及多糖浓度0.2~0.4 g/L对TYR、MITF蛋白表达水平有明显抑制作用(P0.05)。结论:白及多糖可能通过抑制TYR的活性和蛋白表达及MITF的蛋白表达,起到抑制黑色素生成的作用。     

酶解法提取天麻多糖的研究

目的:研究复合酶提取天麻多糖的最佳工艺。方法:采用单因素试验和正交试验设计进行优选,考察酶用量、pH值、反应时间和反应温度对天麻多糖的影响。结果:提取天麻多糖的最佳工艺为温度50℃,加热时间60min,酶用量20 mg,pH值为4,天麻多糖得率为2.48%。结论:酶解法提取天麻多糖提取工艺简便,经济环保,含量明显优于传统工艺。     

三七花总皂苷抑制人乳腺癌细胞侵袭的体外研究

目的:研究三七花总皂苷对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭能力的影响并探讨其相关机制。方法:MTT实验检测三七花总皂苷对肿瘤细胞增殖的抑制作用;Transwell小室法进行肿瘤细胞侵袭实验;RT-PCR检测β1-integrin、MMP-2、EGFR mRNA表达的变化;Western blotting检测β1-integrin、EGFR蛋白表达的变化。结果:在浓度为50～200μg/ml时,三七花总皂苷对人乳腺癌细胞的增殖具一定的抑制作用。Transwell小室实验显示,三七花总皂苷在浓度为10、50、100μg/ml均表现出侵袭抑制作用,浓度为50μg/ml侵袭抑制效果最佳,达到32.0%。三七花总皂苷对各浓度组对MDA-MB-231细胞β1-integrin、MMP-2和EGFR基因表达有下调作用(P0.01),一些浓度组对β1-integrin和EGFR蛋白的表达也具下调作用。结论:三七花总皂苷通过下调β1-integrin、EGFR mRNA和蛋白的表达,抑制肿瘤细胞与ECM粘附,降低肿瘤细胞运动能力,从而抑制人乳腺癌细胞的侵袭转移。     

鸟苷对大鼠胸主动脉血管环的舒张作用及机制

目的研究鸟苷对大鼠离体血管环的影响,并探讨其可能的作用机制。方法分离SD大鼠胸主血管环,分成去内皮组和内皮完整组,采用离体血管环实验方法,经生物信号采集与分析系统测定血管环张力的变化,观察鸟苷的舒血管作用并探讨不同抑制剂对鸟苷舒张大鼠离体血管环作用的影响。结果鸟苷(10-9～10-5 mol.L-1)对基础状态下或KCl预收缩血管环的张力无影响;对PE预收缩的血管环有内皮依赖性舒张作用;环氧合酶抑制剂吲哚美辛孵育对鸟苷的舒张作用无明显影响;一氧化氮合酶抑制剂L-NAME或鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝可阻断鸟苷的血管舒张作用。结论鸟苷对大鼠离体胸主动脉有浓度依赖性舒张作用,其舒张作用可能与NO-GC-cGMP途径相关。     

金雀异黄素对D-半乳糖损伤的乳鼠皮肤成纤维细胞的作用

目的 观察金雀异黄素(Gen)对D-半乳糖(D-gal)损伤的小鼠皮肤成纤维细胞(MSFs)模型的作用,并探索其机制.方法 体外培养MSFs,D-gal制作细胞损伤模型,并用Gen进行干预.显微镜下观察各组MSFs生长形态变化;试剂盒法检测MSFs上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性;RT-PCR法检测MSFs的雌激素受体雌激素受体(ER)α和ERβ mRNA的表达.结果 与模型组相比,浓度为0.5 mg/L Gen能显著提高SOD活性,同时亦提高MDA含量和LDH活性(P＜0.01);明显下调ERα mRNA表达(P＜0.05),上调ERβmRNA表达(P＜0.05).结论 浓度为0.5 mg/L Gen可以通过改善模型细胞ER mRNA的表达,提高SOD活性和抗氧化作用;同时升高MDA含量和LDH活性,改变MSFs的生物学特性,抑制其过度增殖.     

医学生生命观教育探索——从实验动物伦理教育入手

在提高医学生知识水平的同时,使其树立正确的生命价值观,培养其敬畏生命的道德品质尤显重要。以实验动物伦理教育作为切入点,对医学生开展生命价值观教育是一条行之有效的途径。文章介绍了上海中医药大学教学实验中心所做的一些有益尝试。课题组以专业动物实验课程为载体,通过教学设计,将生命观和伦理教育植入其中,并配合伦理教育实践活动,对医学生开展生命价值观教育,让学生在实验和学习过程中受到生命伦理的启发,促使学生建立并形成生物平等的观念,达到提高医学生职业道德素质的目的。     

HPLC测定半夏白术天麻汤中天麻素和鸟苷的含量

目的:建立同时测定半夏白术天麻汤中天麻素和鸟苷含量测定的方法。方法:使用Platisil ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)柱;流动相A(水)-B(乙腈);梯度洗脱0～30 min(2%～5%B);流速0.65 mL·min-1;柱温25℃;检测波长260 nm。结果:天麻素和鸟苷分别在0.007～0.35 g·L-1(r=0.999 9)和0.000 32～0.016 g·L-1(r=0.999 9)内线性关系良好,平均回收率分别为99.7%和100.6%,RSD分别为1.9%和2.0%(n=9)。结论:所建立的方法准确快速,可用于半夏白术天麻汤复方的质量控制。     

SHR高血压进程中肾脏蛋白表达谱的变化

目的探讨SHR大鼠在高血压发展进程中,肾脏蛋白表达谱的变化。方法将SHR随机分为3组:18、24和32周龄,每组各6只,相同周龄的WKY作为对照,两周尾动脉测一次血压,肾脏组织蛋白提取、纯化后做双向电泳分析,图谱经PDQuest软件分析后得到的差异蛋白点用串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF/TOF MS)分析鉴定。Western blot测定肾脏铜锌超氧化物歧化酶、过氧化物酶2蛋白的表达。结果 SHR从6周开始血压持续上升,20周后血压值稳定。双向电泳显示,存在11个差异确定蛋白,其中5个变化蛋白涉及氧化应激方面,分别是NADH脱氢酶[辅酶]黄素蛋白2、过氧化物酶2、铜锌超氧化物歧化酶、谷胱甘肽硫转移酶ω-1、肝再生相关蛋白LRRG07。SHR随着周龄的增加,铜锌超氧化物歧化酶和肝再生相关蛋白LRRG07降低,谷胱甘肽硫转移酶ω-1在18周时就基本消失,而过氧化物酶2及NADH脱氢酶[辅酶]黄素蛋白先下降后上升。存在两个变化蛋白涉及细胞凋亡方面,分别是谷胱甘肽硫转移酶ω-1和α-B晶状体。SHR中α-B晶状体随着周龄的增加,先增加后保持一致。存在3个变化蛋白涉及能量代谢方面,分别是H+ATP运输合酶、V型质子ATP酶亚基E1和ATP合酶(α亚基)。SHR在3个不同周龄都是先升高后下降。二氢喋啶还原酶涉及生物蝶呤代谢,而3-羟基蒽醌3,4-双加氧酶参与喹啉酸自环化,随着周龄的增加,SHR中二氢喋啶还原酶下降。Western blot显示SHR肾脏中铜锌超氧化物歧化酶的含量均呈不断下降状态,而过氧化物酶2是先下降后上升。结论在高血压的进程,我们推测所引起的肾脏损伤与氧化应激、细胞凋亡、生物蝶呤代谢和能量代谢有关。体内调节其相关物质可使高血压恢复到一个动态平衡之中,为不同时期治疗高血压肾损伤提供了一个新的思路。