外源性一氧化氮对新生大鼠神经干细胞/前体细胞分化的影响

目的探讨外源性一氧化氮（NO）对培养状态下的新生大鼠神经干细胞／前体细胞（NSCs／NPs）分化的影响。方法采用常规方法分离新生大鼠脑室下带（SVZ）组织，进行NSCs／NPs体外培养。用二乙烯三胺／一氧化氮聚合物（DETA／NO）作为外源性NO供体培养NSCs／NPs。用免疫细胞化学方法检测NSCs／NPs标记巢蛋白（nestin）、神经元标记神经元特异性微管相关蛋13（Tuj-1）和星型胶质细胞标记胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）。同时用Greiss还原法检测培养液中总NO的浓度。结果原代或次代培养的神经球均为nestin阳性；DETA/NO对体外培养的NSCs／NPs作用5d后，40μmol／L、50μmol/L、60μmol／L DETA／NO实验组分别释放出（62．0±6．4）μmol／L、（64．8±15．7）μmol／L、（68．5±11．6）μmol／L的NO，相应实验组分化的神经元数分别为（53．1±4．7）％、（54．1±6．9）％、（63．8±9．5）％，较对照组[（38．8±7．2）％]，显著增加，差异有高度统计学意义（P〈0．01）；50μmol／L、60μmol／L DETA/NO实验组分化的星型胶质细胞数分别为（38．2±6．7）％、（41±10．5）％，较对照组[（32．8±5．5）％]，有所增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论外源性NO主要促进体外培养的NSCs／NPs向神经元方向分化。     

乙肝病毒X蛋白对肝前体细胞分化的影响

目的：检测乙肝病毒X（Hepatitis B virus X,HBx）蛋白对肝前体细胞分化的影响,以探讨HBx蛋白能否促进肝干细胞的恶性转化。方法：以腺病毒Ad-HBx和Ａd-GFP感染肝前体细胞株Hp14-19,RT-PCR和Western blot证实HBx蛋白在肝前体细胞内的表达。RT-qPCR和免疫荧光检测早期和晚期分化指标的变化,并于诱导后11 d用PAS染色观察细胞的分化成熟程度。结果：Ad-HBx能有效感染肝前体细胞株Hp14-19并表达。与对照组（感染Ad-GFP）相比,实验组（感染Ad-HBx）细胞分化早期指标穿膜蛋白（Delta like homolog,DLK）、肌酸激酶19（Creatine kinase19,CK19）和甲胎蛋白（Alpha fetal protein,AFP）表达降低减慢,而晚期指标CK18和白蛋白（Albumin,ALB）表达升高不明显。PAS染色阳性率降低。差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：HBx可抑制肝前体细胞的分化,这可能是最终导致肝前体细胞恶性转化的原因之一。     

大鼠耳蜗前体细胞的体外培养与分化鉴定

目的:分离?培养大鼠的耳蜗前体细胞,鉴定其增殖和分化能力,分析内耳发育相关基因在其分化中的表达?方法:从新生大鼠的耳蜗组织中分离获得前体细胞,进行体外培养,并加入血清诱导分化,通过免疫细胞化学的方法鉴定其增殖和分化为毛细胞的能力,利用荧光定量PCR的方法分析不同分化阶段的耳蜗前体细胞中内耳发育相关基因的表达?结果:原代培养的耳蜗前体细胞经免疫细胞化学鉴定呈nestin?BrdU阳性,经血清诱导分化后呈myosin Ⅶ A阳性?荧光定量PCR的结果表明Sox2?CyclinA2在耳蜗前体细胞分化的过程中表达逐渐下降,而Jagged1在分化过程中表达不断升高?结论:分离的耳蜗前体细胞具有增殖能力和分化为毛细胞的潜能,在其分化过程中Sox2?CyclinA2和Jagged1可能参与调控大鼠前体细胞的分化和耳蜗组织的发育?     

癫痫大鼠海马区增殖的内源性神经前体细胞演变过程的研究

目的 追踪观察匹罗卡品诱导癫痫模型大鼠海马区增殖的内源性神经前体细胞的分化及演变过程，从而探讨痫性发作对增殖的内源性神经前体细胞的影响。方法 氯化锂和匹罗卡品联合诱导大鼠癫痫模型，正常对照组注射生理盐水，干预后14d腹腔注射5-溴脱氧尿苷嘧啶（BrdU）标记海马DG区增殖的内源性神经前体细胞；用免疫组化方法分别观察标记后5、14、28d海马DG区BrdU／神经元核性蛋白（NeuN）、BrdU／胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达；TUNEL标记方法观察BrdU／TUNEL的表达。结果 与正常对照组相比，癫痫模型组大鼠海马区出现的BrdU阳性细胞明显增多，增殖的细胞大多数分化为神经元（约70％），只有少数分化为星形胶质细胞。随标记时间延长，存活的增殖细胞逐渐减少，部分BrdU阳性细胞表现为TUNEL阳性。结论 癫痫发生后出现了神经前体细胞的增殖，增殖的细胞大多数分化为神经元。但只有少部分细胞存活下来参与海马结构的重组。     

全反式维甲酸诱导肝前体细胞向肝细胞分化的研究

目的：探讨全反式维甲酸（All-trans retinoic acid,ATRA）对肝前体细胞分化的影响。方法：取孕14.5 d胎鼠制备肝前体细胞,瞬时转染带白蛋白启动子（Albumin promoter）的荧光素酶报告质粒pALB-Luc,以便实时检测细胞的分化状态。优化ATRA诱导条件,分别于诱导后3、6、9 d收集细胞总RNA,半定量RT-PCR检测分化相关指标的变化。并于诱导后11 d用苏木精-伊红染色法观察细胞形态的改变,PAS染色观察细胞的分化成熟程度。结果：ATRA浓度为1 μmol/L时对肝前体细胞分化诱导作用最强。与对照组相比,随培养时间的延长,ATRA组分化早期指标膜蛋白（Delta like,DLK）、细胞角蛋白（Cytokeratin19,CK19）表达降低更为明显,而甲胎蛋白（Alpha fetal protein,AFP）、白蛋白（Albumin,ALB）表达更为升高。形态学观察细胞体积增大,呈多边形,核浆比率降低,相嵌紧密排列,可见双核细胞。PAS染色阳性率上升。结论：浓度1 μmol/L的ATRA对肝前体细胞分化诱导作用最强,ATRA能诱导肝前体细胞分化为类肝细胞。     

结缔组织生长因子与肝纤维化的研究进展

结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是近年来新发现的一种间质细胞的生长因子,具有明显的丝裂原性和趋化性,可以启动一系列介导组织创伤修复和再生的生物学过程.     

结缔组织生长因子肽对大鼠凝血参数的影响

观察结缔组织生长因子肽（P1c）对大鼠凝血参数的影响。方法：大鼠连续五天静脉注射不同剂量（2、4、8 mg？kg－1）的P1c，测定凝血参数。结果：阳性抗凝血肝素钠组与生理盐水组相比较有显著性差异（P〈0.05），低、中、高剂量的P1c 与生理盐水组比较无显著性差异（P〉0.05）。结论：P1c 对大鼠凝血参数没有明显影响。     

条件培养液对人视网膜前体细胞分化的诱导

目的:研究各种培养液对人视网膜前体细胞(RPC)的诱导分化作用.方法:分离培养3～5个月人胚胎RPC,分别用胎牛血清(FBS组)、视网膜组织培养上清(RE组)、视网膜色素上皮培养上清(RPE组)诱导分化.采用免疫组化SP法检测细胞诱导前后Nestin、微管相关蛋白-2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、视紫红质(Rho-dopsin)及蛋白激酶C(PKC)和钙结合蛋白(Calbindin)的表达情况,流式细胞术检测诱导后MAP-2、GFAP及Rhodopsin阳性细胞数.结果:原代及传代培养的RPC表达Nestin,能分裂增殖,形成子代细胞团.RE组和FBS组细胞诱导分化后形态多样,连接广泛;RPE组细胞呈圆形,不贴壁.诱导分化后RE组细胞MAP-2的表达高于RPE组和FBS组(P＜0.01),而Rhodopsin的表达低于RPE组(P＜0.01);GFAP的表达在RPE组最低,RE组较高,FBS组最高(P＜0.05).结论:不同培养基诱导可使人RPC的分化产生差异.     

扶正化瘀胶囊对肝纤维化大鼠的防治作用及对结缔组织生长因子表达的影响

目的 研究扶正化瘀胶囊在实验性肝纤维化形成中的预防作用及肝纤维化形成后的治疗作用,分析扶正化瘀胶囊对肝纤维化大鼠结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法 选取Wistar大鼠40只随机分为正常组（8只）、预防组（预防实验组8只和预防对照组8只）和治疗组（治疗实验组8只和治疗对照组8只）;除正常组外,其余各组均采用皮下注射CCl4联合饮用乙醇的方法制备肝纤维模型;预防实验组和治疗实验组分别在造模第4周和造模结束后（第8周）予扶正化瘀方生药0.46 g/kg体质量灌胃。每日1次,共4周;预防对照组和治疗对照组分别于上述时点予生理盐水10 mL/kg体质量灌胃,实验结束后分别采血测定肝功能、肝纤维化指标,对肝组织进行病理学观察,并对肝组织内的CTGF蛋白进行免疫组织化学染色分析。结果 造模结束后（第8周）,预防实验组较预防对照组的总胆红素（TB）、谷丙转氨酶（ALT）降低,差异有统计学意义（ P均<0.05）。第12周,治疗实验组较治疗对照组的ALT降低,差异有统计学意义（ P<0.01）,而其余项差异均没有统计学意义。预防实验组较预防对照组的肝纤维化指标透明质酸（HA）降低,差异有统计学意义（ P<0.01）。治疗实验组较治疗对照组的肝纤维化指标层粘连蛋白（LN）降低,差异有统计学意义（P<0.05）,其余项差异没有统计学意义。治疗实验组较治疗对照组的肝组织病理显示其炎症及肝纤维化均明显减轻,治疗实验组肝组织CTGF表达低于治疗对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 扶正化瘀胶囊在实验性肝纤维化造模过程中有预防肝纤维化形成的作用,在实验性肝纤维化形成后具有逆转肝纤维化的治疗作用。肝纤维化大鼠肝组织中CTGF表达明显增加,而扶正化瘀胶囊可抑制CTGF表达,可能是其作用机制之一。     

结缔组织生长因子肽对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响

目的:观察结缔组织生长因子肽(P1c)对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响.方法:观察不同剂量(2、4、8 mg·kg-1)的P1c静脉给药对动静脉旁路血栓模型大鼠血栓形成的影响.结果:P1c高、中剂量组和阳性药阿司匹林组血栓湿重较生理盐水组显著下降(P＜0.05),剂量与血栓形成抑制率呈明显正相关(r=0.997,P＜0.05).结论:P1c具有良好的抗血栓作用.     

姜黄素对大鼠肾系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的 观察姜黄素对大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。并探讨其可能的影响机制。方法 体外培养大鼠肾系膜细胞．同步后用血清刺激，并用不同浓度的姜黄素、姜黄素联合mTOR特异阻断剂雷帕霉素、姜黄素和磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶BCP13K／Akt）特异抑制剂LY294002进行干预处理。采用RT-PCR检测CTGF和纤维连接蛋白（Fn）mRNA表达；Western blot检测CTGF蛋白和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）表达。结果 ①血清刺激系膜细胞6h，姜黄素浓度依赖性抑制CTGF和Fn mRNA的表达；姜黄素联合雷帕霉素对CTGF和Fn mRNA表达的抑制作用较单用同浓度姜黄素明显；LY294002预处理后。姜黄素对CTGF和Fn mRNA表达的抑制作用较未预处理组减弱。②25／μmol／L姜黄素作用细胞30、120min。p-Akt蛋白表达较同时间点血清对照组明显减弱；且LY294002预处理后姜黄素对p-Akt表达的抑制作用较未预处理组亦明显减弱。③血清刺激系膜细胞24h。姜黄素对CTGF蛋白的表达亦起抑制作用；姜黄素联合雷帕霉素对CTGF蛋白表达抑制更明显；LY294002预处理后。姜黄素对CTGF蛋白表达的抑制效果较未预处理组减弱。结论 姜黄素可抑制血清刺激的肾小球系膜细胞CTGF的表达．其机制可能与P13K／Akt信号途径和mTOR信号途径有关。     

siRNA对HSC结缔组织生长因子的抑制作用

目的研究化学合成的小分子干扰RNA (siRNA)对鼠肝星状细胞 (HSC)结缔组织生长因子 (CTGF)基因表达的抑制作用。方法针对大鼠CTGFmRNA 4 83、885和 94 6位点化学合成 3对 2 1核苷酸 (nt)siRNA ,分别以 5 0、10 0、2 0 0nmol/L浓度转染HSCT6 ,以空白及转染非特异siRNA作为对照 ,应用RT PCR检测CTGFmRNA表达 ,筛选出抑制效率最高的siRNA及其浓度 ;再转染HSCT6 ,抽提孵育 2 4、4 8、72h细胞总RNA及蛋白质 ,应用RT PCR和Westernblot检测CTGFmRNA及蛋白质表达。结果与对照相比 ,转染siRNA的HSCT6细胞CTGFmRNA表达水平明显降低 ,siRNA抑制效率在 5 0 ～2 0 0nmol/L范围呈浓度依赖性增高 ,以 4 83siRNA 2 0 0nmol/L最显著 ,转染非特异siRNA的HSCT6细胞CTGFmRNA表达水平无明显变化 ;转染 4 83siRNA的HSCT6细胞 2 4　 4 8、72hCTGFmRNA分别下调 (91± 2 ) %、(6 5± 3) % (P均 <0 .0 1)和 (10± 7) % (P =0 .0 6 34) ,蛋白分别下调 (86± 5 ) %、(94± 4 ) %和 (4 2± 9) % (P均 <0 .0 1)。结论化学合成 4 83siRNA能高效抑制HSC的CTGF基因表达 ,有效阻抑时间达 72h,提示化学合成siRNA具有预防和治疗肝纤维化的潜力     

结缔组织生长因子在糖尿病肾病诊断中的意义

目的研究结缔组织生长因子(CTGF)在糖尿病肾病(DN)患者不同阶段尿中的表达水平及CTGF与糖尿病肾脏损害程度的关系,分析CTGF在DN诊断中的意义。方法选择糖尿病患者101例及正常对照组30例,根据尿蛋白排泄量(UAE)将患者分为:正常蛋白尿组(Ⅰ组)42例,微量蛋白尿组(Ⅱ组)33例,临床蛋白尿组(Ⅲ组)26例。应用酶联免疫吸附法测定各组尿中的CTGF水平。结果糖尿病各组尿中CTGF水平与正常对照组比较均明显升高,Ⅰ组尿CTGF就已经开始升高,Ⅱ组及Ⅲ组尿CTGF显著高于Ⅰ组,Ⅲ组尿CTGF显著高于Ⅱ组。糖尿病组的尿CTGF水平与尿蛋白排泄量呈显著正相关。结论CTGF可能参与了糖尿病肾病的发生发展并起着重要作用,检测尿中CTGF对于DN早期的诊断及治疗都有重要意义。     

结缔组织生长因子在腹膜纤维化中的作用与调控

腹膜纤维化已逐渐成为维持性腹膜透析患者退出的主要原因,其发生是有多种因素参与的复杂过程。而结缔组织生长因子作为促纤维化刺激的共同下游介质在这一病理生理过程中发挥了重要作用,被认为可能是较理想的抗腹膜纤维化的靶目标。本文就非生理性腹透液致腹膜纤维化的机制、结缔组织生长因子的生物学特性以及结缔组织生长因子在腹膜纤维化发生过程中的具体作用和调控予以综述。     

醛固酮对大鼠肾小球系膜细胞表达结缔组织生长因子的影响

目的:探讨醛固酮(ALD)对大鼠肾小球系膜细胞表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响,及转化生长因子β1(TGF-β1)是否参与其信号通路。方法:大鼠肾小球系膜细胞加入不同浓度的ALD共同培养0、12、24、36、48h,RT-PCR方法评价CTGF mRNA的表达;用ELISA方法检测TGF-β1蛋白的表达;并用TGF-β1/Smads信号通路的特异性丝、苏氨酸激酶抑制剂Staurosporine(STA)加以对比。结果:ALD刺激后肾小球系膜细胞CTGF mRNA表达水平增加,且呈剂量依赖性,TGF-β1蛋白表达也明显增加;用STA预处理1h后再用ALD刺激24h,则CTGFmR-NA的表达无明显变化。结论:ALD通过TGF-β1/Smads途径上调肾小球系膜细胞表达CTGF。     

结缔组织生长因子在糖尿病大鼠心肌的表达及意义

目的观察结缔组织生长因子（CTGF）在糖尿病大鼠心肌中的表达，探讨CTGF在糖尿病心肌病发病机制中的作用。方法SD大鼠60只，均分为对照组和糖尿病组。链脲佐菌素（STZ）一次性腹腔注射建立糖尿病模型。在病程4，8，12周分别从2组中随机选择6只，称质量并计算心体比（H／B）和左室质量指数（LVMI）。电镜观察12周2组心肌超微结构，光镜观察2组冠状动脉病变。RT-PCR方法比较不同病程各组心肌CTGF、纤维连接蛋白（FN）、Ⅲ型胶原（ColⅢ）、转化生长因子-β1（TGF—β1）的表达。结果STZ诱导糖尿病组在病程12周心肌超微结构病变显著，冠状动脉未见病变，糖尿病心肌病已形成。在病程4，8，12周，糖尿病组H／B、LVMI逐渐增加，心肌CTGFmRNA表达显著上调（P〈0．01），并随着病程延长呈逐渐增高趋势，与FN、ColⅢ表达进行性增高相平行。TGF-β1，在糖尿病心肌中mRNA表达增高，但12周时已呈下降趋势。CTGF与TGF-β1，mRNA表达呈正相关（r=0．792，P〈0．01）。CTGF与FN、ColⅢmRNA表达呈明显正相关（r=0．923，0．879，均P〈0．01），其相关性比TGF-β1，显著。结论糖尿病大鼠心肌CTGF表达上调与细胞外基质的积聚密切相关，在糖尿病心肌病形成过程中，CTGF可能起较直接、持久的作用。     

大黄泄浊颗粒保留灌肠对非透析慢性肾病湿热证患者血清结缔组织生长因子及肝细胞生长因子的影响

目的观察非透析慢性肾病湿热证患者血清结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)水平及大黄泄浊颗粒保留灌肠对其干预作用。方法将63例非透析慢性肾病3~4期湿热证患者随机分为治疗组32例和对照组31例,并设正常组20例。治疗组和对照组均给予基础治疗,治疗组加用大黄泄浊颗粒保留灌肠,每日1次,疗程8周。观察两组临床疗效、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum creatinine,SCr),以及治疗前后血清CTGF、HGF,并与正常组进行比较。结果治疗组临床疗效和中医证候疗效均显著优于对照组(P<0.05)。治疗后治疗组BUN较治疗前显著降低(P<0.05),SCr呈降低趋势(P>0.05);对照组治疗后BUN较治疗前呈降低趋势(P>0.05),SCr较治疗前显著升高(P<0.05)。治疗组和对照组治疗前CTGF、HGF水平显著高于正常组(P<0.05);治疗后治疗组和对照组血清CTGF、HGF水平均显著降低(P<0.05);治疗组治疗后HGF和CTGF下降值大于对照组,差异无统计学意义(P>0.05)。结论大黄泄浊颗粒保留灌肠改善非透析慢性肾病湿热证患者的机制与降低血清CTGF、HGF水平有关。     

血尿联检结缔组织生长因子在狼疮性肾炎早期诊断中的临床意义

目的 探讨血清及尿液结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）在狼疮性肾炎（lupus nephritis,LN）患者早期诊断中的临床意义.方法 100例LN患者根据尿中微量白蛋白（mAlb）水平分为Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组,另外选取40例健康体检者作为对照组,测定其SCr、BUN、血清及尿液CTGF水平,并分析血清及尿液CTGF水平与mAlb的关系.结果 四组（狼疮性肾炎各组和对照组）的血清及尿液CTGF水平之间相比较存在明显的统计学意义（F值分别为175.235及156.871,P＜0.05）,狼疮性肾炎各组的血清及尿液CTGF水平与正常对照组比较均明显升高,Ⅰ组血清及尿液CTGF水平开始升高,Ⅱ组及Ⅲ组尿CTGF显著高于Ⅰ组,Ⅲ组尿CTGF显著高于Ⅱ组.狼疮性肾炎各组的血清及尿液CTGF水平与mAlb呈显著正相关（相关系数分别为r=0.715,P＜ 0.05;r=0.456,P＜0.05）.结论 血清及尿液CTGF在狼疮性肾炎发生发展中可能起到重要作用,检测血清及尿液CTGF水平对于LN患者的早期诊断具有重要意义.     

Connective Tissue Growth Factor Expression in Rabbit Corneal Fibroblast and Its Effect on Fibroblast Proliferation In Vitro

Connective tissue growth factor (CTGF) takespart in chemotactic,mitogenic,cell matrix inducingevents and scar formation.CTGF can activate andregulate the process that concerns with wound repairand regeneration.Itcan promote fibroblastprolifera-tion and extracellular matrix synthesis and secretion,stimulate vascular endothelial cell regeneration andneovascularization.CTGF is involved in many patho-genesis,such as dermatosclerosis,breasttumor infil-tration and metastasis,proliferating nephri…     

结缔组织生长因子与糖尿病肾病

糖尿病肾病目前尚缺乏早期诊断的有效方法,且治疗效果不佳。结缔组织生长因子作为一种致纤维化因子,在糖尿病肾病时的肾脏系膜细胞、足细胞、肾间质细胞中表达增加,并反作用于上述细胞。其机制可能是结缔组织生长因子与细胞表面硫酸类肝素蛋白多糖、酪氨酸激酶受体等结合,诱导细胞炎性反应及基质胶原蛋白合成与纤维粘连蛋白合成,肾脏发生纤维化。结缔组织生长因子是肾脏纤维化与蛋白尿形成的一种因素,特异性阻断结缔组织生长因子可能会成为治疗糖尿病肾病的新方向。