褪黑素通过激活自噬抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的生长和转移

目的 探讨褪黑素对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和转移的作用及其机制。方法 将MDA-MB-231细胞设置对照组以及1、3、5 mmol/L褪黑素处理组,Western blot检测自噬对细胞生长、转移的影响时,添加3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、3-MA联合褪黑素组。使用不同浓度褪黑素处理MDA-MB-231乳腺癌细胞24、48 h,并加入0.1%无水乙醇的细胞作为对照,CCK-8法检测细胞增殖活性确定最佳处理浓度和时间,筛选出3 mmol/L褪黑素用于后续实验。集落形成实验及划痕实验检测不同浓度褪黑素对乳腺癌细胞集落形成能力和迁移能力的影响;流式细胞术、免疫荧光检测3 mmol/L褪黑素对MDA-MB-231细胞凋亡率和自噬蛋白阳性着色情况;Western blot检测自噬相关蛋白LC3、P62、Beclin1,凋亡相关蛋白Bcl2、Bax,上皮-间质转化（EMT）相关蛋白E-cadherin、Snai1的水平。结果 CCK-8结果显示,与对照组相比,褪黑素呈浓度及时间依赖性抑制乳腺癌细胞的增殖（P<0.05）;集落形成实验显示,3个浓度褪黑素处理组的集落数低于对照组;褪黑素作用24 h后明显抑制乳腺癌细胞划痕愈合速度（P<0.01）,并诱导细胞凋亡率增加（P<0.01）;且与对照组相比,褪黑素组的促凋亡蛋白Bax表达增加（P<0.05）,抗凋亡蛋白Bcl2表达下调（P<0.05）,Bcl2/Bax的比值逐渐减低（P<0.01）;转录因子Snail减少,上皮细胞标志蛋白E-cadherin增加;单独使用褪黑素能够诱导细胞内自噬标记蛋白LC3-ΙΙ/LC3-Ι、Beclin1表达增加,P62表达减少（P<0.05）以及Beclin1蛋白阳性着色增强,P62蛋白阳性着色减弱;3-MA+褪黑素组中自噬相关蛋白Beclin1（P<0.001）、LC3-ΙΙ/LC3-（Ι P<0.05）以及凋亡蛋白Bax（P<0.01）、上皮细胞标志蛋白E-cadherin（P<0.001）明显低于褪黑素组,抗凋亡蛋白Bcl2（P<0.05）、转录因子Snail以及Bcl2/Bax的比值（P<0.01）高于褪黑素组。 结论 褪黑素可通过诱导MDA-MB-231乳腺癌细胞发生自噬,抑制乳腺癌细胞增殖、转移并促进其凋亡,而减少自噬,可减弱褪黑素对乳腺癌细胞生长和转移的抑制作用。     

天冬总皂苷对D-半乳糖致衰老大鼠肾脏p53基因表达的影响

目的研究天冬总皂苷对大鼠衰老肾脏p53基因表达的影响,探讨其治疗衰老肾脏的作用及其机制。方法通过皮下注射D-半乳糖建立衰老大鼠模型的同时,以天冬总皂苷灌胃进行治疗,3个月后处死各组大鼠,应用全自动分析仪检测血清中肌酐(Cr)、尿素(UREA)含量;采用光镜观察各组大鼠肾脏的肾小球硬化程度的改变;采用硫代巴比妥酸和黄嘌呤氧化法分别检测血清和肾脏中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;应用Real-time PCR检测各组肾脏组织p53 mRNA的表达。结果与模型组相比,治疗组血清中Cr及UREA的含量均显著降低(P<0.05);治疗组肾小球硬化程度均明显改善;随着治疗组剂量的增加,血清与肾脏中SOD的活性均明显增高、MDA含量也显著降低(P<0.05);治疗组能够降低大鼠肾脏组织p53 mRNA的表达,且随着天冬总皂苷剂量的增加,其降低作用有增强趋势(P<0.01)。结论天冬总皂苷降低肾脏组织中p53基因的表达可能是其改善衰老肾脏的机制之一。     

人外周血内皮祖细胞培养方法的建立

背景：成人外周血来源丰富,但内皮祖细胞含量较少,为使其能够更好的应用于组织工程及细胞治疗,有必要建立外周血内皮祖细胞成熟、稳定的体外扩增体系。 目的：建立稳定的人外周血分离、培养和体外扩增血管内皮祖细胞的方法。 方法：应用密度梯度离心法,获取外周血单个核细胞,将分选后细胞接种于预先包埋了人纤维连接蛋白的培养板上,加入内皮祖细胞专用培养基中培养3 d后,洗掉非贴壁细胞,培养至第6天,收集贴壁细胞,应用倒置显微镜和苏木精-伊红染色进行细胞形态学观察;采用MTT法和细胞计数测定第1,3代细胞生长曲线;应用流式细胞仪测定祖细胞和内皮细胞系标志,对培养的细胞进行鉴定。 结果与结论：细胞生长曲线测定表明接种后第3天细胞进入指数增生期,至第6天进入平台期,随着传代次数的增加,细胞增殖速度变慢,同时表达干细胞表面标志CD34、CD133和内皮细胞表面标志血管性血友病因子、血管内皮生长因子受体2。证明人外周血可以分离培养内皮祖细胞。     

橙皮苷与芦丁体外抗高密度脂蛋白氧化修饰的作用

目的:探讨橙皮苷、芦丁体外抗高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)氧化的作用.方法:采用一次性密度梯度超速离心方法分离血清HDL,Cu2 诱导HDL氧化,检测反应体系中的丙二醛(malondialdehyde,MDA),观察橙皮苷、芦丁对HDL氧化的抑制作用.结果:橙皮苷、芦丁对Cu2 诱导的HDL氧化有明显的抑制作用,且呈剂量依赖关系.结论:橙皮苷、芦丁体外抗HDL的氧化作用是它们抗动脉粥样硬化的机制之一.     

木瓜蛋白酶溶栓效果观察

0 引言 精制木瓜蛋白酶(papain)是含木瓜蛋白酶、木瓜肽酶A、木瓜凝乳蛋白酶A和B的多酶复合体[1],应用广泛.本文就papain在体内是否具有纤溶酶原激活作用进行了探讨.     

金雀异黄素对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的:研究金雀异黄素对人脐静脉内皮细胞(hU-VEC)生长的影响及机制。方法:培养并鉴定hUVEC;用不同浓度金雀异黄素(0·1、1、10和50μmol)对hUVEC作用24h;先用MTT比色法观察细胞存活率、流式细胞术检测细胞DNA含量及细胞周期观察其对hUVEC生长的影响,流式细胞术检测凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2的表达,探讨金雀异黄素诱导hU-VEC增殖的可能机制。结果:金雀异黄素能诱导hUVEC的增殖(P<0·05或P<0·01),其效应随浓度的增加而增强;细胞周期显示S期细胞明显增加;金雀异黄素促进Bcl-2的表达,抑制Fas的表达。结论:金雀异黄素能诱导hUVEC增殖,其机制可能与上调Bcl-2及下调Fas的表达有关。     

建立皮下注射d-半乳糖大鼠白内障动物模型

目的　探讨建立皮下注射d 半乳糖大鼠白内障模型的方法。方法　 3w龄Wistar大鼠 5 0只 ,随机分为 3组 :正常对照组 (n =10 )、皮下注射半乳糖组 (n =2 0 )及腹腔注射半乳糖组 (n =2 0 ) ,实验组均注射 5 0 %d -半乳糖(15g·kg-1·d-1) ,连续 30d。用裂隙灯检查并进行晶体摄影。结果　 30d后 ,实验组动物均形成核性或核性以上的白内障 ,但皮下注射组动物的存活率为 90 % ,而腹腔注射组存活率仅为 6 0 %。结论　皮下注射d 半乳糖是一种简单、经济而死亡率低的白内障模型复制方法。     

贵州产天冬醇提液体外氧自由基清除作用的研究

目的:研究贵州产天冬醇提液体外清除羟自由基(·OH)与超氧阴离子自由基(02-)的作用.方法:选取贵州产天冬为研究对象,采用乙醇回流提取法提取其醇提液;采用连苯三酚法在碱性溶液中自氧化反应产生超氧阴离子自由基(02-),采用邻二氮菲-Fe(Ⅱ)/H202体系产生羟自由基(·0H),研究天冬醇提液体外清除自由基的作用;结果:贵州产天冬醇提液对02-具有显著的清除及抑制作用(P＜0.05),而且随着药物浓度的增加,其清除及抑制作用也随之增加;贵州产天冬醇提液对·OH也有一定的清除作用(P＜0.05),其清除率为(35.1±0.16)％.结论:贵州产天冬醇提液对02-具有显著的清除及抑制作用,对·OH也有一定的清除作用.     

天冬总皂苷对衰老大鼠脾脏Bcl-2基因表达水平的影响

目的研究天冬总皂苷对衰老大鼠脾脏Bcl-2基因表达的影响,探讨其延缓衰老大鼠脾脏的作用及其机制。方法通过皮下注射D-半乳糖建立衰老大鼠模型的同时,以天冬总皂苷灌胃进行治疗,3个月后处死各组大鼠,检测各组大鼠脾脏指数变化;采用光镜观察各组大鼠脾脏形态学改变;应用MTT法检测各组大鼠脾脏淋巴细胞对ConA刺激后的增殖能力的变化;应用Real-time PCR检测各组脾脏组织Bcl-2 mRNA的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠脾脏指数、脾淋巴细胞对ConA刺激的增殖能力明显下降,脾脏发生明显病理损伤。天冬总皂苷给药组能使上述指标明显逆转(P<0.05),并且能够提高大鼠脾脏组织Bcl-2 mRNA的表达(P<0.01)。结论天冬总皂苷升高Bcl-2 mRNA的表达可能是其改善衰老大鼠脾脏的机制之一。     

单核细胞趋化蛋白1诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的分子机制

目的研究单核细胞趋化蛋白1诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的分子机制。方法培养并鉴定人脐静脉内皮细胞,用不同浓度单核细胞趋化蛋白1(0.1、1.0、10和100μg/L)分别作用人脐静脉内皮细胞24h、48h;用流式细胞技术及蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2和Bax的表达。结果胶原酶灌注