EBV转化技术中小鼠腹腔巨噬细胞的作用

EBV转化—融合技术是制备人单克隆抗体(McAb)的重要途径之一。但是,EBV转化技术的难点是在转化后,由于同时被EBV激活的特异性记忆T细胞的细胞毒作用,B细胞     

胃癌患者血浆中p53基因突变的检测

目的:检测并比较胃癌患者外周血浆、肿瘤组织以及癌旁正常黏膜中p53基因突变状况.方法: 从96名胃癌患者的术前血浆、肿瘤组织及癌旁正常黏膜提取DNA,采用PCR、变性高效液相色谱分析(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC)及测序技术,检测p53基因5～8外显子的突变,选择20例健康人的血浆作为正常对照.结果: 96例胃癌患者肿瘤组织中,p53基因杂合性突变的检出率为19.8%(19/96),在其相应的外周血浆中,p53基因杂合性突变的检出率为5.2%(5/96),在p53基因突变阳性的外周血浆中,其对应的肿瘤组织均发现有同样的p53基因突变,在对应癌旁正常黏膜组织及20例健康人对照血浆中均未检出p53基因突变.肿瘤组织和外周血浆中p53基因突变与胃癌患者的临床病理特征无相关性.结论:胃癌患者血浆中可检测出p53基因突变,胃癌患者血浆中p53基因突变的分析有可能作为临床辅助诊断、疾病监测的指标之一.     

ATP对人白血病细胞U937凋亡的影响

目的　探讨ATP诱导人白血病细胞U937细胞凋亡的机理。　方法　应用ATP(0 2 3g L)作用于培养的U937细胞 ,应用免疫荧光细胞化学方法检测连接蛋白Cx4 3、F 肌动蛋白 (F actin)、纽蛋白 (vinculin)的表达。　结果　ATP诱导U937细胞凋亡小体形成的同时Cx4 3表达增强、F 肌动蛋白重组 ,纽蛋白组装改善。　结论　ATP诱导人白血病细胞凋亡时 ,凋亡小体的形成与间隙连接蛋白Cx4 3表达、F 肌动蛋白重组 ,纽蛋白组装有着平行关系 ,表明它们在U937凋亡小体形成过程所起的重要作用     

膜结合型肿瘤坏死因子在人乳腺癌细胞中的表达及其对肿瘤细胞生长的影响

肿瘤坏死因子(TNFL-α)具有较强的抗肿瘤作用.膜相关的肿瘤坏死因子(MA-TNF-α)同样具有抑制肿瘤生长的作用.由于MA-TNF-α仅在局部微环境中起作用,因此没有全身性的毒副作用.为了观察MA-TNF-α对肿瘤的作用,本研究将含突变的MA-TNF-α基因的逆转录病毒载体导入包装细胞系,以其产生的病毒上清感染人乳癌细胞MDA231研究了外源基因在靶细胞中的整合与表达,并通过体外杀伤及裸鼠体内致瘤性实验观察了其抗肿瘤效应.基因转导后生成的产病毒细胞产生的病毒上清能有效转染MDA231细胞(转导后的细胞称为MDA231T).提取细胞基因组DNA行PCR分析     

PROMOTER HYPERMETHYLATION OF p16 GENE IN PRE- AND POST-OPERATIVE PLASMA OF PATIENTS WITH GASTRIC ADENOCARCINOMA

Objective: To detect promoter hypermethylation of p16 gene in matched pre- and post-operative plasma of patients with gastric adenocarcinoma for evaluating the effectiveness of therapeutic intervention. Methods: Tissue samples, pre- and post-operative plasma of 84 patients were collected. Plasma of 15 healthy people was collected as control. After sodium-bisulfite treatment, extracted DNA was amplified for p16 promoter by methylation-specific polymerase chain reaction (MSP). The PCR products were detected by both gel-ethidium bromide electrophoresis and high performance liquid chromatogram (HPLC). Results: Among 84 patients, p16 hypermethylation was detected in 26 (31.0%) cancer tissues and 2 (0.02%) tumor-adjacent tissues and 12 (14.3%) pre-operative plasma, while negative in plasma of healthy people. For positive plasma cases, the paired tumor tissues were confirmed to be methylated.Within available 30 pairs of matched pre- and post-operative plasma, 6 pre-operative plasma was positive, and only 1 of 6 plasma remained hypermethylated after surgery. The results detected by HPLC exactly matched those by gel-electrophoresis. Conclusion: The alteration of status of p16 hypermethylation in post-operative plasma is considered the consequences of surgical intervention. Although p16 hypermethylation has no role in pre-operative staging of gastric cancer, detecting hypermethylated p16 in plasma could be utilized in monitoring patients after surgery.     

膜结合型TNF-α基因在人胃癌细胞中的表达及其对肿瘤细胞生长的影响

TNF-α是一种具有抗肿瘤作用的细胞因子．它有二种形式，一种是26kD膜结合型，另一种是17kD分泌型，二者在体外均有细胞毒活性。我们利用逆转录病毒载体LXSN构建了插入突变的膜结合型TNF-α基因的重组逆转录病毒载体。用Lipofectin将逆转录病毒载体及重组逆转录病毒载体引入包装细胞CRIP，     

含人突变DMFR基因的逆转录病毒对造血细胞的转导及其对小鼠造血功能的重建和长期保护作用

本研究以含人突变的二氢叶酸还原酶(DHFR)基因的逆转录病毒载体,应用共培养的方法将突变的DHFR基因导入小鼠造血干细胞,再回输给经致死剂量照射的小鼠,经不断MTX筛选和反复移植,研究了其对骨髓的重建和长期保护作用.     

胃癌手术前后血浆中p16基因的异常甲基化检测

目的:研究胃癌患者手术前后外周血浆、对应原发肿瘤以及癌旁组织中p16基因启动子区异常甲基化的检出状况,探讨其在胃癌疗效评估中的应用.方法:采用甲基化特异性PGR方法,扩增84例胃癌患者的原发肿瘤、癌旁组织、手术前血浆中pl6基因启动子区,以及上述患者中30例行胃癌根治性手术患者术后14～21天血浆中p16基因启动子区,以15例健康人血浆作为正常对照.采用凝胶电泳-溴乙锭显色以及高效液相色谱两种方法检测产物.结果:84例患者样品中,原发肿瘤中存在pl6基因异常甲基化26例(31.0%),癌旁组织中阳性2例(0.02%),术前血浆中阳性12例(14.3%),15例健康人血浆检测均为阴性.患者血浆阳性者同时也存在对应肿瘤组织阳性.30例同时有手术前后血浆标本的胃癌根治手术患者中,原发肿瘤组织中p16异常甲基化14例,其中6例术前血浆阳性,术后5例转阴.在检测样本中,高效液相色谱的检测结果与凝胶电泳-溴乙锭显色结果一致.结论:胃癌患者外周血浆中可以检测到与原发肿瘤一致的p16异常甲基化,手术后血浆中p16甲基化状态的变化与手术治疗有关,高效液相色谱作为一种便捷的技术可以应用于PCR产物的检测.     

S100A4细胞核表达与胃癌淋巴结转移相关

目的探讨S100A4蛋白在胃癌组织中的细胞内定位及其表达情况及与胃癌临床病理参数的关系。方法分离10对新鲜胃癌组织及配对的正常胃黏膜的核蛋白及浆蛋白，用蛋白印迹法检测S100A4蛋白在细胞内的定位。用免疫组织化学方法检测131例胃癌患者的胃癌组织和20例转移性淋巴结中S100A4蛋白的表达。结果S100A4蛋白在胃癌组织细胞核的表达阳性率为24．4％（32／131）。细胞浆表达阳性率为38．2％（50／131）。在32例S100A4核表达阳性的胃癌病例中，30例（93．8％）有淋巴结转移。伴淋巴结转移的胃癌组织中，S100A4细胞核表达阳性率（29．1％）显著高于没有淋巴结转移的胃癌组织中的S100A4细胞核表达的阳性率（7．1％）（P=0．016）。结论在胃癌组织中发现细胞核表达S100A4，并与胃癌淋巴结转移有关。     

Hu-PBL-SCID小鼠的构建及其在人单抗制备中的应用

由于抗原免疫的受限,使人单抗的研究一直处于十分困难的境地,因此就有多种人单抗制备技术路线:转化、融合和基因工程抗体技术。各种技术方法都有其特点,也互相吸收各自的长处.移植有人淋巴细胞的严重联合免疫缺陷小鼠(SCID小鼠)的构建,使我们有可能利用体内免疫去刺激记忆B细胞,或诱发原发免疫反应,使抗原特异性B细胞增殖,从而有可能进一步用于融合或制