裸鼠近红外肿瘤体内转移模型的建立

目的建立以近红外探针FA-OCC-QDs介导的裸鼠近红外体内肿瘤转移模型。方法通过化学修饰壳聚糖并包裹量子点制备具有近红外光学活性的肿瘤靶向探针FA-OCC-QDs,并结合荧光倒置显微镜、MTT法考察FA-OCC-QDs的体外肿瘤靶向性及细胞毒性,继而结合近红外成像裸鼠肿瘤转移模型、病理切片等技术研究该探针肿瘤体内靶向性。结果 FA-OCC-QDs无明显的细胞毒性（IC50=0.1368）,并且具有很好的肿瘤靶向性。本研究所建FA-OCC-QDs近红外检测技术可以准确检测到体内微小的肿瘤转移灶。结论 FA-OCC-QDs可以准确诊断肿瘤转移的发生并且FA-OCC-QDs近红外成像模型的灵敏度显著高于病理切片,本研究建立了一种简单、快速、准确、实时的裸鼠活体诊断肿瘤转移的模型,该模型可能为肿瘤转移的机制研究及抗肿瘤转移药物的研发提供有利的工具。     

竞争性内源RNA(ceRNAs)研究进展——RNA对话的新机制

microRNAs(miRNAs)是一类长度约为22 nt的非编码单链小RNA分子,通过其种子序列与靶基因的3’UTR互补并引导沉默复合体(RISC)降解或抑制靶基因的翻译,在转录后水平调控靶基因的表达。一个miRNA可调控多个靶基因,同一个靶基因也可以受多个miRNA调控。最新的研究发现mRNA之间可以通过miRNAs反应原件(MREs)达到相互调控的目的,这种新的调控机制被称作竞争性内源RNA(ceRNAs)假说,这种RNA之间新的对话机制的出现不仅在转录组学水平赋予了mRNAs、长链非编码RNA及假基因的转录产物新的生物学功能,扩大人类基因组中的功能性遗传信息,并且绘制了一个更庞大的miRNAs与mRNA相互调控的网络,为深入研究肿瘤等疾病的发病机制提供新的理论依据。本文从ceRNAs调控网络的成员、ceRNAs调控机制的作用基础、作用方式及ceRNAs与肿瘤等多方面对ceRNAs调控机制的研究进展进行综述。     

多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶优势抗原表位的鉴定

目的 根据预测多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase, LAP)抗原表位的结果,进一步鉴定其优势的T细胞和B细胞抗原表位。方法 构建重组质粒pCzn1-LAP后进行蛋白原核表达与纯化,将纯化的LAP蛋白进行动物免疫后,利用脾脏淋巴细胞增殖、流式细胞术、ELISA pot、ELISA等方法鉴定优势抗原表位。最后,利用SWISS-MODEL软件对LAP蛋白3D结构建模,PyMOL软件对鉴定的LAP优势抗原表位分布进行准确定位。结果 pCzn1-LAP菌株诱导表达的蛋白约为57 kDa,蛋白经过复性后成功纯化。流式细胞术鉴定的Th1型优势抗原表位为LAP_79-63、LAP_396-410和LAP_106-120;Th2型优势抗原表位为LAP_13-28、LAP_495-510和LAP_396-410。ELISA pot鉴定的Th1型优势抗原表位为LAP_396-410、LAP_504-518和LAP_106-120;Th2型优势抗原表位为LAP_504-518、LAP_313-328和LAP_396-410。BALB/c小鼠血清的抗原表位特异性ELISA筛选出的优势B表位结果为LAP_464-479、LAP_495-510和LAP_313-328。LAP蛋白3D结构建模成功,LAP优势抗原表位分布于表面居多。结论 多房棘球蚴LAP蛋白优势T细胞和B细胞抗原表位鉴定成功,使得研制抗多房棘球蚴感染的多价表位疫苗成为可能。     

稳定过表达miR-125b对乳腺癌MCF-7细胞转移能力的影响

目的：通过构建稳定表达miR-125b的真核表达载体以探讨miR-125b对乳腺癌MCF-7细胞转移能力的影响。方法：构建重组质粒pSilencer 4．1-miR-125b并转染MCF-7细胞,通过G418筛选得到稳定过表达miR-125b的乳腺癌细胞系MCF-7-miR—125b,并结合二维划痕愈伤实验、三维Transwell侵袭小室实验和集落形成实验考察过表达miR-125b对乳腺癌细胞系转移能力的影响。结果：成功获得了稳定过表达miR-125b的乳腺癌细胞系MCF-7-miR-125b,其在二维和三维水平的迁移能力均明显强于MCF-7细胞,细胞新生克隆数较MCF-7亦有显著提高。结论：miR—125b可使乳腺癌细胞转移能力增强。     

肝片吸虫鞘脂激活蛋白样蛋白2（FhSAP-2）的原核表达及分离纯化

目的 建立肝片吸虫鞘脂激活蛋白样蛋白2（FhSAP-2）原核表达系统.方法用生物信息学软件OptimumTM Codon优化密码子适应指数（CAI）、最优密码子频率（FOP）及GC含量以获得适合大肠杆菌BL-21表达的FhSAP-2基因序列,并克隆到原核表达载体pET22b和pET28a中,经IPTG诱导其表达并经亲和层析及离子交换色谱纯化后获得目的 蛋白.结果 OptimumTM Codon获得优化后的FhSAP-2序列,经测序及酶切鉴定结果表明重组质粒pET22b-FhSAP-2、pET28a-FhSAP-2构建成功,进一步实验结果表明FhSAP-2在pET28a中包涵体部位表达,可溶部位不表达;在pET22b中可溶部位表达量低,包涵体部位无表达.继而经Ni-NTA柱亲和纯化及离子交换色谱纯化获得电泳纯的FhSAP-2蛋白.结论成功建立FhSAP-2的原核表达系统.