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目的 观察以腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)和慢病毒(Lenti virus)为载体、含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)-1、具有较强抑制作用的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)感染大鼠肝星状细胞系(hepatic stellate cell,HSC)-T6的感染效率和其对TIMP-1的表达抑制作用.方法 挑选针对大鼠TIMP-1基因具有较强抑制作用的siRNA序列,在体外构建为短发夹表达载体后,将其包装为重组AAV/siRNA-TIMP-1/GFP和Lenti/siRNA-TIMP-1/GFP,同时包装阴性对照AAV/GFP和Lenti/GFP,并以MOI=10感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6,感染后72 h,通过流式细胞仪及荧光显微镜观察病毒的感染效率.在感染后7 d,应用Western bloting方法检测TIMP-1蛋白表达情况.结果 感染HSC-T6后细胞形态、增生速度未发生明显变化.通过流式细胞仪及荧光显微镜证实感染效率分别为:空载体AAV/GFP和Lenti/GFP组分别为72.7%和70.0%,AAV/siRNA.TIMP-1/GFP和Lenti/siRNA-TIMP-1/GFP感染组分别为64.58%和61.86%.与正常细胞相比,感染后7 d,siRNA感染组TIMP-1蛋白表达均下降约40.0%,但两组siRNA感染组下降幅度无统计学意义.结论 构建的重组AAV/siRNA-TIMP-1/GFP和Lenti/siRNA.TIMP-1/GFP均可有效感染大鼠HSC-T6,感染效率相近,且均可在短期内有效抑制大鼠肝星状细胞系HSC-T6 TIMP-1蛋白的表达. 相似文献
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肝细胞再生是肝纤维化逆转的重要因素,而近年来多项研究表明骨髓干细胞可以向肝细胞转化,促进肝组织再生,同时可以表达基质金属蛋白酶,促进细胞外基质的降解,逆转肝纤维化。本文就骨髓干细胞在肝纤维化治疗中的研究作一综述。 相似文献
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目的观察结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)对大鼠肝脏前体细胞(WB—F344)分化的影响,进一步观察细胞外基质的变化。方法采用MTF法检测CTGF对WB—F344细胞活性的影响。采用Wester Rblotting方法分别检测CTGF诱导WB—F344细胞后胆管细胞标志物CK-19及肝细胞标记物AFP、ALB的变化。采用Western blotting和实时荧光定量PCR检测细胞外基质相关指标金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase.TIMP)-1在mRNA水平和蛋白水平的变化。结果作用于WB—F344细胞24h后,CTGF组的细胞活性大于转化生长因子-β组(P〈0.05)。5ng/ml CTGF作用于WB—F344细胞24h后,可以明显改变WB—F344细胞表面标记物在蛋白水平的表达。幼稚肝细胞标记物AFP的表达是对照组的0.38倍(P=10.002),成熟肝细胞标记物ALB和胆管细胞标记物CK-19的表达均增加,分别为对照组的3.5倍和1.58倍(P分别为0.000、0.002)。同时,5ng/ml CTGF可以上调WB—F344细胞TIMP-1在mRNA水平和蛋白水平的表达,分别为对照组的2.47倍和3.36倍(P=0.000、0.002)。结论5ng/ml CTGF有诱导肝脏前体细胞向肝脏实质细胞分化的趋势,并伴有WB—F344细胞外基质相关指标TIMP-1表达的上调。 相似文献
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目的观察以慢病毒为载体,用含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、具有较强抑制作用的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6后对TIMP-1表达的抑制作用。方法针对大鼠TIMP-1 mRNA基因序列挑选2个不同短片段(nt161~181和nt445~463),在体外构建为短发夹siRNA1、siRNA2表达载体后,将其包装为重组Lenti/siRNA1-TIMP-1/GFP和Lenti/siRNA2-TIMP-1/GFP,同时包装阴性对照Lenti/GFP(空载体组),并以滴度MOI=10感染大鼠肝星状细胞系HSC-T6,感染后3d,用流式细胞仪及荧光显微镜检测病毒的感染效率。分别在感染后7、9d用Western blotting方法检测TIMP-1蛋白表达情况。结果感染HSC-T6后细胞形态和增生速度未发生明显变化。流式细胞仪及荧光显微镜检查证实感染效率分别为:空载体组68.23%,siRNA1感染组57.93%,siRNA2感染组51.2%,与正常细胞相比,感染后7d和9d,siRNA1、siRNA2感染组TIMP-1蛋白表达均有所下降,但只有siRNA1感染组在感染后9d能显著抑制TIMP-1表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建的重组Lenti/siRNA-TIMP-1/GFP可短期有效抑制大鼠肝星状细胞系HSC-T6TIMP-1蛋白表达。 相似文献
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目的探讨还原型谷胱甘肽对乙型肝炎肝硬化患者肝纤维化及肝功能的影响。方法收集2015年5月—2018年1月我院收治的乙型肝炎肝硬化患者100例作为研究对象,将其随机分为研究组与对照组。两组患者基础治疗均相同,研究组加用还原型谷胱甘肽治疗。对比两组患者治疗前后肝纤维化指标(TGF-β1、TNF-α、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原N端肽)及肝功能(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、γ-谷氨酰转肽酶)变化。结果治疗前,两组患者的肝纤维化指标比较,差异无统计学意义(P 0.05);治疗后,研究组患者的肝纤维化指标低于对照组,差异有统计学意义(P 0.05);两组治疗前肝功能指标比较,差异无统计学意义(P 0.05);研究组患者治疗后肝功能指标低于对照组,差异具有统计学意义(P 0.05)。结论给予乙型肝炎肝硬化患者还原型谷胱甘肽治疗,可以改善患者肝纤维化程度,促进肝脏细胞的修复。 相似文献
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目的肝脏前体细胞(WB-F344)在不同的刺激下可以分化成肝细胞或胆管细胞。本研究旨在比较外源性和内源性结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)对WB-F344细胞分化的影响。方法重组人CTGF直接刺激WB-F344细胞,MTT法观察CTGF对WB-F344细胞活性的影响;用Western blotting方法检测CTGF对WB-F344细胞分化的影响:包括肝系标志物甲胎蛋白(α-feto protein,AFP)、白蛋白和胆系标志物细胞角蛋白-19(CK-19)蛋白水平的变化。构建含CTGF全长编码基因的质粒(dl6-96-CTGF)转染WB-F344细胞,用G418筛选稳定表达CTGF的WB-F344细胞株,Western blotting方法同样检测上述标志物蛋白水平的变化。结果重组人CTGF作用于WB-F344细胞24h后,可以轻度抑制细胞活性,但剂量关系不明显。高剂量CTGF作用于WB-F344细胞24h后,可以明显改变WB-F344细胞表面标志物的表达:幼稚肝细胞标志物AFP的表达减少,而成熟肝细胞标志物白蛋白和胆管细胞标志物CK-19的表达均增加。成功构建CTGF全长编码基因的质粒,并用G418获得稳定转染CTGF全长质粒的WB-F344细胞株。稳定转染dl6-95-CTGF的WB-F344细胞,与转染dl6-95相比,AFP和CK-19表达均减少,白蛋白表达增加,但诱导程度没有外源性明显。结论与内源性结缔组织生长因子相比,外源性结缔组织生长因子可以明显改变肝脏前体细胞表面标志物的表达,具有诱导肝脏前体细胞向成熟肝脏细胞分化的潜能。 相似文献
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目前已阐明细胞外基质(ECM)合成与降解失衡,特别是后期降解减少是肝纤维化发生的主要机制。肝脏ECM的代谢主要由基质金属蛋白酶(MMP)及其抑制因子(TIMP)共同调节。MMPs促进ECM降解,而TIMPs通过抑制MMPs阻止ECM降解,从而形成或促进肝纤维化。此外,TIMPs还通过抑制肝纤维化发生、发展过程中具核心作用的肝星状细胞(HSC)凋亡而促进肝纤维化的持续发展。 相似文献
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