揭示α-突触核蛋白与帕金森病的关系：α-突触核蛋白单克隆抗体的研究

目的：α-突触核蛋白(α-Synuclein，α-Syn)是与帕金森病的发病密切相关的蛋白质。关于这种蛋白质在脑内神经元的亚细胞分布迄今尚无定论。制备α-Syn抗体探讨α-Syn在亚细胞的定位。方法：实验于2004—01／05在北京老年医学研究所神经生物研究室完成。采用重组的人α-Syn免疫小鼠，并将其脾细胞与骨髓瘤融合制备出杂交瘤，利用免疫组化和Western blot法筛选阳性克隆，获得一特异性抗α-Syn单克隆抗体。结果：噬菌体多肽展示分析表明，该抗体识别人α-Syn C-末端的一段特异序列，但该序列与大鼠和小鼠的相应序列差一个氨基酸。免疫印记分析表明，该抗体能够检测人、大鼠与小鼠脑组织中的α-Syn。用该抗体进行免疫组化染色结果显示，α-Syn免疫阳性物质主要存在于神经元末梢与核中。结论：所制备的单克隆抗体对α-Syn具有特异性，可用于人、大鼠和小鼠的α-Syn研究。     

阿尔茨海默病患者皮质额叶基因表达谱研究

目的：通过研究阿尔茨海默病(Alzheimerdisease，AD)患者皮质额叶中发生差异表达的基因，揭示AD发生、发展的分子基础。方法：利用基因芯片分析3例AD患者皮质额叶中基因表达谱，通过与4例正常对照间的比对，寻找存在表达差异的基因。结果：所检测的5000个基因中，共有49个基因存在着差异表达。在患者中13个基因表达水平升高，36个基因表达水平降低。上述基因与多种生理过程，如氧化应激、胆固醇平衡、钙信号转导、炎症反应等密切相关。结论：AD的发生、发展涉及多种基因表达水平和多个生理过程的改变。     

小鼠纹状体多巴胺水平的节律性变化

目的：研究小鼠纹状体多巴胺等神经递质是否具有节律性变化，为进一步研究黑质多巴胺能神经元的功能提供实验依据。方法：实验于2004—04／08在北京老年病医疗研究中心神经生物学实验室进行。取60只C57BL／6J小鼠，在12h光照：12h黑暗条件下饲养两周，两周后随机分为6组，于24h内分6个时间点(9：00，13：00，15：00，21：00，1：00，5：00)分离小鼠的纹状体，用高氯酸提取纹状体中的多巴胺、3，4-双羟苯乙酸、5-羟色胺，其含量用反相高压液相色谱分离-电化学检测技术检测；纹状体中的蛋白含量用Lowry法检测，用作内部对照。多巴胺、3，4-双羟苯乙酸、5-羟色胺的含量用实测含量／蛋白含量(μg／g)表示。实验数据用均值&;#177;标准误来表示。结果：60只小鼠全部进入结果分析。①纹状体多巴胺水平：在24h内有波动，其中低谷处于1：00[（125．59&;#177;5．29)μg／g]，与9：00，21：00相比有显著差异[(151．34&;#177;3．35)，(147．68&;#177;2．5)μg／g，P&;lt;0．05]，波峰处于9：00。②3，4-双羟苯乙酸水平：在24h内也有波动，其低谷同样位于1：00[(6.59&;#177;0.32)μg／g]，与9：00相比有显著差异[(9.71&;#177;0．62)μg／g，P&;lt;0．05]。⑧5-羟色胺水平在各时间点之间无显著性差异(P&;gt;0．05)。结论：小鼠纹状体的多巴胺和3，4-双羟苯乙酸水平有节律性变化．5-羟色胺无节律性变化。表明黑质多巴胺能神经元具有节律性兴奋的特点．提示多巴胺的代谢可能受生物节律调节中枢控制。     

1-甲基-4-苯基-吡啶盐致多巴胺能细胞系MES23.5死亡机制的研究

帕金森病 (Parkinson’sdisease,PD)是常见的老年神经系统变性病 ,其主要病理特征是黑质多巴胺能神经元的选择性丢失。Longston等发现 1 甲基 4 苯基 吡啶 (MPTP)能对多巴胺能神经元造成选择性损害 ,产生与PD类似的临床特点及病理改变 ,而MPTP的神经毒性是通过其代谢产物 1 甲基 4 苯基 吡啶盐 (MPP+ )起作用的。方法、结果和讨论 :本研究应用多巴胺能神经细胞系MES2 3 5 ,观察在MPP+ 作用下 ,细胞的存活率、线粒体膜电位以及氧化应激指标的改变 ,以期能了解MPP+ 对多巴胺能细胞的毒性作用机制。培养的MES2 3 5细胞经MPP+(…     

α-突触核蛋白过表达对黑质多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶表达的影响

目的 研究α-突触核蛋白(α-synuclein，α-SYN)过表达对多巴胺能神经元酪氨酸羟化酶(TH)表达的影响。方法 在α—SYN基因转染的MES 23．5大鼠黑质多巴胺能神经元细胞系，分别用免疫组织化学、免疫荧光、Western blot等方法分析α-SYN和TH的表达以及两者之间的关系。通过绘制生长曲线和MTT测试细胞氧化还原活性，观察α—SYN基因转染细胞的生长和损伤情况。结果 α-SYN过表达明显抑制MES 23．5多巴胺能神经元的TH表达，但对该细胞的生长和增殖无明显影响，也不引起该细胞损伤。结论 α-SYN过表达对多巴胺能神经元的TH表达具有抑制作用。     

人类外周血hPer1基因节律性表达的研究

目的生物节律广泛存在于人类生活和工作中,为研究正常人节律基因表达特点,定量检测正常年轻人外周血中节律基因Per1(humanPeriod1,hPer1)的表达。方法实验对象为7名大学生(H1-H7),年龄24￣30岁,男性3名,女性4名。其中H7于实验前1天晚上值夜班。分别在09:00,15:00,21:00,03:00,09:00点抽取肘静脉血6mL,抽提全血总RNA。应用竞争性RT-PCR方法定量检测实验对象外周血中每人每个时间点hPer1基因的表达。结果人类外周血中hPer1基因的表达有显著节律性。表达高峰在09:00而低峰在21:00,两者之间的差异达2.29±0.9倍(P<0.01),第2天09:00hPer1基因表达水平又回到最高峰。结论hPer1基因的表达在外周血中存在节律性。     

视交叉上核脑片与NIH/3T3成纤维细胞共培养模型的建立

目的建立视交叉上核(suprachiasmatic nucleus,SCN)脑片与NIH/3T3成纤维细胞共培养的分子时钟诱导模型。方法选用7日龄SD大鼠,分离SCN脑片或皮层脑片,分别与NIH/3T3细胞共培养,分为SCN共培养组和对照组皮质共培养组,6d后连续24h每间隔6h收集NIH/3T3细胞,抽提细胞总RNA,实时定量RT-PCR检测时钟基因Per1mRNA水平。结果SCN共培养组Per1的表达均表现明显的节律性(P=0.001),对照组大脑皮质共培养组Per1基因表达均无明显节律性变化。结论成功建立SCN脑片与NIH3T3细胞共培养模型并诱导细胞内分子时钟的节律性表达,为研究SCN调控外周组织细胞生物节律提供有力工具。     

奥曲肽治疗急性胰腺炎的临床疗效及对血清细胞因子的影响

目的:观察奥曲肽治疗急性胰腺炎(AP)的临床疗效,探讨其在AP发病机制中的作用。方法:90例AP患者按治疗方法不同分为A组、B组、C组,A组给予醋酸奥曲肽治疗,B组给予乌司他丁治疗,C组给予甲磺酸加贝酯治疗。治疗前后测定三组患者血清细胞因子(IL-2、IL-6、IL-8)水平,观察患者主要症状和体征,重症急性胰腺炎(SAP)患者的并发症发生率及病死率情况,评价临床疗效。结果:A组临床疗效总有效率为83.3%,B组为60.0%,C组为46.7%,临床疗效总有效率A组B组C组,相比较均有统计学差异(P0.05);治疗后,A、B二组IL-2水平与治疗前比较明显上升(P0.05),IL-6和IL-8水平明显下降(P0.05),C组IL-2、IL-6和IL-8水平与治疗前比较差异无统计学意义(P0.05),治疗后三组组间比较均有统计学差异(P0.05);三组SAP患者并发症发生率A组B组C组,相比较均有统计学差异(P0.05);A组无死亡病例,B组死亡率为21.1%,C组死亡率为34.8%,三组死亡率比较均有统计学差异(P0.05)。结论:奥曲肽治疗AP是安全、有效的药物,并且可以有效抑制炎症反应,值得临床推广应用。     

帕金森病小鼠模型中分子时钟的变化

帕金森病人和帕金森病动物模型中都存在极为显着的节律丧失现象，包括体温变化节律性的丧失，心跳节律性的丧失，排尿节律性的丧失等。虽然在这些节律性丧失已经在生理水平和行为学水平得到反复的证实，但其分子机制仍然没有得到认识。近年来，一系列的节律基因逐步得到发现，包括Per1，Per2，Per3，Bmal1，Clock，Cry1，Cry2等。这些基因在转录和翻译水平相互调节构成网络，从而在分子，细胞，组织和整体水平产生节律。本研究使用MPTP处理C57小鼠，而制备出帕金森病小鼠模型。制模成功5天后，连续24小时，每隔4小时，处死小鼠。取小鼠大脑，纹状体，心脏，肝脏。     

揭示α-突触核蛋白与帕金森病的关系:α-突触核蛋白单克隆抗体的研究

目的:α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)是与帕金森病的发病密切相关的蛋白质。关于这种蛋白质在脑内神经元的亚细胞分布迄今尚无定论。制备α-Syn抗体探讨α-Syn在亚细胞的定位。方法:实验于2004-01/05在北京老年医学研究所神经生物研究室完成。采用重组的人α-Syn免疫小鼠,并将其脾细胞与骨髓瘤融合制备出杂交瘤,利用免疫组化和Westernblot法筛选阳性克隆,获得一特异性抗α-Syn单克隆抗体。结果:噬菌体多肽展示分析表明,该抗体识别人α-SynC-末端的一段特异序列,但该序列与大鼠和小鼠的相应序列差一个氨基酸。免疫印记分析表明,该抗体能够检测人、大鼠与小鼠脑组织中的α-Syn。用该抗体进行免疫组化染色结果显示,α-Syn免疫阳性物质主要存在于神经元末梢与核中。结论:所制备的单克隆抗体对α-Syn具有特异性,可用于人、大鼠和小鼠的α-Syn研究。