RAPD在绞股蓝种类鉴别应用上的条件摸索

目的 为采用随机扩增多态性技术鉴别绞股蓝及其易混品乌蔹莓,进行RAPD条件摸索.方法 运用改进CTAB法提取七叶绞股蓝、五叶绞股蓝、乌蔹莓以及烟草基因组DNA,摸索影响RAPD的条件.结果 用改进CTAB法提取所得的DNA质量较好,均能用于RAPD扩增,并摸索出了最优RAPD扩增条件.结论 改进的CTAB法适合于这4种植物的DNA提取,摸索得到的RAPD扩增条件可用于绞股蓝种类鉴别及与其易混品乌蔹莓的区别.     

绞股蓝RAPD标记及序列分析

目的 利用绞股蓝RAPD标记有效鉴别绞股蓝及其伪品。方法 用19条引物对17个绞股蓝样品和一个乌蔹莓样品进行RAPD-PCR扩增,并对绞股蓝DNA特异条带克隆测序及序列分析。结果 获得一个绞股蓝RAPD标记。经克隆测序,8个序列高度保守,片段长度在766～770 bp,相似性均在97%以上。结论 获得的RAPD标记可以作为合成探针的基础,用于鉴别绞股蓝及其伪品。     

广西扶绥县壮族人群ITGβ1基因多态性与肝癌家系遗传易感性的关系

目的 探讨广西扶绥县壮族人群中肝癌高发家系ITGβ1基因rs2298141位点多态性与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)遗传易感性的关系.方法 采用病例-对照研究方法,选取广西扶绥县壮族人群正常对照家系组40名;肝癌高发家系组79例,其中肝癌患者20例,直系亲属59例.采用质谱方法检测ITGβ1基因rs2298141位点基因型分布频率,非条件logistic回归分析不同基因型与HCC发病风险的关系.结果 ITGβ1基因rs2298141位点存在AA、AG、GG 3种基因型.ITGβ1基因rs2298141位点基因型分布遵循Hardy-Weinberg遗传平衡定律.ITGβ1基因rs2298141位点A等位基因在正常对照组、肝癌高发家系直系亲属组、肝癌高发家系肝癌患者组中的分布频率分别为63.75％、61.02％、70％,G等位基因分布频率分别36.25％、38.98％和30％,与A等位基因型个体比较,正常对照家系人群中携带G等位基因型的个体发生HCC的风险增加0.75倍(95％ CI:0.33～1.7,P=0.50),肝癌高发家系直系亲属组人群发生HCC的风险增加0.67倍(95％CI:0.31～1.45,P=0.31).正常对照家系组、肝癌高发家系直系亲属组和肝癌高发家系肝癌患者组人群AA基因型分布频率分别为40％、42.73％和50％,AG基因型分别为47.5％、37.29％和40％,GG基因型分别为12.5％、20.34％和10％.与AA基因型个体相比,正常家系组和肝癌高发家系直系亲属组中AG基因型个体发生HCC的风险分别增加0.67倍(95％ CI:0.22～2.1,P=0.50)和0.9倍(95％ CI:0.31～2.71,P=0.86);GG基因型个体发生HCC的风险分别增加1.05倍(95％ CI:0.17～6.6,P=0.96)和2.2倍(95％ CI:0.40～11.96,P=0.37),差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 未发现ITGβ1基因rs2298141位点多态性与广西扶绥县肝癌家族聚集的遗传易感性存在显著相关.     

绞股蓝叶片分化与植株再生

目的 建立高效稳定的绞股蓝受体系统,为绞股蓝基因转化研究奠定基础.方法 以五叶绞股蓝Gynostemma pentaphyllum叶片作为外植体,采用不同配比激素的MS培养基进行诱导培养获得丛生芽,进而生根获得再生植株.结果 采用MS 6-BA 1.0 mg/L培养基时,绞股蓝叶片分化频率最高(40%),MS 6-BA1.0 mg/L适合绞股蓝丛生芽继代增殖,1/2 MS适宜诱导生根获得健全再生植株.结论 为利用根癌农杆菌介导法进行绞股蓝基因转化建立了稳定的直接分化再生系统.     

广西扶绥县人群DDX39基因单核苷酸多态性与肝癌家系遗传易感性的关系

目的 探讨广西扶绥县原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC,以下简称“肝癌”)高发家系人群DDX39基因rs12461754位点单核苷酸多态性与肝癌遗传易感性的相关性。方法 选取广西扶绥县20个肝癌高发家系共77例和10个正常对照家系共35名为研究对象,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(matrix assisted laser desorption ionization-time of fight-mass, MALDI-TOF-MS)检测DDX39基因rs12461754位点在两组中的基因型和等位基因频率。结果 正常对照家系组人群DDX39 基因rs12461754 位点携带A等位基因型的个体发生肝癌的风险是G等位基因型个体的0.407倍(95%CI:0.125~1.326,P=0.136);在肝癌高发家系非肝癌组人群中,携带A等位基因型的个体发生肝癌的风险是G等位基因型个体的0.981倍(95%CI:0.298~3.326,P=0.976); DDX39基因rs12461754位点GG、AG、AA基因型在肝癌高发家系肝癌组、肝癌高发家系非肝癌组及正常对照家系组三组间相互比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 DDX39基因rs12461754位点单核苷酸多态性与广西扶绥县肝癌家系遗传易感性无明显相关性。     

壮族家系Krüppel样因子6基因多态性与肝癌易感性的关系

目的 探讨Krüppel样因子6(KLF6)基因rs7634位点多态性与壮族人群肝细胞癌(HCC)易感性的关系.方法 选取广西扶绥县壮族人群10个正常对照家系(40例)及20个肝癌家系(79例),后者包括HCC患者20例及其未患HCC的直系亲属59例.运用质谱方法检测KLF6基因rs7634位点基因型及等位基因的分布频率;应用非条件logistic回归分析不同基因型及等位基因与HCC发病的关系.结果 在肝癌患者、肝癌家系亲属和正常家系人群中,KLF6基因rs7634位点TT基因型的分布频率分别为40.00％、54.24％和87.50％,TA基因型的分布频率分别为60.00％、42.37％和12.50％,AA基因型的分布频率分别为0、3.39％和0,T等位基因的分布频率分别为70.00％、75.42％和93.75％,A等位基因的分布频率分别为30.00％、24.58％和6.25％.在肝癌患者及正常家系人群中,携带TA基因型个体发生肝癌的风险是TT基因型个体的10.5倍(P＜0.05),携带A等位基因个体发生肝癌的风险是T基因型个体的6.429倍(P＜0.05);在肝癌患者及肝癌家系直系亲属中,携带TA基因型个体发生HCC的风险是TT基因型个体的1.667倍,携带A基因型个体发生肝癌的风险是T基因型个体的1.257倍,但差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 KLF6基因rs7634多态性与壮族家系肝癌易感性关系密切,携带TA基因型或A等位基因可能是HCC发生的危险因素.     

绞股蓝的RAPD指纹图谱鉴定及其特异DNA片段克隆、序列分析

目的:在DNA分子水平上鉴定绞股蓝及其伪品乌蔹莓.方法:用筛选出的两条随机引物(WGS001,WGS004)对不同采集地绞股蓝及乌蔹莓基因组DNA进行PCR扩增,将引物WGS004扩增7份绞股蓝样品中的具有相同迁移率的1条500 bp左右的DNA片段进行克隆、测序、一致性分析,并在NCBI上作Blastn比对检索.结果:以上两条引物能分别扩增得到绞股蓝与乌蔹莓样品基因组的差异性DNA片段,这些片段可以明确区别绞股蓝与乌蔹莓.经克隆获得的7条绞股蓝DNA序列间的一致性在45.7%～94.5%之间,在NCBI上检索后未见相似序列的报道,为新序列.结论:RAPD技术可有效地鉴别绞股蓝和乌蔹莓,本研究克隆得到一段绞股蓝DNA序列,为绞股蓝的品种鉴定、辅助选择育种等研究奠定了基础.     

广西扶绥县壮族人群 XRCC1 Arg399Gln（rs25487）和Arg280His（rs25489）多态性与肝癌家系遗传易感性的关系

目的:研究广西壮族自治区扶绥县壮族人群肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)家系DNA修复基因XRCC1Arg399Gln(rs25487)和Arg280His(rs25489)多态性与HCC家系遗传易感性的相关性。方法:采用病例-对照研究和质谱检测方法,对广西扶绥县壮族人群20个HCC家系组79例和10个正常对照家系组40例进行XRCC1基因Arg399Gln(rs25487)和Arg280His(rs25489)基因型分布频率检测,应用非条件Logistic回归分析基因多态性与HCC发生危险性的关系,并将实验结果结合临床资料进行统计学分析。结果:正常对照家系组人群XRCC1 Arg399Gln(rs25487)中AG、AA基因型个体发生HCC的风险分别是GG基因型个体的9倍(95%CI=0.828~97.780,P=0.071)和5.14倍(95%CI=0.445~59.450,P=0.190);HCC家系组人群中非HCC患者AG、AA基因型的个体发生HCC的风险分别是GG基因型个体的4倍(95%CI=0.689~23.230,P=0.122)和2.85倍(95%CI=0.464~17.583,P=0.257),差异均无统计学意义。Arg280His(rs25489)正常家系组人群中GA基因型个体发生HCC的风险分别是GG基因型个体的2.4倍(95%CI=0.530~10.877,P=0.256);HCC家系组人群中非HCC患者GA基因型的个体发生HCC的风险分别是GG基因型个体的1.02倍(95%CI=0.286~3.650,P=0.973),差异均无统计学意义。结论:广西扶绥壮族人群中XRCC1 Arg399Gln(rs25487)和Arg280His(rs25489)多态性与患HCC的风险无显著相关性。     

不同孔径的羟基磷灰石对组织工程骨血管化促进效果的研究

目的：探讨不同孔径的羟基磷灰石材料对组织工程骨血管化效果的影响。方法采用 Wistar雄性大鼠,随机分为A、B、C 3组,分别在其背部皮下植入孔径为200~300、350~450、500~600μm 的羟基磷灰石生物陶瓷(复合4μg 骨形态发生蛋白),大小约5 mm×5 mm×1 mm,重约40 mg。分别于植入后第1、2、3、4周后处死动物,取出植入物及周围组织,采用苏木素-伊红染色组织学观察,分析局部新生血管化情况。结果3组不同时间点的血管化面积,组内比较：A 组第2、3周差异有统计学意义、B、C 组不同时间点差异有统计学意义(P <0.05);组间比较：术后1周,仅 C 组有血管化面积;术后2~4周,B、C 组增加的面积高于 A 组(P <0.05),C 组可见大量新生血管并形成清晰可见的骨小梁。结论孔径为500~600μm 的羟基磷灰石生物陶瓷能够更好地促进组织工程骨的血管化。