二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡相关基因的差异表达

目的探讨二烯丙基三硫(diallyl trisulfide,DATS)诱导人胃癌MGC803细胞凋亡的分子机制。方法MTT法检测DATS对MGC803细胞的生长抑制作用,荧光显微镜和流式细胞仪观察DATS作用后的细胞凋亡。人细胞凋亡基因芯片检测DATS作用MGC803细胞的凋亡相关基因表达谱,RT-PCR验证凋亡相关基因。结果MTT结果显示,4、8、12、16、24mg.L-1DATS对MGC803细胞生长的抑制率从11%增至78%,呈明显量效关系(P<0.05)。荧光显微镜下,DATS处理后的MGC803细胞核染色质着橘红色并呈固缩状或片段状。流式细胞仪检测显示,8、12、16、24mg.L-1DATS作用24h后,出现典型亚二倍体峰,平均凋亡率分别为11.4%、23.7%、27.4%、31.1%(P<0.05)。人细胞凋亡基因芯片检测结果表明,16mg.L-1的DATS作用4h后出现16个凋亡相关基因表达差异,RT-PCR证实,SODD基因mRNA表达上调、Apaf-1基因mRNA表达下调(P<0.05)。结论DATS诱导人胃癌MGC803细胞凋亡可能与多个基因和信号转导通路作用有关。     

二烯丙基二硫对人胃癌细胞RORα蛋白表达的影响

目的研究二烯丙基二硫(DADS)处理前后人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体α(R ORα)蛋白表达变化情况。方法实验分对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养及细胞形态学观察,采用免疫细胞化学、Western blot分析RORα蛋白水平的表达;半定量RT-PCR检测RORα核酸水平的表达。结果DADS处理24 h后,细胞形态学发生明显改变;R ORα蛋白在人胃癌MKN28、MGC803细胞核中呈强阳性表达,与对照组相比表达明显上调;半定量RT-PCR灰度扫描定量分析结果显示,DADS处理24 h后,RORα蛋白表达在MGC803、MKN28细胞中的(0.97±0.01)、(0.91±0.01)较对照组的(0.44±0.02)、(0.72±0.01)显著上调(P<0.01或P<0.05);Western blot分析及灰度扫描显示,DADS处理人胃癌MGC803、MKN28细胞8、12和24 h后,RORα蛋白表达分别为(0.71±0.03)和(0.79±0.01)、(0.87±0.01)和(0.88±0.02)以及(1.31±0.01)和(0.96±0.02)较未处理组的(0.32±0.01)和(0.68±0.02)明显上调,差异有显著性(P<0.01或P<0.05)。结论DADS可诱导人胃癌细胞分化,其诱导分化作用可能与上调R ORα蛋白表达有关。     

二烯丙基二硫对人胃癌细胞维甲酸相关孤核受体α表达的影响

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)处理前后人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体α(RORα)表达变化情况.方法 将胃癌SGC7901、MGC803细胞分为对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养及细胞形态学观察,采用免疫细胞化学、Western blot分析RORα的表达;半定量RT-PCR检测RORα核酸水平的表达.结果 DADS处理24 h后,胃癌SGC7901、MGC803细胞形态学发生明显改变;RORα在人胃癌SGC7901、MGC803细胞核中呈强阳性表达,与对照组比较表达显著上调;半定量RT-PCR灰度扫描定量分析结果显示,DADS处理24 h后,SGC7901、MGC803细胞中RORα的表达量[(1.09±0.01)与(0.97±0.01)]较对照组[(0.45±0.03)与(0.44±0.02)]显著上调,差异均有统计学意义(P＜0.01);Western blot分析及灰度扫描显示,DADS处理人胃癌MGC803、SGC7901细胞8、12、24 h后,RORα蛋白表达量较未处理组显著上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 DADS可诱导人胃癌细胞分化,其诱导分化作用可能与上调RORα表达有关.     

Toll样受体3与肿瘤的研究进展

1984年,果蝇的Toll样蛋白被发现,约有八个同源体.后来在哺乳动物中也发现了果蝇Toll样蛋白的一种同源体,称为Toll样受体(Toll-like receptor,TIR).TLRs是广泛分布在免疫细胞尤其非特异免疫细胞以及某些体细胞甚至一些肿瘤细胞表面的一类模式识别受体(pattem recognition receptor,PRR),它们可以直接识别结合某些病原体或其产物所共有的     

Toll样受体3与肿瘤的研究进展

1984年,果蝇的Toll样蛋白被发现,约有八个同源体。后来在哺乳动物中也发现了果蝇Toll样蛋白的一种同源体,称为Toll样受体（Toll-like receptor,TIR）。TLRs是广泛分布在免疫细胞尤其非特异免疫细胞以及某些体细胞甚至一些肿瘤细胞表面的一类模式识别受体（pattern recognition receptor,PRR）,它们可以直接识别结合某些病原体或其产物所共有的高度保守的特定分子模式（pathogen associated molecular PRR），它们可以直接识别结合某些病原体或其产物所共有的高度保守的特定分子模式（pathogen associated molecular pattern，PAMP）子结构，即病原相关分子模式.     

Mcl-1在二烯丙基二硫诱导人白血病HL-60细胞G_2/M阻滞中的作用

目的:探讨Mcl-1在二烯丙基二硫(DADS)诱导人白血病HL-60细胞周期阻滞过程中的作用。方法:CCK-8检测DADS抑制HL-60细胞的作用;流式细胞术观察DADS对HL-60细胞的周期阻滞效应;West-ern blotting分析DADS处理HL-60细胞后Mcl-1、PCNA(细胞核增殖抗原)、CDK1(周期依赖激酶1)表达情况;RNAi干扰Mcl-1观察Mcl-1对白血病细胞周期的影响;免疫共沉淀分析Mcl-1与PCNA、CDK1结合作用。结果:CCK-8比色结果显示,15、30、60、120、240μmol/L DADS处理HL-60细胞,细胞增殖抑制率分别为31.15%、55.88%、66.14%、75.29%、80.35%,呈浓度依赖性增加(P0.05)。流式细胞术检测显示,60μmol/L和120μmol/L DADS作用HL-60细胞24 h和48 h后,呈时间和浓度依赖性诱导HL-60细胞G2/M期阻滞(P0.05)。Western blotting分析发现60μmol/LDADS处理HL-60细胞后PCNA、Mcl-1、CDK1表达下调(P0.05)。Mcl-1基因沉默24 h后G2/M期百分率增加到19.4%,与对照组比较有显著差异(P0.05)。而Mcl-1基因沉默后加入60μmol/L DADS作用时,G2/M期百分率比60μmol/L DADS处理组增加6.0%(P0.05)。免疫共沉淀发现,HL-60细胞中存在Mcl-1与PCNA、CDK1的相互结合,DADS处理HL-60细胞后Mcl-1与PCNA、CDK1的结合作用减弱。结论:DADS能诱导HL-60细胞增殖抑制和G2/M阻滞,其抑制增殖作用与PCNA表达下调有关。Mcl-1基因沉默可增强DADS对HL-60细胞G2/M期阻滞作用。     

晚期卵巢癌患者外周血循环肿瘤细胞的检测及其临床意义

目的:探讨晚期卵巢癌患者外周血中循环肿瘤细胞(CTC)的检测及其临床意义.方法:选择2014年6月至2016年6月永州市中心医院收治的60例晚期卵巢癌患者作为观察组,收集同期本院的30例健康志愿者作为对照组.分别抽取外周血7.5 ml,采用流式细胞仪检测卵巢癌患者一线方案化疗2周期前后及对照组外周血中EpCAM、CK19同时(+)且CD45(-)的CTC的变化情况,同时分析其与临床特征及化学疗效的关系以及比较化疗前后CTC数目评价与RECIST疗效评价标准之间的关系,并随访患者的无进展生存期(PFS),分析患者治疗过程中CTC数目的变化与患者PFS的关系.结果:观察组中42例检测到CTC,阳性率70%,对照组未检测到CTC,两组比较,差异具有统计学意义(P<0.05).CTC阳性表达情况与卵巢癌患者的分化程度及CA125表达相关(P<0.05),与患者的年龄、肿瘤直径、腹水情况均无相关性(P>0.05).观察组中化疗前CTC阳性表达42例,阳性率为70%,化疗2周期后卵巢癌患者CTC阳性表达18例,阳性率为30%,两组差异具有统计学意义(P<0.05).化疗2周期后,CTC数目评价与RECIST疗效评价标准之间差异无统计学意义(P>0.05),且两种方法的吻合度较高(k=0.479).运用相关分析显示,CTC表达与化学疗效呈负相关(r=-0.223,P=0.009).化疗2周期后外周血中循环肿瘤细胞数目<5,其无进展生存期为13.2(11.0~15.1)个月,外周血中循环肿瘤细胞数目≥5,其无进展生存期为6.4(3.8~9.2)个月,两组差异具有统计学意义(P<0.05).结论:CTC阳性表达与卵巢癌患者的分化程度及CA125表达相关,与化疗疗效呈负相关,CTC的表达情况可以预测卵巢癌患者的化疗疗效及预后.