一种新型速效人胰岛素类似物的构建、制备及性质研究

目的：构建和制备出一种新型速效人胰岛素类似物（PIns）,进行其性质研究。方法：采用加端PCR的方法,扩增出在天然人胰岛素原N端添加精氨酸、脯氨酸、赖氨酸、脯氨酸4个氨基酸残基的重构胰岛素原基因片段,将其插入通用表达载体pET28 a后,再将经过改构后的硫氧还蛋白（1-20 aa）的基因片段与重构胰岛素原基因的5′端通过赖氨酸连接,成功构建了速效人胰岛素原类似物融合蛋白（FKPPIns）的表达载体（pET28 a-FKPPIns）。此融合蛋白在大肠杆菌BL-21（DE3）中以包涵体的形式表达,经包涵体洗涤和DEAE阴离子交换树脂纯化后进行复性、酶切。酶切产物经RP-HPLC纯化后,质谱法测定其分子量;等电聚焦法测定此蛋白的等电点;凝胶过滤法测定其自身的缔合性质。对新西兰大白兔肌肉注射纯化后PIns,进行初步的药效学评价。结果：获得了结构为R-P-K-P-Insu lin的PIns纯品,其等电点为7.3,自身缔合性较标准胰岛素显著下降。结论：PIns与标准人胰岛素相比,起效快、达峰时间及持续时间短。     

重组猪羧肽酶原B在大肠杆菌中的表达与复性研究

利用大肠杆菌表达系统,表达猪源羧肽酶原B蛋白包涵体,并对包涵体的体外复性条件进行优化。对猪源羧肽酶原B基因进行设计,优化稀有密码子,并将基因片段插入到pET28a载体中,构建表达质粒pET28a-proCPB,并转化入BL21(DE3)中。通过乳糖诱导表达得到包涵体。通过检测酶的比活力来考查复性液的pH、蛋白终浓度、氧化还原对比例、复性时间、复性温度对复性程度的影响。最终确定的体外稀释复性条件为:复性液成份为100mmol/L Gly-NaOH、pH=9.5、GSH与GSSG的比例为1∶0.8(GSH为1mmol/L)、蛋白终浓度为200μg/ml、复性温度为25℃、复性时间24h。通过检测,复性液中酶的比活力为11.7u/mg,经过DEAE纯化后酶的比活力可达到73u/mg。     

不同提示策略下帕金森病言语运动调控的机制

目的研究帕金森病患者在不同运动执行控制模式下的言语运动调控神经机制。方法利用基于听觉反馈扰动的心理声学和事件相关电位技术,17例帕金森病患者和17例正常受试者在内部提示策略和外部提示策略下进行主动发声,在此过程中言语基频反馈会被随机降低,记录和分析产生的声学补偿响应和皮层诱发电位。结果帕金森病组产生的声学补偿响应幅度大于正常对照组(F=5.415,P=0.027),但两种发声任务之间主效应不显著(F=0.039,P=0.840)。在皮层水平上,在帕金森病组中外部提示任务产生的N1成分幅度明显小于内部提示任务(F=8.634,P=0.006),在正常对照组实验任务主效应不显著(F=1.550,P=0.231)。在内部提示发声任务中,帕金森病组产生的N1幅度大于正常对照组(F=5.476,P=0.026),但在外部提示任务中组间效应不显著(F=0.249,P=0.621)。结论帕金森病的言语运动调控与运动执行控制的提示策略有关,外部提示策略能够显著提高言语反馈信息的神经编码效率,改善听觉信息与发声运动的整合能力。     

共管模式在老年髋部骨折患者围手术期静脉血栓栓塞症预防中的应用

目的探讨共管模式在老年髋部骨折患者围手术期静脉血栓栓塞症(VTE)预防中的应用效果。方法采用便利抽样法,选取2019年1—12月郑州大学第一附属医院收治的146例老年髋部骨折患者为研究对象,将2019年1—6月收治的73例患者设为对照组,接受常规静脉血栓风险评估、治疗、宣教等,将2019年7—12月收治的73例患者设为试验组,接受共管模式管理。比较两组患者的VTE发生率、首次下床活动时间、住院天数及费用、VTE相关知识知晓率、DVT健康信念水平。结果实施共管模式后,试验组患者的术后VTE发生率低于对照组(P<0.05);试验组的首次下床活动时间、住院天数短于对照组,住院费用少于对照组,DVT健康信念评分、VTE相关知识评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组DVT健康信念中疾病的易感性、疾病严重性、健康行为的益处、自我效能方面得分均高于对照组(P<0.05);两组健康行为的障碍维度得分、健康动力得分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论老年髋部骨折患者在围手术期实施共管模式可提高患者DVT健康信念及改善VTE知识掌握度,缩短患者住院时间,有效预防VTE的发生,促进患者快速康复。     

病理学大鼠创伤愈合实验模型的构建

目的:构建病理学教学创伤愈合实验模型。方法:清洁级SD大鼠28只,随机分为1、3、5、7、14、28d模型组及正常对照组。正常对照组进行正常解剖学和病理组织学观察。模型组臀背部脊柱两侧1cm处各作长约1.5cm切口,一侧缝合,另一侧自然愈合,对创口进行大体和组织学观察。结果:缝合伤口炎症反应较轻微,3d可见肉芽组织,7d肉芽组织填平创口,14d已进入组织改建期,28d组织结构基本恢复正常。自然愈合伤口表面哆开、炎性渗出明显,多量炎性细胞浸润,5～7d可见多量肉芽组织,14d开始形成瘢痕,28d形成大量瘢痕。结论:所建立的创伤愈合实验教学模型适用于本科教学。     

重组GFP-VEGF6a融合肽的构建表达及其抗肿瘤活性

为了探讨血管内皮生长因子6a(VEGF6a)的抗肿瘤及其抑制外周血管生成活性,采用两次加端PCR技术,将VEGF6a片段的基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因通过GGGS柔性片段融合,连接至pET28a载体,构建GFP-VEGF6a(GFP6a)融合肽E.coli表达菌。GFP6a融合肽通过乳糖诱导表达和肝素亲和树脂精制得到。建立皮内和皮下移植型肝癌ICR小鼠模型,验证了VEGF6a抑制肿瘤外周血管及抗肿瘤活性。结果表明,与阴性对照GFP比较,GFP6a 200 mg/kg组和20 mg/kg组均明显抑制肿瘤外周血管生成,抑制H22肝癌细胞体内生长,瘤重抑制率分别为70.9%和56.1%(P<0.01)。本研究显示,VEGF6a具有潜在的抗肿瘤活性。     

励-协夫曼言语治疗对中国帕金森病患者言语功能的影响

目的 探讨标准化的励-协夫曼言语治疗（LSVT）训练改善中国帕金森病（PD）患者言语障碍和生活质量的有效性。 方法 本研究纳入16例中国PD患者,采用标准化的LSVT对其进行为期4周的训练。训练前、后,采用PRAAT软件分析PD患者的声学数据,采用日本GRBAS嗓音量表评定患者的嗓音质量,采用嗓音障碍指数（VHI）量表对患者言语障碍对生活质量的影响进行评估。 结果 经过4周LSVT训练,PD患者的发声、嗓音及生活质量均明显改善。声学分析显示,训练后元音最长发音时间由（11.93±6.81）s增加到（17.50±6.25）s;元音发声音量从（69.91±7.61）dB增加到（76.12±6.07）dB,阅读音量从（64.82±3.77）dB增加到（70.40±5.41）dB,独白音量从（61.44±4.58）dB增加到（64.29±4.70）dB。GRBAS评定显示,总嘶哑度评分从（1.93±0.77）分减少到（1.25±0.93）分。VHI量表评分显示,总嗓音障碍指数由（66.87±18.61）分降低到（49.87±21.21）分,患者生活质量显著提高。 结论 LSVT训练能够显著增加PD患者最长发音时间、提高音量、改善嗓音质量、降低嗓音障碍指数、提高患者生活质量,适宜在临床应用并推广。     

足底压力分析在帕金森病患者运动训练中的应用

目的:通过研究帕金森病患者的静态和动态足底压力,客观分析帕金森病患者的足底压力分布特点和步态特点,进而针对性地提出康复治疗建议。方法:收集帕金森病患者30例,正常对照30例。每位受试者测定静态和动态足底压力,考量站立和行走过程中足底8区的压力分配和动态变化。结果:静态足底压力测定中,帕金森病组双足较正常对照组5区(第5跖骨部)压力明显增高(帕金森病患者足底5区压力分别为左侧(40.39±22.44)k Pa,右侧(30.40±13.12)k Pa;正常对照组分别为左侧(21.58±10.37)k Pa,右侧(20.77±9.08)k Pa,P0.05),各区压力排位中帕金森病患者相比于正常对照组,第5跖骨(5区)、足掌中部(6区,即中足部)压力较第1跖骨(3区)靠前,表明患者重心更向两侧分散。步行过程中,帕金森病患者左足5区较3区排位靠前;脚跟着地时间明显缩短或缺乏足跟落地过程[帕金森病组脚跟着地时间占整个同侧足着地时间百分比左侧(0.82±2.03)%,右侧(1.62±3.15)%;正常对照组分别为左侧(4.80±2.94)%,右侧(6.31±6.25)%。P左侧=0.008,P右侧=0.02]。结论:帕金森病患者站立时重心不稳,向两侧漂移增大;行走时重心前倾缺乏足跟着地动作,促进了"慌张步态";步态训练中需要强调后跟先落地,克服重心前倾,进而从根本上改善"慌张步态"。足底压力测定有利于患者更直观理解自己的问题所在,便于医生定量分析患者步态障碍的特点和程度,进而针对性地制定康复训练计划并定量评定治疗效果,具有良好的临床应用价值。     

重组蛋白A在大肠杆菌中的分泌表达及活性测定

利用大肠杆菌表达系统表达金黄色葡萄球菌蛋白A,根据大肠杆菌密码子偏好性对金黄色葡萄球菌蛋白A的基因序列进行密码子优化,在N端加入L-门冬酰胺酶(L-AsPsII)信号肽简并基因序列使其分泌表达,将全合成的蛋白A基因片段插入到pET-28a载体中,转化入BL21(DE3)。乳糖诱导使其表达,其中80%以上目的蛋白位于胞外,表达量达到375 mg/L,剩余目的蛋白位于周质。将胞外目的蛋白超滤浓缩,通过DEAE阴离子交换剂,一步纯化后得到的蛋白,在SDS-PAGE上显示为约32 k的单一条带,纯度达95%以上。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测重组蛋白A活性较高,能与小鼠、兔及羊IgG抗体高效结合,且沸水煮10 min后仍能保持同IgG结合的活性。