构建腺病毒感染的体外三维血管生成模型

目的：构建高表达腺病毒感染的体外三维血管生成模型，为精确研究某个基因在血管新生中的功能提供技术平台。方法：制备空我腺病毒和cdc42高表达腺病毒。用空载腺病毒感染人微血管内皮细胞（human microvascular endothelialcell，HMVEC），然后用感染过的HMVEC构建体外血管生成三维模型，同时用未感染的HMVEC构建对照组模型，观察腺病毒感染本身对血管新生模型的生长有无影响。用cdc42高表达腺病毒感染HMVEC并构建体外血管新生模型，对照模型采用空载腺病毒感染的细胞构建，验证由腺病毒介导的基因高表达在模型发展过程中维持的时间。结果：空载腺病毒感染模型的平均出芽长度（average length of sprouts，ALS）在24、48、72h时与非感染模型相比有显著性差异（P〈0．01），在96、120h时与非感染模型无显著性差异（P〉0．01）。cdc42高表达腺病毒感染的模型在模型构建后1周内保持了高表达。结论：成功地使用腺病毒作为载体诱导了桌个基因在体外三维血管生成模型中的高表达，为精确研究某个基因在血管新生中的功能提供技术平台。     

DNA免疫制备肝特异新基因FF456抗体及其应用

目的：制备FF456抗体，并研究FF456在正常肝组织和肝癌组织中的表达情况和分布。方法：将FF456全长基因克隆于pCDNA3．1(-)真核表达质粒，直接免疫6～8周龄雌性BALB／c小鼠，并对DNA的免疫条件进行优化。同时通过原核表达体系表达一段含FF456特异序列的肽段。利用该肽段作为抗原，检测DNA免疫得到的FF456抗血清的滴度及特异性，最后利用FF456抗血清对正常肝组织和肝癌组织进行免疫荧光染色。结果：western blotting及ELISA结果表明，DNA免疫得到的FF456抗血清特异性良好，最大抗血清滴度为50000左右。结论：FF456在正常肝组织中广泛表达，在肝癌组织中的表达量明显下调。     

Tristetraprolin对体外血管生成的作用

目的：研究tristetraprolin（TTP）在血管生成中的作用。方法：构建可以超表达TTP的重组腺病毒，感染原代内皮细胞后进行体外三维血管生成检测。结果：在体外三维血管生成模型检测中，超表达TTP组从第1天开始就明显地促进血管生成，在之后的几天维持并且加大了这种趋势。进一步的统计分析发现，这种促进作用基本是通过促进血管出芽来实现的，而至少在早期对血管芽的生长基本没有影响。结论：TTP对血管生成的促进作用，更多的是通过促进出芽而不是促进血管芽生长来实现的。在血管生成过程中TTP迅速下调，并维持在一个较低水平上。