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Asp896~Val911缺失的阴离子交换蛋白1C末端表达质粒的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 构建Asp896-Val911缺失的阴离子交换蛋白1(Anion Exchange1,AE1)C末端表达质粒。方法 利用PCR方法,以pFAST-AE1-C-end为模板,扩增出AE1后16位氨基酸Asp896-Val911缺失的C末端基因,将其克隆至pGADT7载体上。用醋酸锂法将构建好的pGADT7-AE1-c-end-truncation转染酶母菌AH109,观察其在选择性培养基上的表达情况。结果 成功构建了AE1缺失后16位氨基酸的C末端表达质粒。结论 重组质粒pGADT7-AE1-c-end-truncation对酵母无毒性,不能激活检测基因,可作为酵母双杂交系统中的靶基因。 相似文献
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目的研究安氟醚对心肌缺血小鼠心肌细胞保护作用的潜在机制。方法(1)用随机数字表法将成模后小鼠分为2组:对照组和安氟醚组,每组20只。小鼠经腹腔注射异丙肾上腺素3 mg·kg-1制备心肌缺血模型。在心脏搭桥术前,对照组小鼠用异戊巴比妥(150 mg·kg-1)麻醉,搭桥完成后腹腔注射等体积生理盐水;安氟醚组用安氟醚(1.0 mg·kg-1)麻醉,术后4 h腹腔注射(0.2 mg·kg-1)安氟醚处理;每天1次,连续3 d。用视觉模拟评分(VAS)评估小鼠术后疼痛程度。(2)处死2组小鼠后获取心肌细胞,将细胞分为2组:安氟醚组和对照组;另外,将心肌细胞分为4组:对照组(等体积PBS)、安氟醚组(安氟醚1 mg·mL-1)、安氟醚+磷酸肌醇3激酶(PIK3)抑制剂组(安氟醚+PI3K抑制剂,均1 mg·mL-1)和PI3KI抑制剂组(PI3K抑制剂1 mg·mL-1)。通过细胞计数试剂盒法检测细胞活力(光密度值),MTT法测定细胞增殖(光密度值),缺口末端标记法和流式细胞仪分别检测2组和4组的细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测免疫球蛋白结合蛋白(BIP)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT enhancer binding protein,CHOP)和PI3KI/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白表达水平。结果(1)安氟醚组和对照组的VAS分别为(6.53±1.37)和(13.21±2.35)分,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)安氟醚组和对照组的BIP蛋白相对表达水平分别为0.23±0.03和1.04±0.12;这2组的CHOP蛋白表达分别为0.47±0.01和0.98±0.09;这2组的caspase-3蛋白表达分别为0.34±0.01和1.00±0.12;这2组的caspase-8蛋白表达分别为0.27±0.01和1.03±0.08;这2组的p-PI3K蛋白表达分别为1.53±0.16和0.98±0.08;这2组的p-Akt蛋白表达分别为1.69±0.19和0.99±0.11;这2组的心肌细胞存活率分别为(0.87±0.12)%和(0.62±0.03)%;这2组的细胞凋亡率分别为(0.33±0.01)%和(1.08±0.09)%,安氟醚组与对照组比较,上述指标差异均有统计学意义(均P<0.05)。安氟醚+PI3K抑制剂组和对照组的细胞存活率分别为(0.91±0.05)%和(0.98±0.06)%;这2组心肌细胞凋亡率分别为(1.12±0.12)%和(1.02±0.09)%;安氟醚+PI3K抑制剂组与对照组比较,上述指标的差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论安氟醚有助于减轻心脏手术中小鼠的疼痛并通过PI3K/Akt信号通路抑制心肌细胞的凋亡。 相似文献
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酵母双杂合系统AD端阴离子交换蛋白C-末端表达质粒的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
利用PCR方法,从阴离子交换蛋白1(AE1)全长cDNA中扩增出约350bp c末端cDNA片段,测序后将其克隆至pGADT7载体上,用醋酸锂法构建好的pADT7-AE1-c末端转染酵母菌HA109,观察其在选择性培养基上的表达情况。结果表明,获得了530bp AE1c-末端cDNA,pGADT7-AE1-c末端对酵母无毒性,不能激活检测基因,可作为酵母双杂合系统中的靶基因。 相似文献
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丹参素预防大鼠缺血再灌性心律失常的实验研究 总被引:2,自引:0,他引:2
采用离体心脏灌流及冠脉结扎方法,复制大鼠心肌缺血再灌注损伤的模型,观察丹参素对缺血及再灌性心律失常的保护作用。实验表明,离体灌注大鼠缺血期心律失常的发生率为85.7%,主要为传导阻滞及室性早搏和室性心动过速,但无室性纤颤发生;再灌期心律失常发生率高达100%,主要为室性早搏和室性心动过速,室性纤颤发生率为57.1%。0.5μmol/L异搏定和4mg/L丹参素均能使大鼠缺血再灌性心律失常发生率明显降低、持续时间缩短,但以丹参素的预防效果更佳。上述剂量的异搏定和丹参素,分别使缺血性心律失常发生率降低了33.3%和50.0%;再灌性心律失常发生率降低了71.4%和85.7%(P分别<0.05和0.001)。可见丹参制剂具有预防缺血再灌性心律失常的作用 相似文献
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目的:获得血型糖蛋白A(GPA)cDNA片段,并构建酵母双杂合BD端表达质粒。方法:利用RT-PCR方法,从K562细胞mRNA中扩增GPAcDNA片段,约410bp。测序后将其克隆至pbridge载体上。用醋酸锂法将构建好的pbridge-GPA转染酵母菌AH109,观察其在选择性培养基上的表达情况。结果:克隆到的410bpGPAcDNA编码的氨基酸序列基本与公布序列相同。pbridge—GPA转染酵母菌后,在SD/Gal/—His/Ura培养基上出现1mm大小白色菌落。结论:获得了血型糖蛋白AcDNA克隆,pbridge—GPA对酵母无毒性,不能激活检测基因,可作为酵母双杂合系统中的靶基因。 相似文献
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离体大鼠心肌缺血再灌注损伤中高能磷酸化合物的时相变化及丹参素的保护作用 总被引:7,自引:0,他引:7
本实验用Wistar雄性大鼠,以Langendorf离体心脏灌流为模型,用高效液相色谱法观察不同缺血时间及再灌时心肌组织高能磷酸化合物的变化。研究结果表明,短时间缺血(15min,20min)再灌20min,心肌中磷酸肌酸(PCr),三磷酸腺苷(ATP),腺苷酸总量(TAN)和能荷(E)均显著高于单纯缺血组,长时间缺血(30min,40mim)再灌20min,心肌中ATP,TAN,E均明显低于缺血组;而心肌PCr、ATP,及E极显著高于未保护组。上述结果提示丹参素的保护作用主要为调节能量代谢(减少ATP的分解和增加ATP的生成)和防止自由基的毒性作用,从而增加心肌能量的储备,对心肌高能磷酸化合物具有明显保护作用。 相似文献
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雾化吸入平阳霉素法致小白鼠肺纤维化的观察 总被引:3,自引:0,他引:3
本实验采用雾化吸入平阳霉素的方法,复制小白鼠肺纤维化的模型,结果表明,吸入后15天时,肺组织形态学呈3级肺泡炎改变,肺组织脂质过氧化物含量显著升高(P<0.001);吸入后30天时,肺组织形态学呈1级肺纤维化改变。 相似文献
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放疗对恶性肿瘤患者红细胞膜带3蛋白表达和功能的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]研究放疗对恶性肿瘤患者红细胞膜带3蛋白的表达和功能的影响.[方法]随机抽取8例恶性肿瘤患者并取其治疗前后的红细胞,应用Cl-荧光探针6-甲基-3-磺丙基-1-喹啉-水化合物(SPQ)检测其治疗前后红细胞膜带3蛋白的阴离子转运活性,并通过Westernblot检定治疗前后带3蛋白表达量的变化.[结果]8例恶性肿瘤患者放疗后红细胞膜带3蛋白的离子转运活性均明显减弱,其中6例患者红细胞膜带3蛋白表达减少.[结论]带3蛋白的表达和功能与肿瘤细胞的增殖和凋亡相关. 相似文献