奥沙利铂通过调控miRNA-7-5p/RAF-1促进胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的探讨奥沙利铂如何调控MAPK通路,抑制胃癌细胞的增殖。方法NCBI检索文献,利用TargetScan、StarBase和miRBase数据库,进行GO分析与KEGG通路富集,找到相关miRNAs,预测靶基因。应用Real-time PCR、MTT、Hoechst33258、流式细胞术、细胞划痕实验、Western blot等方法分析人胃癌SGC-7901细胞的增殖、细胞周期、侵袭及蛋白表达情况。结果胃癌细胞中miR-7-5p显著低表达,RAF1与miR-7-5p存在互靶关系。miR-7-5p mimics与奥沙利铂均可促进SGC-7901细胞的凋亡,提高G1期细胞百分率(P<0.05),降低侵袭、迁移速度。caspase3、caspase9蛋白表达升高,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05)。结论过表达miR-7-5p与奥沙利铂均可促进胃癌SGC-7901细胞的凋亡,提示奥沙利铂可能通过上调miRNA-7-5p促进SGC-7901细胞的凋亡,降低侵袭、迁移速度。     

生物信息学在三阴性乳腺癌mi RNA生物标志物筛选中的应用

目的：通过医学癌症数据库（TCGA）和基因表达数据库（GEO）分析三阴性乳腺癌（TNBC）中差异表达微小RNA（miRNAs）并预测其靶基因,探讨其生物学功能和分子机制,寻找TNBC预后相关靶点。方法：下载TCGA数据库中343项关于乳腺癌组织与癌旁组织相关的miRNAs表达数据,筛选乳腺癌与癌旁组织中差异表达的miRNAs;GEO数据库验证miRNAs在TNBC细胞系的26种细胞株中的表达以及TNBC患者经过化疗前后血清中miRNAs的变化;通过基因本体（GO）功能注释及京都基因和基因组百科全书（KEGG）信号通路富集、蛋白质互作网络分析候选miRNAs的靶基因功能。结果： TCGA数据库,在乳腺癌组织中的miR-21-5p表达水平明显高于相邻癌旁组织（logFC=5.557,P<0.01）;GEO数据库筛选,miR-21-5p在TNBC细胞系中表达水平明显升高,在26种TNBC细胞株中超过20种细胞株相对表达水平>70 000,TNBC患者经联合化疗后miR-21-5p的表达水平明显降低（logFC=-5.07,P<0.01）;GO分析,miR-21-5p主要在DNA复制、转录以及血管重构等方面发挥调控作用;KEGG富集分析,miR-21-5p主要通过促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）和转化生长因子β（TGF-β）等通路影响TNBC的发生发展。结论： miR-21-5p在TNBC组织中表达上调,在TNBC进展中发挥正调控作用,可能成为鉴定TNBC相关预后程度的关键生物学标志物。DUSP8等可能作为miR-21-5p的靶基因参与调控TNBC的发生发展。     

TS基因3’-UTR多态性与晚期肺腺癌患者对培美曲塞敏感度的关系

目的 探讨胸苷酸合成酶( thymidylate synthase,TS)基因3’端非翻译区(untranslated region,UTR)1 494 bp处6 bp缺失或插入多态(-6 bp或+6 bp)与晚期肺腺癌患者接受培美曲塞方案化疗敏感度的关系.方法 采用AollgTM探针结合实时荧光PCR技术检测接受培美曲塞方案化疗的106例晚期肺腺癌患者外周血中TS基因型,分析携带TS不同基因型患者与化疗敏感度的关系.结果 (1)106例晚期肺腺癌患者中TS基因3’-UTR 1 494 bp处6 bp缺失或插入多态基因频率分别为:-6 bp/-6 bp55.7％(59/106),-6 bp/+6 bp 44.3％(47/106),+6 bp/+6 bp 0(0/106);(2)总体近期有效率(CR+PR)为23.58％,携带TS基因3’-UTR 1494 bp处-6 bp/-6 bp基因型化疗有效率是携带-6 bp/+6 bp基因型有效率的4.382倍(95％ CI:1.462～13.130,P=0.008);(3)携带-6 bp/-6 bp基因型与携带-6 bp/+6 bp基因型患者的中位PFS、中位OS差异均具有统计学意义(3.400月vs.2.477月,p=0.001;14.239月vs.12.194月,P=0.000);提示携带-6 bp/-6 bp基因型患者在PFS、OS具有显著优势.(4)Cox多因素分析临床病理因素与生存时间的关系得出年龄越大,病理分期越晚,携带TS3’-UTR 1 494位点处-6 bp/+6 bp基因型患者的死亡风险越大.结论 TS基因3’- UTR 1 494 bp处6 bp缺失或插入多态(-6 bp或+6 bp)可能与晚期肺腺癌患者培美曲塞方案化疗敏感度相关,可作为晚期肺腺癌患者个体化治疗预测因子之一.     

shRNA下调BAG-1表达降低肺癌A549细胞对顺铂的耐药性

目的：通过载体介导的shRNA下调BAG-1基因（Bcl-2 associated athanogene-1)表达,探讨其对肺癌A549细胞顺铂（cisplatin,DDP）耐药性的影响。方法：构建靶向BAG-1的shRNA干扰载体pGCsi-BAG-1,稳定转染A549细胞。实验组使用稳定转染pGCsi-BAG-1的细胞株（BAG-1-shRNA）,阴性对照组使用无关序列质粒转染的细胞株（SC-shRNA）,对照组使用未转染的亲本A549细胞株（Control）。Western blotting检测pGCsi-BAG-1转染对A549细胞BAG-1、Bcl-2表达的影响。MTT法、流式细胞术分别检测pGCsi-BAG-1转染对DDP处理后A549细胞的增殖和凋亡的影响。结果：成功构建稳定干扰BAG-1表达的A549细胞株,BAG-1-shRNA组细胞中BAG-1和Bcl-2蛋白表达显著低于SC-shRNA组和对照组（均P<0.05）。随DDP(25~40 μg/ml)浓度增加,各组细胞增殖抑制率也随之升高,DDP浓度为2.5 μg/ml时,BAG-1-shRNA组A549细胞的增殖抑制率即显著高于SC-shRNA组和对照组\[（22.26±4.89）% vs （10.07±3.82）%,（8.12±4.09）%,均P<0.05\]。与SC-shRNA组和对照组相比,DDP(2.5 μg/ml)处理24 h后,BAG-1-shRNA组凋亡率显著升高\[（37.8 4±3.62）％ vs （16.80±281）％、（17.10±3.11）％,P<0.05\]。结论：下调BAG-1表达可抑制DDP作用下的A549细胞的增殖并促进其凋亡。     

紫杉醇联合洛铂或顺铂治疗晚期老年卵巢癌的疗效和安全性

目的 评价洛铂(LBP)联合紫杉醇(PTX)与顺铂(DDP)联合PTX治疗老年卵巢癌的临床疗效和不良反应.方法 收集晚期老年卵巢癌患者60例,随机给予TL、TP方案,每组30例.TL组:PTX 135 mg/m2,第一日静点;LBP 50 mg/m2,第二日静点;TP组:PTX 135 mg/m2,第一日静点;DDP 25 mg/m2,第1～3日静点,21 d重复.3个周期后进行疗效评价,每周评价毒性反应.结果 ①TL、TP组有效率(RR)同为76.7％,疾病控制率(DCR)为83.3％、86.7％,两组无统计学差异(均P＞0.05).②随访5～12个月,TL组:中位生存期(MST)为8.2个月,疾病缓解时间(DRT)为3.9个月;TP组:MST为8.4个月,DRT为3.7个月,组间无统计学差异(均P＞0.05).③TL组近期毒副反应:骨髓抑制Ⅲ～Ⅳ度占13.3％,血红蛋白和血小板下降分别占40％(12/30)、47％(14/30),消化道反应27％(8/30),未发现肝肾功能损害.TP组:骨髓抑制Ⅲ～Ⅳ度占3.3％,消化道反应57％ (17/30),血红蛋白和血小板下降分别为30％ (9/30)、40％ (12/30),发现轻微肝肾功能损害.两组间骨髓抑制无显著性差异(P＞0.05),消化道反应比较有显著性差异(x2=5.55,P=0.018).结论 TL和TP方案均为治疗晚期老年卵巢癌的有效方案,TL方案治疗老年晚期卵巢癌消化道反应轻,因此安全性更高.     

芦丁联合奥沙利铂激活FKN/SYK/p38通路促进胃癌细胞凋亡北大核心CSCD

目的探讨芦丁联合奥沙利铂对人胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响及机制。方法采取对数生长期的人胃癌细胞SGC-7901作为研究对象,采用MTT、流式细胞术、Western blot等方法检测细胞活力、细胞周期和相关蛋白表达的变化。结果 p38抑制剂可促进SGC-7901细胞的增殖(P<0.05);而芦丁、奥沙利铂均可抑制SGC-7901细胞的增殖,联合组对SGC-7901细胞的抑制作用更显著;p38抑制剂组FKN、SYK、p-p38、cleaved-caspase3、7、8、9蛋白表达与阴性对照组相比明显降低(P<0.05);芦丁与奥沙利铂联合作用后,以上蛋白均不同程度的升高。结论芦丁与奥沙利铂均可抑制SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与FKN/SYK/p38通路的激活有关。     

ERCC1、RRM1在非小细胞肺癌中的表达及其与铂类化疗敏感性的关系

目的通过对非小细胞肺癌(NSCLC)组织与癌旁组织中切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、核糖核苷还原酶调节因子1(RRM1)蛋白检测,探讨其表达与NSCLC临床特征及预后的关系,为NSCLC个体化治疗提供实验依据。方法采用免疫组化方法检测121例NSCLC患者术后癌组织和癌旁组织标本中ERCC1、RRM1蛋白的表达水平,探讨ERCC1、RRM1的表达与NSCLC患者总生存期(OS)、疾病进展时间(TTP)及中位OS、中位TTP之间的关系。结果①ERCC1、RRM1在NSCLC患者癌组织与癌旁组织中的阳性表达率比较,差异具有统计学意义(53.72%、46.28%vs 23.14%、25.62%,P均<0.05);②接受术后铂类方案化疗并随访,ERCC1阴性表达者中位OS较阳性表达者明显延长(18.30 vs 11.00个月;χ2=8.756,P=0.003),中位TTP亦较阳性表达者明显延长(15.00 vs 9.30个月;χ2=8.740,P=0.003)。RRM1阴性表达者中,中位OS较RRM1阳性表达者明显延长(18.30vs 11.00个月;χ2=6.836,P=0.009),同时中位TTP亦较RRM1阳性表达者明显延长(11.20 vs 6.60个月;χ2=5.764,P=0.016);③121例NSCLC患者中,ERCC1、RRM1蛋白阴性表达者的中位OS、中位TTP较阳性表达者明显延长(P均<0.05)。结论 ERCC1、RRM1蛋白可能成为NSCLC患者对铂类药物敏感性的预测因子;二者联合检测有助于NSCLC患者个体化治疗方案的选择。     

紫杉醇脂质体治疗恶性腹腔积液55例疗效分析

目的探讨紫杉醇脂质体治疗恶性腹腔积液的疗效。方法 55例伴发恶性腹腔积液的晚期肿瘤患者,经腹腔置管闭式引流放腹水后,给予紫杉醇脂质体80 mg/m2腹腔注入,21 d为1个疗程,至少完成3周期。结果紫杉醇脂质体治疗恶性腹腔积液总有效率为72.72%。患者体质状况,经Karnofsky评分提高≥10分者达80%,而且局部及全身毒副作用轻。结论紫杉醇脂质体经腹腔内注入治疗恶性腹腔积液疗效满意,毒副作用轻,患者耐受良好,生活质量明显提高。     

BAG-1蛋白在衣霉素诱导人肺癌A549细胞内质网应激及提高顺铂敏感性中的作用

目的:体外观察低剂量衣霉素对人肺腺癌A549细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的诱导作用,以及此过程中Bcl-2结合抗凋亡基因1(Bcl-2 associated athanogene 1,BAG-1)表达的变化;同时,观察衣霉素作用后A549细胞对顺铂敏感性的变化以及此过程中BAG-1蛋白表达的变化.方法:采用蛋白质印迹法检测低剂量衣霉素作用A549细胞后ERS标志性蛋白GRP78及抗凋亡蛋白BAG-1的表达变化;MTT法测定衣霉素作用后顺铂对A549细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)变化;FCM法检测低剂量衣霉素作用后A549细胞对顺铂的敏感性变化;蛋白质印迹法检测衣霉素作用前后顺铂对A549细胞中BAG-1和procaspase-12蛋白表达的影响.结果:1.25 μg/mL衣霉素作用A549细胞8h后,能诱导细胞发生ERS,即ERS标志性蛋白GRP78表达上调,同时BAG-1蛋白表达也明显上调(P均＜0.05).衣霉素诱导A549细胞ERS能增加细胞对顺铂的敏感性(P＜0.05).细胞发生ERS前,1.25、2.5和5 μg/mL 3个质量浓度的顺铂均上调BAG-1蛋白的表达(P均＜ 0.05),但2.5和5μg/mL顺铂诱导BAG -1蛋白上调量均小于1.25 μg/mL组(P＜0.05);细胞发生ERS后,与单纯ERS未给予顺铂干预的细胞组比,1.25、2.5和5μg/mL 3个质量浓度的顺铂均下调BAG -1蛋白的表达(P均＜0.05),且下调量与顺铂浓度呈正比.2.5和5μg/mL顺铂能通过ERS途径诱导细胞发生凋亡,在此过程中BAG-1和procaspase-12蛋白表达均下调(P均＜0.05).结论:BAG-1蛋白可能是ERS和顺铂诱导肺癌细胞凋亡的一个重要调控因子之一,且ERS凋亡途径可能是顺铂诱导肺癌细胞凋亡的重要途径之一.