胃癌前病变组织中人端粒酶逆转录酶、p53蛋白的表达与幽门螺杆菌的关系

目的：探讨胃癌前病变组织中人端粒酶逆转录酶（hTERT）和p53蛋白的表达状况及其与幽门螺杆菌（Hp）根除前后的关系。方法：采用实时定量荧光RT-PCR方法检测胃粘膜中hTERT,将hTERT与GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）拷贝数之比的100倍作为标准化hTERT（NhTERT）,用快速尿素酶法和Warthin-Starry银染色法检测Hp,同时用免疫组化检测p53蛋白的表达。结果：Hp阳性组hTERTmRNA和p53蛋白的表达率均显著高于Hp阴性亚组的表达率（均P〈0.05）。Hp根除组hTERTmRNA的表达率显著低于未根除组（P〈0.05）,未根除组与阴性对照组之间无显著性差异。结论：在胃癌前病变阶段,Hp感染与端粒酶表达水平及p53蛋白之间有直接关系,提示端粒酶、Hp感染、p53蛋白在胃癌的发生、发展中起重要作用及Hp根除的必要性。     

河北省首例人感染H7N9禽流感突发事件公共卫生风险评估

目的通过风险评估以确定H7N9禽流感疫情在廊坊市扩散、流行的可能性,为终止突发公共卫生事件Ⅳ级响应提供科学依据。方法检验方法为实时荧光PCR法,评估方法为专家会商法,对此次人感染H7N9禽流感疫情的风险因素进行识别、分析,做出风险评价。结果此次人感染H7N9禽流感疫情在廊坊市传播流行的风险等级为低,不排除再发生病例的可能性。结论近年来突发公共卫生事件逐步引起重视,风险管理的核心环节是进行风险评估。风险评估工作已成为预警、评价突发公共卫生事件的一种有效手段。当风险评估内容还没有可依据的固定的评估工具或评估框架时,无法进行较为准确的定性、定量的评价,专家会商法成为突发事件公共卫生风险评估的首选方法。此次廊坊市在处理河北省首例人感染H7N9禽流感疫情中,运用专家会商法开展突发事件公共卫生风险评估,指导疫情防控工作,取得了很好的实效。     

返回式卫星搭载肿瘤细胞和生物工程细胞的初步研究

目的初步探讨空间环境对细胞生长特性的影响。方法利用细胞生存装置将肿瘤细胞及生物工程细胞于我国第 18颗返回式卫星返回舱内进行无源搭载。对返回细胞进行单克隆化 ,光学显微镜观察细胞形态 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,MTT法测定细胞生长曲线。结果空间飞行后 ,肿瘤细胞与生物工程细胞存活率相比明显不同 ,均出现多种细胞形态 ;单克隆株与地面对照相比 ,倍增时间及增殖速度出现快慢不一的变化 ;细胞周期分布改变 ,G1期细胞增多 (P <0 0 5 ) ,S期细胞减少 (P <0 0 5 )。结论空间环境可导致细胞产生多种变异 ,但并非均为可遗传性变异 ,是否能够筛选出所需要的细胞株 ,需做进一步研究。     

循环肿瘤DNA定量方法的建立及其临床应用的初步研究

目的 建立荧光核酸染料PicoGreen用于循环肿瘤DNA定量的方法并以乳腺癌为例初步探讨其在肿瘤辅助诊断中的作用. 方法 采用QIAamp DNA blood kit提取血清中的循环肿瘤DNA并分析其提取效率,分析PicoGreen荧光分光光度法对微量DNA进行精确定量的范围和可靠性.以受试者工作特征曲线(ROC)判断循环肿瘤DNA应用于乳腺癌辅助诊断的可行性. 结果 QIAamp DNA blood kit提取血清中DNA的效率在37.8%～46.2%,平均43.4%.用PicoGreen荧光法,可检出低至1 ng的循环肿瘤DNA,并且在1～500 ng范围内呈现良好的直线关系.用此法检测乳腺癌组血清DNA浓度为(169.70±124.10)μg/L,对照组乳腺良性病变为(51.70±29.04)μg/L,健康人为(54.30±36.84)μg/L.经Mann-Whitney检验二者差异有统计学意义.ROC下面积为0.899(95%CI为0.848～0.951),当DNA诊断界值为96.0/μg/L时,灵敏度为78.2%,特异度为90.0%,提示血清DNA浓度有较好的诊断应用价值. 结论 应用PicoGreen荧光分光光度法可有效检测微量的血清循环肿瘤DNA,且乳腺癌组循环肿瘤DNA浓度明显高于对照组,提示循环肿瘤DNA为有价值的乳腺癌辅助诊断指标之一.     

低温细胞生存系统长期保存CHO细胞的初步研究

目的验证基因工程细胞空间搭载系统在低温 ( 18℃ -3 0℃、无源等条件下保存细胞的可行性 ,观察此系统对生物工程细胞CHO(dhfr-)生长特性的影响。方法将CHO (dhfr-)生物工程细胞株在空间搭载系统中培养 2 5d后 ,利用光镜、MTT法、FCM分析、3 H掺入法及染色体分析观察细胞生长特性。结果细胞低温培养 2 5d后 ,CHO(dhfr-)细胞呈多种形态 ;细胞周期变化差异不显著 ;染色体无断裂 ;细胞生长速度显著减慢 ;大分子生物合成显著增加。结论空间搭载系统搭载CHO(dhfr-)细胞进入空间后 ,虽然细胞产生了许多生理性变化 ,但能使CHO(dhfr-)细胞生存下来。利用空间搭载系统搭载细胞是完全可行的。     

保妇康栓对人乳头状瘤病毒抑制作用的实验研究

目的:探讨中药制剂保妇康栓对人乳头状瘤病毒(HPV)16亚型的抑制作用。方法:以不同浓度的含保妇康栓培养基体外培养宫颈癌细胞系CaSki和宫颈永生化细胞H8,相差显微镜下观察活细胞形态学变化;采用四甲基偶氮唑蓝比色法以及流式细胞术技术检测不同浓度保妇康栓对细胞增殖的影响;应用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测人乳头状瘤病毒HPV16亚型E6E7的表达。结果:不同浓度的保妇康栓可以抑制细胞的增殖;在药物作用下,CaSki细胞G1期细胞增加(P<0.05),G2、S期细胞减少(P<0.05),CaSki细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),而对H8细胞周期和凋亡率影响不明显;两种细胞HPV16E6E7基因片段mRNA表达均明显低于对照组(P<0.01)。结论:保妇康栓在体外抑制宫颈癌细胞系CaSki和宫颈永生化细胞H8增殖,其机制可能是通过抑制HPV16E6E7表达而抑制肿瘤细胞生长。     

龙葵碱诱导人宫颈癌细胞HeLa凋亡的体外实验研究

目的 研究龙葵碱对人宫颈癌细胞系HeLa的凋亡作用及其抑癌机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法检测龙葵碱对HeLa细胞生长的影响;通过Hoechst33258染色及DNA Ladder研究龙葵碱诱导HeLa细胞凋亡的作用;RT-PCR法检测龙葵碱对环氧合酶(COX-2)表达的影响.结果 龙葵碱可剂量依赖性地抑制HeLa细胞生长,作用48h时,IC50=260μg·mL-1;可诱导HeLa细胞凋亡,荧光染色可见凋亡小体,DNA Ladder显示典型的细胞凋亡梯形条带;可降低COX-2的表达水平.结论 龙葵碱可抑制人宫颈癌细胞HeLa的增殖.诱导细胞凋亡,这可能是龙葵碱抑癌作用的机制之一.     

大鼠胰岛素瘤实验模型的建立及其应用

目的 通过移植大鼠胰岛素瘤INS-1细胞至糖尿病小鼠肾包膜下使之形成胰岛素瘤,并诱导其发生凋亡,建立可用于研究胰岛β细胞凋亡机制的动物模型.方法 将5×106 INS-1细胞接种于链脲霉素(STZ)造模的糖尿病小鼠左肾包膜下,监测动物空腹血糖和血清胰岛素水平的变化,当血糖趋近正常后摘取动物左侧肾脏并检测其血糖和血清胰岛素水平的变化;固定包埋摘取的肾脏,进行HE染色以及胰岛素的免疫组化染色,确定胰岛素瘤模型的建立.在胰岛素瘤动物模型中,腹腔给予毒胡萝卜素(TG)或软脂酸钠(PA),监测给药后动物空腹血糖的变化,当血糖浓度出现逆转时,摘取动物左侧肾脏,通过TUNEL原位染色法检测移植瘤细胞的凋亡.结果 将INS-1细胞移植到糖尿病小鼠肾包膜下后,从第9天开始,动物空腹血糖进行性降低,血清胰岛素水平逐渐升高,当动物血糖接近至正常时,摘取动物左肾导致动物血糖显著升高,在摘取的左肾可见明显的移植瘤,免疫组织化学染色显示移植瘤细胞为胰岛素阳性.在胰岛素瘤动物模型给予TG或PA刺激后,动物空腹血糖出现逆转,显著升高,血清中胰岛素含量明显降低,摘取动物左侧肾脏后,TUNEL原位染色发现移植瘤内有明显的细胞凋亡.结论 大鼠胰岛素瘤INS-1细胞肾包膜下移植可以建立胰岛素瘤动物模型,应用此动物模型可以在体内研究胰岛β细胞凋亡的机制.     

RNA干扰下调HE4基因表达对人卵巢癌SK-OV-3细胞增殖和侵袭的影响

目的应用RNA干扰技术下调人附睾蛋白HE4基因表达水平,观察HE4对人卵巢癌SK-OV-3细胞增殖和侵袭能力的影响。方法化学合成3对HE4特异性小分子干扰RNA(siRNA),脂质体法转染人卵巢癌细胞系SK-OV-3(HE4-siRNA组),同时以非特异序列siRNA转染的SK-OV-3细胞(阴性对照组)和正常培养的SK-OV-3细胞(正常对照组)为对照,于转染后48 h,采用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)和Western blot方法分别检测HE4 mRNA及蛋白表达水平。采用CCK8试剂盒检测卵巢癌细胞增殖活性的变化,穿膜小室模型测定HE4对细胞侵袭能力的影响。结果与正常对照组相比,HE4-siRNA转染卵巢癌SK-OV-3细胞48 h后,HE4 mRNA的表达水平显著下降,仅为正常对照组的12.7%(P<0.01),与之相应HE4蛋白表达也显著下降,而转染非特异序列的阴性对照组与正常对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。HE4-siRNA下调卵巢癌SK-OV-3细胞HE4表达后,细胞增殖受到明显抑制,细胞增殖活性仅为正常对照组的60%,阴性对照组细胞增殖未见明显变化。体外侵袭实验显示,HE4-siRNA组穿膜细胞数为每视野(21.8±2.86)个,显著低于正常对照组(187.4±11.17)个(P<0.01)和阴性对照组(177.8±9.76)个(P<0.01),而阴性对照组和正常对照组两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HE4特异性siRNA能成功下调SK-OV-3细胞中HE4基因的表达,显著降低卵巢癌细胞增殖和侵袭能力,HE4有可能成为人卵巢癌侵袭转移防治的重要靶点。     

同一组织来源的肝癌干细胞分化能力异质性的体外研究

目的通过比较肝癌干细胞的不同单细胞克隆的体外分化能力,分析同一组织来源的肿瘤干细胞分化能力是否具有异质性,以进一步明确肿瘤干细胞的分化特性,为靶向肿瘤干细胞的治疗提供实验依据。方法通过有限稀释法对肝癌干细胞进行单细胞克隆培养,获得的单细胞克隆通过MTT测定比较其增殖能力。然后分别挑选增殖速度较快和较慢的3个克隆,采用RT-PCR方法比较其干细胞标志物表达水平。对干细胞标志表达水平高的3个克隆(A2、A3和B2)进行向成骨、软骨和脂肪方向的诱导分化。采用实时荧光定量PCR方法检测诱导前后成骨、软骨和脂肪标志分子的表达。结果获得的20个单细胞克隆增殖能力不同,并且增殖能力快的克隆表达干细胞标志物CD133、Oct4、c-kit、SCF、nestin比增殖能力慢的克隆强。向成骨方向诱导后,A2、A3和B2克隆I型胶原mRNA表达水平分别升高了(4.71±0.11)、(2.13±0.15)和(3.82±0.3)倍;骨钙素mRNA的表达水平分别升高(8.55±0.18)、(7.02±0.03)和(7.91±0.09)倍,说明A2克隆向成骨细胞分化能力最强。向软骨方向诱导后,B2分化能力最强,软骨标志分子蛋白聚糖和II型胶原的表达分别上调(25.01±0.19)倍和(17.49±0.19)倍,而在A2未发生明显变化,A3只轻微上调。向脂肪方向诱导后,A2、A3和B2克隆脂联素mRNA表达水平分别升高了(6.12±0.15)、(11.45±0.36)和(12.41±1.03)倍,过氧化物酶体增殖物激活受体γmRNA的表达水平分别升高(4.92±0.02)、(9.54±0.18)和(8.96±0.11)倍。结论来源于同一组织的肝癌干细胞在分化能力上具有异质性,这可能是导致肿瘤组织异质性的原因之一,也提示靶向肿瘤干细胞的治疗需要联合用药。