贵州产天冬总皂苷提取物对人早幼粒白血病细胞株HL-60的影响

目的： 提取贵州产天冬中总皂苷（ASP）并研究其对人早幼粒白血病细胞株HL-60增殖和凋亡作用。 方法： 选取贵州产天冬为研究对象,提取其总皂苷成分;以不同浓度梯度的天冬总皂苷提取物作用于人早幼粒白血病细胞株HL-60,采用MTT法检测细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;应用实时定量（Real-time） PCR检测各组HL-60细胞中B细胞淋巴瘤/白血病2（Bcl-2） mRNA的表达。 结果： 随着天冬总皂苷浓度的升高,其对HL-60细胞增殖的抑制作用明显增强,呈现剂量依赖趋势;与对照组相比,天冬总皂苷组使HL-60细胞凋亡率明显增加;并且能够使HL-60细胞内的Bcl-2 mRNA表达下降。 结论： 贵州产天冬总皂苷提取物下调Bcl-2 mRNA的表达、诱导人早幼粒白血病细胞株HL-60凋亡,可能是其治疗白血病的机制之一。     

天冬总皂苷对衰老肾脏抗氧化作用的研究

目的研究天冬总皂苷对衰老大鼠肾脏的抗氧化作用,探讨其治疗衰老肾脏的作用及其机制。方法以D-半乳糖所致的衰老肾脏模型为研究对象,灌胃服用天冬总皂苷进行治疗3,个月后处死各组大鼠,应用全自动分析仪检测血清中肌酐(Cr)、尿素(UREA)含量;采用光镜和BI2000图像分析系统对大鼠肾脏各项形态学指标进行定量分析;采用硫代巴比妥酸和黄嘌呤氧化法分别检测血清和肾脏中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与模型组相比,治疗组血清中Cr及UREA的含量均显著降低(P<0.05);治疗组肾小球形态、肾小球硬化率均与模型组不同(P<0.05);治疗组血清与肾脏中SOD的活性均明显增高、MDA含量也显著降低(P<0.05)。结论天冬总皂苷能够减轻衰老肾脏的氧化损伤,可能是其改善衰老肾脏的机制之一。     

从内质网应激途径探讨竹节参总皂苷对自然衰老大鼠脑组织的保护作用

目的:研究竹节参总皂苷对自然衰老大鼠脑组织的保护作用及其机制。方法:将40只18月龄雄性SD大鼠随机分为4组,即自然衰老组及竹节参总皂苷低、中、高剂量组,以6月龄大鼠作为青年对照组,每组10只。竹节参总皂苷低、中、高剂量组大鼠从18月龄开始分别灌胃给予10、30、60 mg/kg的竹节参总皂苷,青年对照组和自然衰老组大鼠灌胃等体积生理盐水。灌胃持续6个月,每周连续灌胃6 d,停药1 d。HE染色观察大脑皮层的形态,TUNEL法检测各组大鼠大脑皮层中细胞凋亡情况,Western blot检测大脑皮层中GRP78、p-JNK、JNK、CHOP、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:与自然衰老组比较,竹节参总皂苷各剂量组大脑皮层组织形态结构有所改善,且细胞凋亡数量减少;竹节参总皂苷还能显著升高自然衰老组大脑皮层中Bcl-2蛋白表达,抑制GRP78、CHOP、Bax和p-JNK蛋白表达。结论:竹节参总皂苷对自然衰老大鼠脑组织具有保护作用,其机制可能与抑制内质网应激,减少脑细胞凋亡有关。     

“双固一通”电针治疗对老年阳虚大鼠淋巴细胞凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨"双固一通"电针治疗对老年阳虚模型大鼠淋巴细胞凋亡相关基因Fas mRNA、BaxmRNA、Bcl-2mRNA表达的影响。方法:选用5月龄SD雌性大鼠30只,随机分为正常对照组、老年阳虚模型组、"双固一通"电针组,除正常对照组外,其余2组大鼠皮下注射D-半乳糖40d后再肌肉注射氢化可的松7d制作老年阳虚大鼠模型。"双固一通"电针组取"关元"后三里"百会",每周治疗6次,共4周。采用实时荧光定量RT-PCR技术检测各组大鼠脾脏促凋亡基因Fas mRNA、Bax mRNA以及抗凋亡基因Bcl-2mRNA的表达。结果:老年阳虚模型大鼠促凋亡基因Fas mRNA、Bax mRNA表达水平明显高于正常对照组,抗凋亡基因Bcl-2mRNA表达下调(均P<0.01);与老年阳虚模型组相比,"双固一通"电针组大鼠促凋亡基因Fas mRNA、Bax mRNA表达明显下调,抗凋亡基因Bcl-2mRNA表达上调(P<0.05,P<0.01)。结论:"双固一通"电针法能有效下调老年阳虚模型大鼠促凋亡基因Fas mRNA、Bax mRNA表达,上调抗凋亡基因Bcl-2mRNA的表达,这可能是"双固一通"电针法对老年阳虚大鼠淋巴细胞凋亡相关基因表达的调控模式。     

人参皂苷Rb1对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖及凋亡的影响

目的研究人参皂苷Rb1对小鼠T淋巴细胞体外活化及增殖的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨。方法分离制备小鼠淋巴结细胞悬液;以双色荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测在刀豆蛋白A(ConA)的刺激下,人参皂苷Rb1对早期活化标志CD3/CD69和调节T淋巴细胞标志CD4/CD25表达的影响;用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色结合流式细胞术和MTT法检测在ConA的刺激下,人参皂苷Rb1对T淋巴细胞增殖的影响;DIOC/PI双染技术检测在H2O2作用下,人参皂苷Rb1对淋巴细胞凋亡进程的影响。结果终浓度为5、10、20μmol/L的人参皂苷Rb1对ConA刺激的调节T淋巴细胞CD4+/CD25+的表达具有促进作用,而CD3+/CD69+的表达明显下调(P<0.01);对ConA刺激的T淋巴细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性;人参皂苷Rb1显著抑制H2O2诱导的淋巴细胞的凋亡进程(P<0.05)。结论人参皂苷Rb1对小鼠淋巴细胞的体外活化及增殖均具有明显的抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。     

赤雹根总皂苷对类风湿性关节大鼠NF-κB p65和IL-6表达的影响

目的:研究赤雹根总皂苷(TSTR)对佐剂性关节炎(AA)模型大鼠核转录因子-κB p65(NF-κB p65)和炎性细胞因子白细胞介素6(IL-6)活性的影响,探讨赤雹根总皂苷治疗类风湿关节炎的作用机制。方法:雄性SD大鼠随机取10只作为正常对照组,其余大鼠用完全弗氏佐剂诱导佐剂性关节炎。将造模成功的大鼠随机分为赤雹根总皂苷40,80,160 mg/kg,雷公藤多苷12 mg/kg,模型对照组,每组10只。各给药组均灌胃给予相应药物,连续21天。计算大鼠足肿胀度和关节炎指数;ELISA法检测各组大鼠血清IL-6的含量;免疫组化法测定大鼠足跖组织NF-κB p65蛋白及足跖组织和脾脏IL-6蛋白表达水平;Western blot法检测大鼠足跖组织中NF-κB p65蛋白表达水平;RT-PCR法测定大鼠足跖部NF-κB p65mRNA、IL-6 mRNA的表达水平。结果:赤雹根总皂苷各剂量组大鼠组肿胀度和关节炎指数均显著低于模型对照组;血清中IL-6含量和IL-6蛋白表达水平及IL-6 mRNA的表达水平均低于模型对照组;足跖组织中NF-κB p65蛋白表达水平和IL-6 mRNA的表达水平均低于模型对照组。结论:抑制NF-κB和IL-6的表达是赤雹根总皂苷治疗类风湿性关节炎的作用机制之一。     

补肾方对自然衰老大鼠海马CA1区凋亡相关基因Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响

目的:从自然衰老大鼠海马神经元凋亡角度探索补肾方的作用机制。方法:以自然衰老SD雄性大鼠(24月龄)为肾虚衰老模型,大鼠随机分老年组(模型)、左归组和右归组,另设青年组,共四组。大鼠自20月龄始,左归组和右归组分别给予左、右归丸,均按相当于生药7.5g/kg(成人临床用量的15倍)自由饮用稀释药液,每周停药2天,连续4个月;原位杂交检测海马区神经元Bax、Bcl-2 mRNA表达。结果:与青年组比较,老年组大鼠海马CA1区Bcl-2基因mRNA表达水平显著下降(P<0.05),Bax基因mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与老年组比较,左归组和右归组大鼠海马CA1区Bax、Bcl-2基因mRNA表达水平均有显著变化(P<0.05)。结论:自然衰老大鼠的海马CA1区神经细胞凋亡相关基因表达异常,补肾方可通过调节海马CA1区神经细胞Bax、Bcl-2基因mRNA的表达,降低海马神经细胞凋亡,进而改善海马功能、延缓衰老。     

竹节参总皂苷通过调节TGF-β1/Smad3通路改善衰老大鼠心肌纤维化的作用研究

研究竹节参总皂苷(saponins extracted from Panax japonicas,SPJ)对衰老大鼠心肌纤维化的改善作用及作用机制。将18月龄SD雄性大鼠随机分为衰老模型组、SPJ低剂量组、SPJ高剂量组,每组10只;衰老模型组,SPJ低、高剂量组分别灌胃给予等量的生理盐水,SPJ 10,60 mg·kg^-1·d^-1,每周6次,持续灌胃6个月至24月龄;另取10只6月龄大鼠作为青年对照组。处死动物后,采用HE染色观察各组大鼠心肌形态;Masoon染色观察各组大鼠胶原沉积的变化;RT-PCR法检测各组大鼠心脏组织中胶原相关蛋白COL1α2,COL3α1,肌成纤维细胞标记物α-SMA和基质金属蛋白酶MMP9,MMP2的mRNA表达水平;Western blot法检测各组大鼠心脏组织中TGF-β1,p-Smad3,IL-1β,TNF-α的蛋白表达。SPJ能有效改善衰老大鼠心肌纤维紊乱程度,减少炎性细胞浸润,降低衰老大鼠胶原蛋白沉积;能明显下调衰老心脏组织中COL1α2,COL3α1,α-SMA和MMP9,MMP2的mRNA表达水平;同时,能有效抑制衰老心脏中TGF-β1,p-Smad3,TNF-α,IL-1β蛋白的表达量。SPJ能有效改善衰老大鼠心肌纤维化程度,其作用机制与抑制衰老心脏中TGF-β1,p-Smad3蛋白表达,降低心肌炎症反应有关。     

三七总皂苷对脑出血大鼠细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨三七总皂苷对脑出血大鼠细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达影响。方法将大鼠随机分为假手术组、脑出血组、三七总皂苷治疗组,用大鼠自体血脑内注入法建立脑出血动物模型。造模后72 h采用免疫组化法观察大鼠额顶部皮质Bcl-2和Bax蛋白表达,TUNEL法检测神经细胞凋亡。结果与假手术组比较,脑出血组凋亡细胞明显增加,Bcl-2和Bax表达增加;与脑出血组比较,三七总皂苷治疗组均显著凋亡细胞明显减少,增加Bcl-2表达、减少Bax表达。结论三七总皂苷对脑出血大鼠具有保护作用,其机制可能与通过增加Bcl-2表达,减少Bax表达,及抗凋亡有关。     

穿山龙总皂苷对胶原诱导关节炎大鼠滑膜血管内皮生长因子、血管生成素-2及受体Tie-2表达的影响

 目的 观察穿山龙总皂苷对胶原诱导关节炎大鼠滑膜血管内皮生长因子、血管生成素2及其受体Tie-2的影响,探讨穿山龙总皂苷治疗类风湿关节炎的抗血管新生机制。方法 建立胶原诱导关节炎大鼠模型,动物随机分为空白对照组、胶原诱导关节炎模型组、穿山龙总皂苷组、雷公藤多苷组（作为阳性对照组）和薯蓣皂苷元组,采用实时荧光定量PCR方法检测大鼠膝关节滑膜血管内皮生长因子mRNA的表达情况,采用免疫组织化学方法检测大鼠膝关节滑膜血管生成素-2及其受体Tie-2蛋白的表达。结果 胶原诱导关节炎模型组大鼠滑膜血管内皮生长因子mRNA、血管生成素-2及Tie-2蛋白表达明显高于空白对照组(P<0.01),经穿山龙总皂苷、雷公藤和薯蓣皂苷元治疗后血管内皮生长因子mRNA和血管生成素-2表达均低于胶原诱导关节炎模型组(P<0.01);而Tie-2表达呈降低趋势,差异无统计学意义。穿山龙总皂苷组血管内皮生长因子mRNA表达比雷公藤组和薯蓣皂苷元组血管内皮生长因子mRNA明显降低(P<0.01)。结论 穿山龙总皂苷可能通过降低滑膜血管内皮生长因子mRNA、血管生成素-2及Tie-2的表达,抑制滑膜血管新生,从而对类风湿关节炎发挥治疗作用。     

三七总皂苷与淫羊藿总黄酮联合对自然衰老大鼠睾丸生殖功能衰退的影响

目的观察三七总皂苷(PNS)与淫羊藿总黄酮(TFE)联合对自然衰老大鼠睾丸生殖功能衰退的影响,探讨其作用机制。方法将30只18月龄SD大鼠随机分为自然衰老组和PNS+TFE低、高剂量组,每组10只。另取10只2月龄大鼠为青年对照组。PNS+TFE低、高剂量组大鼠分别给予10 mg/kg PNS、TFE和20 mg/kg PNS、TFE灌胃,自然衰老组和青年对照组大鼠给予生理盐水灌胃。每周连续给药6 d,共4个月。末次给药后24 h,大鼠称重后处死,取睾丸组织,称取质量,计算睾丸指数。HE染色观察睾丸组织形态,TUNEL法检测大鼠生殖细胞凋亡,Western blot检测睾丸组织抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax和DNA损伤蛋白γ-H2AX的表达。结果与自然衰老组比较,PNS+TFE低、高剂量组衰老大鼠睾丸质量和睾丸指数均明显升高,生精小管组织形态明显改善,睾丸生精细胞凋亡数量明显减少,睾丸组织Bcl-2蛋白表达显著上调,Bax和γ-H2AX蛋白表达显著下调,Bax/Bcl-2比值降低。结论 PNS与TFE联合给药可延缓自然衰老大鼠生殖功能衰退,其机制可能与抑制睾丸生殖细胞的凋亡和DNA损伤有关。     

艾灸通过核转录因子κB信号通路调控海马凋亡相关蛋白表达改善糖尿病认知功能减退大鼠学习记忆能力

目的:观察艾灸对糖尿病认知减退大鼠海马凋亡相关蛋白、核转录因子κB(NF-κB)的影响,探讨艾灸改善学习记忆的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组和艾灸组,每组10只。以高脂高糖饲料联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病认知功能减退大鼠模型。艾灸组艾灸“神庭”“百会”及“大椎”,每次20 min,每周6次,治疗4周。检测各组大鼠随机血糖,水迷宫实验测定各组大鼠学习记忆能力,Western blot及实时荧光定量PCR法检测各组大鼠海马B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和NF-κB p65蛋白及mRNA相对表达量。结果:治疗后,模型组大鼠随机血糖值较正常组明显升高(P<0.001),艾灸组大鼠随机血糖值较模型组明显降低(P<0.05)。模型组大鼠逃避潜伏期较正常组明显延长(P<0.01),艾灸组大鼠逃避潜伏期较模型组明显缩短(P<0.01)。模型组大鼠海马Bax、Caspase-3、NF-κB p65蛋白及mRNA表达较正常组明显升高(P<0.001),Bcl-2蛋白及mRN...     

针灸对CIA 大鼠的脾脏单个核细胞IL-17、IL-12 表达的影响

目的：探讨针刺、艾灸对胶原诱导型关节炎大鼠（CIA）的脾淋巴细胞增殖能力及脾脏单个核细胞IL-17、IL-12等表达的影响。方法：将Wister大鼠随机分成正常组、模型组、艾灸组、针刺组,每组8只。采用免疫学方法制备胶原诱导型关节炎模型大鼠。艾灸组、针刺组于初次免疫后第12天,选取双侧阳陵泉、昆仑穴分别施温和灸、针刺干预。治疗结束后,观察各组大鼠四肢关节炎症评分;应用MTT比色法观察针灸对脾淋巴细胞增殖能力的影响;采用实时定量PCR技术检测脾脏单个核细胞IL-17、IL-12、TNF-α、IL-6、和IFN-γ mRNA表达的变化。结果：与正常组比较,模型组大鼠关节炎症评分明显增加（P<0.01）;与模型组比较,艾灸组、针刺组大鼠关节炎症评分均明显低于模型组（P<0.01）。与正常组比较,模型组脾淋巴细胞的增殖能力增高（P<0.01）,脾脏单个核细胞IL-17、IL-12、TNF-α、IL-6、IFN-γ mRNA表达显著增加（P<0.01）;与模型组比较,艾灸组脾淋巴细胞的增殖能力下降（P<0.01）,针刺和艾灸均能显著降低脾脏单个核细胞IL-12、IL-17、TNF-α、IL-6、IFN-γ mRNA的表达（P<0.01）;与艾灸组比较,针刺组在降低脾脏单个核细胞的IFN-γ mRNA的表达上优于艾灸组（P<0.05）。结论：针刺和艾灸治疗对CIA大鼠四肢关节炎症均具有改善作用,可能与艾灸能有效降低脾淋巴细胞增殖能力,针刺和艾灸均能调节脾单个核细胞异常变化的炎症细胞因子mRNA表达水平有关。     

竹节参总皂苷通过调节AMPK/Sirt1/NF-κB通路抑制衰老大鼠心肌细胞凋亡的作用研究

研究竹节参总皂苷(saponins extracted from Panax japonicus,SPJ)对自然衰老大鼠心肌细胞凋亡的调节作用及其作用机制。将SD雄性大鼠随机分为青年对照组、自然衰老组、SPJ低剂量组、SPJ高剂量组,每组10只。自然衰老组、SPJ低、高剂量组从18月龄开始分别灌胃给予生理盐水、SPJ 10,60 mg·kg~(-1)·d-1,每周灌胃6 d,持续6个月至24月龄处理动物。HE染色观察各组大鼠心肌形态;Tunel法检测心肌细胞凋亡;Western blot检测各组大鼠心肌组织中Bcl-2,Bax,IL~(-1)β,TNF-α,AMPK,p-AMPK,Sirt1,Ac-NF-κB p65蛋白表达。SPJ能有效改善自然衰老大鼠心肌纤维的排列紊乱,减少炎性细胞浸润,抑制心肌细胞凋亡。同时,SPJ能明显抑制自然衰老过程中心脏组织Bax,IL~(-1)β,TNF-α,Ac-NF-κB p65的表达,促进Bcl-2,Bcl-2/Bax,p-AMPK/AMPK,Sirt1蛋白表达。SPJ可有效抑制自然衰老大鼠心肌细胞凋亡,其作用机制可能与调节AMPK/Sirt1/NF-κB通路介导的炎症反应有关。     

黄芪总皂苷对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的研究黄芪总皂苷(ASTs)对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用及相关调控蛋白Hsp-70、Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响。方法 (1)常规方法培养大鼠乳鼠心肌细胞,分为正常对照组、模型组及黄芪总皂苷4个剂量组(20,40,80,100 mg.L-1),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察黄芪总皂苷不同浓度对H2O2损伤心肌细胞存活率的影响;(2)乳鼠心肌细胞培养后分为正常对照组、模型组、黄芪总皂苷(100 mg.L-1)预处理组,细胞免疫组化法和免疫印迹法(Western-blotting)分别检测Bcl-2、Bax、Hsp-70、Caspase-3的表达。结果 (1)各黄芪总皂苷各组与模型组比较,细胞存活率明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),且与黄芪总皂苷呈剂量依赖性;(2)与正常对照组比较,模型组Bcl-2、Hsp-70有少量表达,Bax、Caspase-3表达明显增多,黄芪总皂苷(100 mg.L-1)组与模型组比较,明显促进Bcl-2、Hsp-70的表达,降低Bax、Caspase-3的表达。结论黄芪总皂苷对心肌细胞具有良好的抗氧化保护作用,且呈剂量依赖性,其作用机制可能是通过上调Bcl-2、Hsp-70及下调Bax、Caspase-3的表达来实现。     

头针对急性脑梗死大鼠不同时间窗Bax与Bcl-2影响的研究

目的:观察头针电刺激对不同时间点脑梗死大鼠Bax与Bcl-2 mRNA的变化,探讨其对脑梗死可能作用机制。方法:采用线栓法制作大鼠局灶性脑梗死模型。将180只健康Wistar雌性大鼠,随机分为3组,头针电刺激组、模型对照组和假手术组。各组又依据脑梗死后治疗时间点不同分为4个亚组,即1天组、3天组、7天组与14天组。3组大鼠造模结束24 h起,给予头针电刺激组大鼠针刺百会穴与大椎穴,并进行电刺激治疗,1次/日,30 min/次,余2组在每天相应时间固定大鼠于针刺台,不予任何处置。疗程治疗结束后,断头取脑。运用RT-PCR检测梗死脑组织Bax与Bcl-2 mRNA。3组大鼠在造模结束清醒后、每日治疗前后均要进行神经功能缺损程度评分,采用Zea-longa 5级评分标准。结果:头针电刺激组中7天与14天的亚组大鼠Zea-longa 5级评分明显低于同组1天与3天的亚组(P0.05),14天的Zea-longa 5级评分与模型组比较,具有显著性差异(P0.05);头针电刺激组经RTPCR检测后,Bax mRNA的表达逐渐降低,Bcl-2逐渐增加,且14天的亚组与模型组14天比较,有显著性差异(P0.05),与假手术组14天比较则无显著性差异(P0.05)。结论:头针电刺激能明显降低脑梗死大鼠的神经功能缺损程度评分,改善大鼠运动功能;头针电刺激能降低Bax mRNA的表达,提高Bcl-2 mRNA的表达,从而抑制缺血区细胞凋亡,保护脑组织,促进肢体康复的功效,其中以头针电刺激14天疗效最佳。     

人参皂苷对缺氧大鼠的保护作用及其机制

目的:研究人参皂苷对缺氧大鼠的保护作用及其机制。方法:首先采用常压密闭缺氧模型考察了人参皂苷对大鼠存活时间的影响,确定最佳给药剂量。再将40只雄性Wistar大鼠随机分为缺氧模型组和人参皂苷组。每组按照不同缺氧时间点再分为2个亚组,各亚组10只大鼠,分别观察各组大鼠缺氧前后脑和心脏组织的病理学变化情况,并采用RT-PCR检测HIF-1α、EPO、Caspase-3 mRNA的表达情况。结果:通过观察HE染色病理切片发现缺氧6 h后模型组大鼠脑和心脏组织均出现严重的病理损伤,而人参皂苷组的缺氧损伤情况得到明显减轻。基因检测结果表明,在缺氧环境下,缺氧模型组大鼠脑和心脏组织HIF-1αmRNA和Caspase-3 mRNA表达水平升高,人参皂苷组较缺氧模型组显著降低(P<0.01);缺氧模型组和人参皂苷组大鼠脑组织EPO mRNA表达虽有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05),心脏组织EPO mRNA未表达。结论:人参皂苷可改善缺氧大鼠脑和心脏组织的损伤,其机制可能与影响HIF-1α、EPO、Caspase-3 mRNA的表达、调节大鼠组织内部氧平衡、促进红细胞生成、抗凋亡有关。     

丹皮酚联合三七总皂苷对AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞增殖及TGF-β/Smads信号通路的影响

目的探讨丹皮酚联合三七总皂苷应用对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导新生大鼠的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖及TGF-β/Smads信号通路的影响。方法采用胰酶消化法分离培养的CFs随机分为6组:正常对照组,模型组,三七总皂苷组,丹皮酚组,丹皮酚与三七总皂苷联合用药大、小剂量组。采用MTT比色法测定各组培养液中CFs增殖情况,免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平,RTPCR法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,Tgfb1)的mRNA表达水平,Western blot法检测TGF-β1、磷酸化的Smad2/3(p-Smad2/3)的蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠CFs增殖明显增高,Tgfb1的mRNA表达显著增加,α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达显著增加;与模型组比较,丹皮酚组、三七总皂苷组、联合用药的大剂量和小剂量组均可抑制由AngⅡ诱导的CFs的增殖,Tgfb1的mRNA表达显著减少,α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达显著减少;与丹皮酚组、三七总皂苷组比较,联合用药大、小剂量组在抑制CFs增殖的作用上显著增强,抑制Tgfb1的mRNA表达效果显著增强,抑制α-SMA及TGF-β1、p-Smad2/3的蛋白表达效果显著增强;与联合用药小剂量组比较,联合用药大剂量组对以上指标的抑制效果更佳,显示一定的剂量依赖性。结论丹皮酚与三七总皂苷联合应用对抑制CFs增殖,呈现明显的协同作用。其作用机制与抑制TGF-β/Smads信号通路的传导有关。     

清心开窍方皂苷对AD大鼠大脑皮层及海马区Bax、Bcl-2、Aβ及βAPP表达的影响

目的 探讨清心开窍方及其皂苷对阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)大鼠大脑皮层与海马区Bax蛋白、Bcl-2 蛋白、β-淀粉样蛋白(β-amyloid, Aβ)及淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,βAPP)表达的影响。方法 选取32只SPF级SD大鼠,将Aβ25-35注入32只大鼠双侧杏仁核制作AD模型,造模后随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组（盐酸多奈哌齐片,1.67 mg/kg）、清心开窍方组（清心开窍方煎液,12.67 mL/kg）及皂苷组（皂苷,6.30 mg/kg）,每组8只,另选取8只大鼠作为正常组。正常组、模型组给予等量双蒸水灌胃,各组每天干预1次,连续2周。给药结束后进行Morris水迷宫测试,记录各组大鼠水迷宫测试期间第1～5天逃避潜伏期及跨越平台次数。免疫组织化学法检测各组大鼠大脑皮层与海马区Bax、Bcl-2、Aβ及βAPP表达。结果 与模型组比较,各用药组大鼠第3～5天逃避潜伏期均缩短,皮层与海马区Bax、Aβ及βAPP表达降低,跨越平台次数增加,皮层Bcl-2表达升高,西药组、中药组海马Bcl-2表达升高,差异均有统计学意义(P<0.01, P<0.05)。与西药组比较,皂苷组βAPP均升高;中药组皮层及海马区Aβ均降低,海马区Bax表达降低,皮层Bcl-2表达升高;皂苷组第3～5天逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数减少,皮层及海马区Bcl-2表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05, P<0.01)。结论 清心开窍方能显著改善AD大鼠学习记忆和空间探索的能力,可能是通过降低大脑皮层与海马区Bax、Aβ、βAPP表达,升高Bcl-2表达而发挥作用。     

清心开窍方有效成分对AD大鼠脑组织凋亡基因Bax、Bcl-2 mRNA及GFAP mRNA表达的影响

目的:探讨清心开窍方有效成分对AD大鼠学习记忆能力及脑组织细胞凋亡基因Bax、Bcl-2 mRNA及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA表达的影响。方法:动物实验采用对照观察法。雄性SD大鼠56只,随机分为正常组、模型组、安理申组、清心开窍方组、皂苷组、多糖组和挥发油组,每组8只。采用双侧杏仁核注射Aβ25-35制造AD大鼠模型,造模后第2天起,分别灌胃给药安理申、清心开窍方水煎剂、皂苷、多糖、挥发油及双蒸水,2周后,观察大鼠水迷宫空间记忆能力,并通过RT-PCR研究脑组织Bax、Bcl-2 mRNA及GFAP mRNA的表达。结果:中药各组能明显改善AD大鼠学习记忆能力,大鼠大脑皮层、海马区Bax、GFAP mRNA表达水平降低,清心开窍方组、皂苷组皮质Bcl-2 mRNA表达水平升高,与模型组比较差异显著(P0.05,P0.01)。结论:清心开窍方能显著改善AD大鼠学习记忆的能力,可能是通过降低皮质、海马Bax mRNA及GFAP mRNA表达,升高Bcl-2 mRNA表达发挥作用。