邻苯二甲酸二丁酯孕期暴露致仔鼠睾丸膜联蛋白A5的表达差异

背景:国内外关于邻苯二甲酸二丁酯导致雄性生殖系统畸形发生机制的探讨多集中于邻苯二甲酸二丁酯干扰胚胎期睾丸睾酮合成途径的研究,对其基因表达调控的因素及功能蛋白质之间相互干扰的网络效应却并不明了。蛋白质组学能够从整体水平反映蛋白质组分,并筛选功能相关蛋白。目的:探讨邻苯二甲酸二丁酯胚胎期暴露对胎鼠睾丸蛋白表达谱的影响,分离并鉴定差异表达蛋白质。设计、时间及地点:随机对照动物实验,实验于2006-08/2007-10在南京医科大学动物实验中心及南京医科大学生殖医学重点实验室完成。材料:将孕鼠随机分为实验组和对照组,每组5只。妊娠14～18d。方法:实验组按800mg/(kg·d)染毒孕鼠,对照组予大豆油5mL/d。妊娠21d取出胚胎大鼠睾丸,提取总蛋白,进行二维凝胶电泳分离和图像分析,筛选出的差异蛋白质点利用质谱技术进行鉴定,并选择关键蛋白进行验证。主要观察指标:①两组蛋白的电泳差异比较。②酶切,MALDI-TOF分析,数据库检索,生物信息学检索结果。③两组蛋白Western blotting检测及免疫组织化学染色结果。结果:共筛选出33个差异表达蛋白(t≥2.831,P<0.05),其中14个通过质谱分析和SwissProt蛋白数据库检索得到鉴定,包括膜联蛋白A5、过氧化物酶6、泛素羧基末端水解酶L1等。运用Western blotting,验证了膜联蛋白A5在实验组表达量明显高于对照组,通过免疫组织化学方法,发现膜联蛋白A5主要定位在胎鼠睾丸Leydig细胞中。结论:实验运用蛋白质组学方法,建立了邻苯二甲酸二丁酯孕期暴露雄性仔鼠睾丸与正常仔鼠睾丸蛋白质差异表达谱系,鉴定出14个蛋白点,确定了膜联蛋白A5在胎鼠睾丸的定位。     

亚甲蓝检测阴茎癌前哨淋巴结在腹股沟淋巴结清扫中的意义

目的:探讨亚甲蓝检测阴茎癌前哨淋巴结(SN)在腹股沟淋巴结清扫中的意义。方法:22例阴茎癌患者采取阴茎原发病灶切除同时,采用亚甲蓝检测腹股沟SN作活检,并选择SN转移病例及时行该侧腹股沟区淋巴结清扫术,计算该方法的准确度,假阴性率。结果:95%(21/22)的患者术中可检测到SN,19例患者两侧均可检测到SN,2例为单侧。21例患者中40枚SN,其中阳性淋巴结11例(27.5%)。4例腹股沟SN阴性患者在随访中出现腹股沟淋巴结或盆腔淋巴结转移。亚甲蓝在检查阴茎癌SN阳性预测率100%,准确度81%,其中假阴性率28%。结论:本方法术前准备简单,操作方便,费用较低,可作为一种经济有效的检测方式。     

邻苯二甲酸二丁酯孕期暴露致仔鼠睾丸膜联蛋白A5的表达差异

背景：国内外关于邻苯二甲酸二丁酯导致雄性生殖系统畸形发生机制的探讨多集中于邻苯二甲酸二丁酯干扰胚胎期睾丸睾酮合成途径的研究，对其基因表达调控的因素及功能蛋白质之间相互干扰的网络效应却并不明了。蛋白质组学能够从整体水平反映蛋白质组分，并筛选功能相关蛋白。 目的：探讨邻苯二甲酸二丁酯胚胎期暴露对胎鼠睾丸蛋白表达谱的影响，分离并鉴定差异表达蛋白质。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，实验于2006-08/2007-10在南京医科大学动物实验中心及南京医科大学生殖医学重点实验室完成。 材料：将孕鼠随机分为实验组和对照组，每组5只。妊娠14~18 d。 方法：实验组按800 mg/(kg?d)染毒孕鼠，对照组予大豆油5 mL/d。妊娠21d 取出胚胎大鼠睾丸，提取总蛋白，进行二维凝胶电泳分离和图像分析，筛选出的差异蛋白质点利用质谱技术进行鉴定，并选择关键蛋白进行验证。 主要观察指标：①两组蛋白的电泳差异比较。②酶切，MALDI-TOF分析，数据库检索，生物信息学检索结果。③两组蛋白Western blotting检测及免疫组织化学染色结果。 结果：共筛选出33个差异表达蛋白（t≥2.831，P < 0.05），其中14个通过质谱分析和SwissProt蛋白数据库检索得到鉴定，包括膜联蛋白A5、过氧化物酶6、泛素羧基末端水解酶L1等。运用Western blotting，验证了膜联蛋白A5在实验组表达量明显高于对照组，通过免疫组织化学方法，发现膜联蛋白A5主要定位在胎鼠睾丸Leydig细胞中。 结论：实验运用蛋白质组学方法，建立了邻苯二甲酸二丁酯孕期暴露雄性仔鼠睾丸与正常仔鼠睾丸蛋白质差异表达谱系，鉴定出14个蛋白点，确定了膜联蛋白A5在胎鼠睾丸的定位。     

尿道下裂大鼠与正常大鼠睾丸蛋白质二维电泳图谱分析

目的:探讨二维电泳技术在尿道下裂大鼠与正常大鼠睾丸差异表达蛋白研究中的应用.方法:孕SD大鼠10只,随机分为2组,妊娠12～19天,实验组和对照组分别予邻苯二甲酸二丁酯(DBP)500mg/(kg·d)、大豆油5 ml/d灌胃,第2l天取出仔鼠睾丸,提取总蛋白,进行二维凝胶电泳分离和图像分析.结果:按照5倍的表达量计算,发现有差异表达的蛋白质点9个,5个点在尿道下裂大鼠睾丸中高表达,而在正常大鼠睾丸为低表达;相反,在正常大鼠睾丸中高表达的4个点,在尿道下裂者为低表达.结论:初步建立了正常和尿道下裂大鼠睾丸的二维电泳图谱,并发现两者之间存在一些差异表达蛋白,为进一步进行尿道下裂大鼠睾丸差异表达蛋白的分离及鉴定奠定了良好基础.     

膀胱腺癌辅助化疗一例

1临床资料患者,男,71岁。因尿频、尿急、排尿不尽感1个月,加重伴下腹部坠胀不适1周,于2013年1月9日入院。患者1月前出现尿频、尿急、排尿不尽感,近1周来进行性加重伴下腹部坠胀不适,无明显肉眼血尿、尿痛、腹部疼痛、发热等症状。入院后查血清CEA为9.65 ng/ml,CA199为48.09 U/ml,CA153为100.1 U/ml。膀胱镜检示:膀胱内顶壁、     

泛素碳端水解酶L1在邻苯二甲酸二丁酯诱导大鼠睾丸发育异常中的表达变化

目的:利用邻苯二甲酸二丁酯(DBP)诱导大鼠睾丸发育异常,验证泛素碳端水解酶L1(UCHL1)在异常睾丸与正常大鼠睾丸中的差异表达,以进一步探讨UCHL1在DBP导致的大鼠睾丸发育异常中的作用机制。方法:孕SD大鼠40只,妊娠14~18d,随机分为2组,实验组和对照组分别予DBP 800mg/(kg·d)、大豆油5ml/d灌胃,孕期第19d(GD19)和出生后22d(PND22),分别取胎鼠及仔鼠睾丸,定量定位分析UCHL1在胎鼠及仔鼠睾丸中的表达变化。结果:GD19,UCHL1在实验组的相对表达量为0.075±0.02(n=10),对照组为0.150±0.02(n=10),2组差异有显著性(P<0.05),UCHL1在实验组中比正常对照组下降50%;而PND22,UCHL1于实验组隐睾睾丸中的相对表达量为0.344±0.03(n=10),实验组非隐睾睾丸中为0.326±0.02(n=10),对照组为0.322±0.02(n=10),3组间无明显统计学差异(P>0.05)。UCHL1主要定位于睾丸发育时期的精原细胞,初级精母细胞和次级精母细胞的胞质与胞核中。结论:DBP在染毒期间影响了睾丸生精细胞UCHL1的表达,影响了泛素-蛋白酶体系的平衡,从而导致生精小管的变薄,各层生精细胞数目减少的睾丸发育异常现象。     

S-1联合GC方案新辅助化疗治疗膀胱腺癌（附8例报告）

目的:评价S-1联合GC方案行新辅助化疗在局部晚期膀胱腺癌治疗中的疗效。方法:对8例局部晚期膀胱腺癌患者行新辅助化疗,方案为吉西他滨1.0g/m2,d1,8+顺铂20mg/m2,d1-5,静脉滴注,联合S-1 50mg,bid,d1-14,每21天为一周期,每2周期进行疗效评价一次,视病灶缩小情况决定是否行全膀胱切除术。结果:8例患者均耐受化疗,疗效评价6例PR,2例CR。7例顺利接受手术,术后随访5-24月未见复发转移。1例CR患者未及时接受手术,3个月后肿瘤快速进展。结论:S-1联合GC方案新辅助化疗治疗不能手术的局部晚期膀胱腺癌安全有效。     

吉西他滨联合顺铂的新辅助化疗治疗局部晚期膀胱移行细胞癌

目的探讨吉西他滨联合顺铂(GC方案)的新辅助化疗方案治疗局部晚期膀胱移行细胞癌的临床疗效及毒性反应。方法 12例局部晚期膀胱移行细胞癌患者接受4个周期GC方案的新辅助化疗(吉西他滨1000mg/m2,第1、8天静脉滴注;顺铂20mg,第1～5天静脉滴注)。结果 12例均完成4个周期的GC方案化疗,总有效率58%,其中完全缓解2例,部分缓解5例,稳定3例,进展2例。6例患者化疗后行全膀胱切除术+回肠代膀胱术,3例经剖腹探查肿块无法切除而仅行放疗,2例患者因病情进展行姑息性化疗,1例患者拒绝手术治疗后仅行姑息性化疗。GC方案化疗的主要毒性为骨髓抑制,91%白细胞减少。结论吉西他滨联合顺铂是目前治疗局部晚期膀胱移行细胞癌有效、安全的新辅助化疗方案,为不能手术的局部晚期的膀胱移行细胞癌患者提供了新的治疗模式。     

邻苯二甲酸二丁酯对胚胎期大鼠睾丸蛋白表达谱的影响

目的探讨邻苯二甲酸二丁酯（DBP）母体暴露对胚胎期大鼠睾丸蛋白表达谱的影响。方法孕SD大鼠10只，随机分为2组，妊娠14～18d，实验组和对照组分别予DBP每13800mg／kg体重、大豆油5ml／d灌胃，第19天取出子鼠睾丸，每组各3例样本，提取总蛋白，行二维凝胶电泳分离和质谱分析。结果筛选出23个差异表达蛋白（f≥2．831，P〈0．05），经蛋白数据库检索，共鉴定出差异蛋白14个（评分〉50，P〈0．05），这些蛋白主要参与细胞凋亡、细胞增殖与分化和信号转导等。结论蛋白质组学是研究DBP的生殖系统发育毒性的有效方法。