乌索酸通过抑制miR-21表达诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制

探讨乌索酸通过调控miR-21表达从而诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用机制。采用MTT方法检测乌索酸对肝癌细胞增殖的抑制作用;qPCR检测肝癌细胞中miR-21的表达水平及乌索酸对HepG2细胞中miR-21表达的调控作用;转染miR-21 mimics进HepG2细胞中上调miR-21的表达后,MTT、流式细胞检测法、RT-PCR方法分别分析miR-21在乌索酸对细胞的增殖、凋亡以及对凋亡相关基因的调控过程中的作用。结果显示,与肝正常细胞L-02以及肝癌SMCC-7721、Bel-7402细胞相比较,乌索酸对肝癌HepG2细胞的增殖抑制效果最强,且HepG2细胞中miR-21的表达水平最高。乌索酸可下调HepG2细胞中miR-21的表达,且在24 h的下调作用最强。miR-21的表达上调可以部分抵消乌索酸对HepG2细胞的抑制增殖及促进凋亡,部分抵消下调凋亡抑制基因Bcl-2、survivin表达和上调促凋亡基因Bax表达的作用。结果提示,乌索酸通过抑制miR-21的表达诱导肝癌HepG2细胞凋亡。     

竞争性内源RNA(ceRNAs)研究进展——RNA对话的新机制

microRNAs(miRNAs)是一类长度约为22 nt的非编码单链小RNA分子,通过其种子序列与靶基因的3’UTR互补并引导沉默复合体(RISC)降解或抑制靶基因的翻译,在转录后水平调控靶基因的表达。一个miRNA可调控多个靶基因,同一个靶基因也可以受多个miRNA调控。最新的研究发现mRNA之间可以通过miRNAs反应原件(MREs)达到相互调控的目的,这种新的调控机制被称作竞争性内源RNA(ceRNAs)假说,这种RNA之间新的对话机制的出现不仅在转录组学水平赋予了mRNAs、长链非编码RNA及假基因的转录产物新的生物学功能,扩大人类基因组中的功能性遗传信息,并且绘制了一个更庞大的miRNAs与mRNA相互调控的网络,为深入研究肿瘤等疾病的发病机制提供新的理论依据。本文从ceRNAs调控网络的成员、ceRNAs调控机制的作用基础、作用方式及ceRNAs与肿瘤等多方面对ceRNAs调控机制的研究进展进行综述。     

裸鼠近红外肿瘤体内转移模型的建立

目的建立以近红外探针FA-OCC-QDs介导的裸鼠近红外体内肿瘤转移模型。方法通过化学修饰壳聚糖并包裹量子点制备具有近红外光学活性的肿瘤靶向探针FA-OCC-QDs,并结合荧光倒置显微镜、MTT法考察FA-OCC-QDs的体外肿瘤靶向性及细胞毒性,继而结合近红外成像裸鼠肿瘤转移模型、病理切片等技术研究该探针肿瘤体内靶向性。结果 FA-OCC-QDs无明显的细胞毒性（IC50=0.1368）,并且具有很好的肿瘤靶向性。本研究所建FA-OCC-QDs近红外检测技术可以准确检测到体内微小的肿瘤转移灶。结论 FA-OCC-QDs可以准确诊断肿瘤转移的发生并且FA-OCC-QDs近红外成像模型的灵敏度显著高于病理切片,本研究建立了一种简单、快速、准确、实时的裸鼠活体诊断肿瘤转移的模型,该模型可能为肿瘤转移的机制研究及抗肿瘤转移药物的研发提供有利的工具。     

聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT-PCR中的应用

目的:探讨聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT-PCR中的应用.方法:提取正常组大鼠和链脲佐菌素致糖尿病模型组大鼠心肌组织总RNA,逆转录得到cDNA第一链,以此为模板进行PCR扩增,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术分析不同循环数及模板量与PCR产物量间的关系.结果:PCR扩增反应在第20～25个循环,起始模板量为0.8～2.4μg时,PCR产物量与起始模板量呈现较好的线性关系.结论:通过控制起始模板量,减少PCR循环数使目的基因的扩增处于PCR扩增指数期,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DM银染技术,可以通过比较PCR扩增产物量的变化以分析目的基因表达水平的差异.     

间硝地平对左室肥厚大鼠左室舒张功能及心脑线粒体和血管组织钙含量的影响

用肾性高血压左室肥厚(LVH)大鼠模型,观察了间硝地平(m-Nif)和硝苯地平(Nif)长期给药(ig20mg·kg^-1·d^-1持续9周)对左室舒张功能、左心室肌和大脑线粒体及血管钙含量的影响。与假手术组相比,LVH组左室顺应性明显下降,僵硬度增高,左心室肌和大脑线粒体及尾动脉和主动脉钙含量增加。与LVH组相比,m-Nif和Nif各组左室顺应性改善,僵硬度降低(P<0.01),左心室肌线粒体及尾动脉和主动脉钙含量较LVH组显著降低(P<0.01)。两药在作用强度上无显著差异。     

4-(苯并咪(噻)唑-2-)苯甲脒类化合物的合成及其一氧化氮合酶抑制活性

目的:寻找抑制一氧化氮合酶(NOS)并对相关疾病具有较好治疗作用的化合物.方法:以苯甲脒为基本母核,在苯环的对位引入2-苯并咪(噻)唑基,然后在脒基N上引入环状或非环状的取代基,并测定目标化合物的诱生型NOS(iNOS)抑制活性.结果和结论:合成了4-(苯并咪(噻)唑-2-)苯甲脒类化合物12个,其结构经IR、1HNMR、MS和元素分析确证.初步的药理试验表明目标化合物具有不同程度的iNOS抑制活性,神经型NOS(nNOS)抑制活性研究正在进行中.     

乙酰肝素酶稳定表达细胞株的建立

目的：在真核细胞中表达人乙酰肝素酶（HPA）并建立该酶的稳定表达细胞株。方法：构建包含人乙酰肝素酶全长编码序列的真核表达载体pcDNA-hpaFL，转染CHO-K1细胞，G418筛选稳定表达细胞株。通过RT-PCR，Western-blot分析与鉴定蛋白的表达；用荧光HPLC法检测蛋白的活性．结果：在CHO-K1细胞中成功地表达出有活性的人乙酰肝素酶，并获得该酶的稳定表达细胞株。结论：成功地建立了人乙酰肝素酶稳定表达细胞株，为其抑制剂的筛选及其功能的研究奠定了基础。     

人内皮抑素部分序列——Es-2的生物活性研究

目的：检测人工合成多肽Es-2抑制血管生成活性及其对肿瘤生长的影响。方法：采用MTT法和鸡胚给药实验，观察Es-2对肿瘤细胞和鸡胚尿囊绒膜（CAM）上血管生成的抑制情况。建立C57BL／6黑色素瘤（B16F10）小鼠模型，以不同剂量皮下注射给药，测量各组小鼠皮下移植肿瘤体积变化和抑瘤率。结果：Es-2对肿瘤细胞无抑制现象；在CAM实验中，新生血管生长受到明显的抑制。C57BL／6小鼠给药10d后治疗组与对照组相比，Es-220mg／kg组对小鼠黑色素瘤生长有一定抑制作用，其效果相当于10mg／kg内皮抑素的治疗效果（P〈0．05）。结论：Es-2具有开发成抗肿瘤药物的前景。     

人肽脱甲酰基酶基因pdf与肿瘤细胞生长的相关性

目的：研究人肽脱甲酰基酶（HsPDF）基因pdf在不同肿瘤细胞系中的表达情况并探讨该基因与肿瘤细胞生长的相关性。方法：体外培养肿瘤细胞，采用半定量RT-PCR方法检测不同肿瘤细胞系中pdf mRNA的水平；用HsPDF抑制剂Actinonin处理细胞并通过细胞形态学、MTT法、RT-PCR及凝胶电泳等技术检测pdf基因与肿瘤细胞生长的相关性。结果：RT-PCR结果表明，该基因在13种不同来源的人肿瘤细胞系和正常组织中的表达具有显著差异。其中，在Hela、MDA-MB-231、K562等肿瘤细胞系中高表达，而在人正常肺组织中低表达（P〈0．001）。体外试验显示，Actinonin可显著地抑制肿瘤细胞的生长．使细胞中pdf基因表达量相应的下降，且呈明显的浓度依赖性；同时，光镜观察结果显示Actinonin对肿瘤细胞有诱导凋亡的作用。结论：pdf是一种广泛分布于不同组织的基因，它与肿瘤细胞的生长增殖间存在着显著的相关性。     

人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)在转基因烟草中的表达

实验室构建了携带有人组织型纤溶酶原激活剂（tissue plasminogen activator，t-PA）植物表达载体并转化人根瘤农杆菌GV3101。该农杆菌以叶盘法转化烟草，建立表达t-PA的转基因烟草体系。通过对转化植株进行Southern blotting，RT-PCR，Western blotting和纤维蛋白琼脂糖平板（fibrin-agarose plate assay，FAPA）法检测，结果显示，在转基因烟草中成功地表达出有活性的人t-PA。