HBV核心和前S1融合蛋白在大肠杆菌中的表达及真核表达载体的构建

目的:表达可用于乙型肝炎治疗性疫苗研究的乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)与前S1抗原(PreS1)氨基酸(AA)3～55肽段融合蛋白。方法:以原核表达载体pET-11d表达HBV融合蛋白,采用免疫印迹技术和酶联免疫吸附试验(ELISA)分析表达产物的抗原性。构建以CMV为启动子的表达HBV核心和前S1融合蛋白的真核表达载体。结果:HBV融合蛋白在大肠杆菌中有效稳定表达,表达产物具有核心抗原和前S1特异杭原性。成功构建了pCI-CS1真核表达载体。结论:本方法有效表达了HBV融合蛋白,表达产物具有特异抗原性。融合蛋白的表达及真核表达载体的构建为进一步进行HBV CS1融合蛋白和基因疫苗研究奠定了基础。     

左旋氧氟沙星对小鼠结核分枝杆菌生长及细胞免疫的影响

目的探讨左旋氧氟沙星对小鼠结核分枝杆菌生长、特异性细胞免疫和病理改变的影响,探讨左旋氧氟沙星联合其他免疫治疗的可行性。方法 38只C57BL/6小鼠尾静脉注射H37Rv结核菌(1×106CFU/只),然后随机等分为两组,一组不作处理(对照组),另一组进行左旋氧氟沙星灌胃治疗(药物组),300mg/kg,每周灌5d,疗程28d。在治疗开始后不同时间点处死小鼠,计数肺组织结核分枝杆菌菌量、观察肺组织病理变化,测定脾细胞特异性细胞因子的产生情况。结果左旋氧氟沙星能有效抑制小鼠肺组织结核分枝杆菌的生长,与对照组比较,药物组小鼠服药期间细菌量减少100倍,停药后30d仍减少10倍,差别有统计学意义(P0.05)。同时药物治疗能减轻肺组织病理变化的程度。药物组小鼠脾细胞分泌卡介苗(BCG)特异性细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-10和IL-17水平明显高于对照组(P0.05)。结论左旋氧氟沙星能有效抑制小鼠结核分枝杆菌的生长,同时能改善肺组织的病理变化和促进小鼠脾细胞分泌特异性细胞因子。     

三种乙型肝炎病毒DNA定量聚合酶链反应试剂比较及其假阴性原因分析

乙型肝炎e抗原（HBeAg）是乙型肝炎病毒（HBV）复制的一个标志，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性、HBeAg阳性、抗-HBc阳性的患者体内HBV DNA亦较高。有报道所有该类标本均可检测到HBV DNA，且绝大部分（83．33％）的HBV DNA滴度高于10^6拷贝／ml。然而，我们在对临床标本进行HBV DNA定量检测中发现，相当一部分该类血清标本不能检测到HBV DNA或检测结果低于试剂盒检测下限。为了排除所用试剂盒缺陷造成的可能，我们对目前国内医疗机构常用的三种HBV DNA荧光定量聚合酶链反应（PCR）试剂进行了比较与分析。     

人血清白蛋白微小基因的构建

人血清白蛋白（Alb）是人血浆中的主要蛋白质成分，由肝脏合成后分泌到血液中，具有运输脂类物质、维持血浆渗透压和增强机体免疫力等多种生物功能。临床上广泛应用，几乎全部来源于人血，由于血源受限及血液中可能存在肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒等各类病原的污染，限制了Alb的临床应用。用基因工程技术生产重组人血清白蛋白是有发展前景的。因此构建人血清白蛋白的微小基因，为利用乳腺生物反应器生产A1b打下基础。     

HIV-HCV合并感染者血清HCV RNA的定量检测

人类免疫缺陷病毒(HIV)与丙型肝炎病毒(HCV)传播途径相同，二者可以合并感染。据报道，在美国和欧洲有约30％的HIV感染者合并有HCV感染，而在吸毒人群中HIV—HCV的合并感染率高达60％～90％。国外研究显示，HIV感染会对HCV的病程造成影响，加快肝硬化的进程提前进入肝功能衰竭；而HCV又会加速HIV引起的CD4细胞破坏，促进HIV复制，使HIV进展到艾滋病(AIDS)相关疾病及死亡的时间缩短。目前，国内对HIV—HCV合并感染的研究报道较少。为了探索国人HIV—HCV合并感染对两种疾病的相互影响，     

不同亚型乙型病毒性肝炎患者T细胞亚群调查研究

目的研究不同亚型乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群变化及其临床意义。方法选择40例慢性活动性乙型肝炎、30例乙型肝炎病毒携带者、30例乙型肝炎肝硬化、20例急性乙型肝炎患者和30例健康对照者,采用流式细胞仪检测各组外周血T淋巴细胞亚群的表型和频率。结果与正常对照组比较,慢性活动性肝炎、肝炎肝硬变患者外周血CD4 、CD4 /CD8 比值均有显著性下降(P<0.01),以肝炎肝硬变下降最显著,慢性病毒携带者肝炎、急性乙型肝炎外周血T细胞亚群数量和比值变化不明显(P>0.05)。HBV DNA病毒载量与患者外周血CD4 T细胞数量无相关性(P>0.05)。结论慢性活动性乙型肝炎和肝硬化患者的细胞免疫功能降低,其下降程度与病毒复制水平无相关性。     

肺结核患者结核分支杆菌EIS抗原特异性细胞免疫的临床研究

目的 探讨肺结核患者结核分支杆菌EIS抗原特异性细胞免疫水平与病情的关系。方法 选择30例初治、痰涂片结核杆菌阳性的活动性肺结核患者，采用比色法测定其外周血淋巴细胞对结核分支杆菌EIS抗原的增殖反应，酶联免疫吸附法测定细胞分泌的γ-干扰素（IFN-γ）及白细胞介素-10（IL-10）的水平，并与20名健康对照者和16例康复的肺结核患者进行比较。结果 康复者对EIS的细胞免疫最为强烈，其外周血淋巴细胞的细胞增殖强度显著高于健康对照者和活动性肺结核患者（P均〈0．01）。活动性肺结核患者外周血淋巴细胞在受到EIS刺激时分泌的IFN-γ显著低于康复者（P〈0．05）。EIS抗原刺激主要诱导细胞分泌Th2型细胞因子IL-10。结论 活动性肺结核患者对EIS抗原的细胞免疫水平低下，经抗结核治疗康复后，细胞免疫维持在较高水平。EIS抗原诱导Th1／Th2免疫失衡可能是EIS参与结核发病的机制之一。     

紫虹消毒剂的实验室杀菌作用和稳定性试验

目的 在实验室中观察紫虹消毒剂不同浓度水溶液对金黄色葡萄球菌，大肠埃杀菌、枯草杆菌黑色变种芽胞、乙型肝炎病毒杀灭作用时间和紫虹水溶液在不同温度时间存放的残留浓度。方法 在20－22℃以（1000－125）mg/L分别观察对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌黑色变种芽孢、乙型肝炎表面抗原的杀灭时间，并利用经 典恒温加速法和初匀速法了解在不同温度下溶液存放时间的浓度稳定性。结果 紫虹消毒剂溶液125mg/L 10 min对金黄色葡萄球菌、大肠埃杀菌的杀灭率100％；250mg/L对枯草杆菌30min杀灭率100％；1000mg/L 20min对乙型肝炎表面抗原杀灭率1000％；紫虹消毒剂溶液在0℃保存247h、10℃保存89h、20℃保存33h、30℃保存13h，其溶液仍可达90％。结论 紫虹消毒剂是三氰异氯尿酸和苯酚（石碳酸）等复合消毒液，在实验中其杀菌效果随溶液浓度增加和时间延长而增强，溶液稳定性随温度升高和时间延长而下降。     

肺结核患者血清白介素18的定量检测

目的 探讨白介素18（Interleulin-18,IL-18）在抗结核菌感染中的作用。方法 采用酶免疫技术（ELISA）检测40例肺结核患和20例健康人群血清中IL－18和r干扰素（Interferon-r,IFN-r）。结果 肺结核患血清中IL－18和IFN－r水平均显地健康对照。IL－18水平和IFN－r水平呈明显的相关性。结论 IL－18可能在肺结核菌感染免疫中发挥重要作用。