二烯丙基二硫在RORα抑制人胃癌细胞上皮间质转化中的作用

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）是否上调维甲酸相关孤核受体α（RORα）抑制人胃癌细胞株MGC803 细胞上皮- 间质转化（EMT）。方法相差显微镜观察MGC803 细胞形态的改变。逆转录PCR（RTPCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）、免疫荧光与免疫组织化学检测EMT 的相关分子表达。裸鼠实验检测DADS 与沉默RORα对移植瘤生长的影响。结果相差显微镜显示,沉默RORα细胞较MGC803 细胞大小与形状差异更明显。DADS作用后,细胞大小较一致,呈圆形或椭圆形,梭形细胞减少,异型性下降。RT-PCR与Western blot显示,DADS 处理后较处理前各组RORα mRNA 与蛋白表达上调（p <0.05）。DADS 作用对照组与空载体组较沉默组效果更为明显（p <0.05）。RORα沉默较对照组和空载体组细胞锌指转录因子（Snail）和波形蛋白（Vimentin）mRNA与蛋白表达上调,而E- 钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA 与蛋白下调（p <0.05）。DADS处理后,各组Snail蛋白下调、Vimentin mRNA与蛋白下调和E-cadherin mRNA与蛋白上调（p <0.05）。免疫荧光显示,沉默组细胞Snail与Vimentin阳性表达较对照组增强,而E-cadherin阳性表达减弱。DADS作用后,结果相反。裸鼠移植瘤实验显示,RORα沉默组移植瘤较对照组生长加快和体重增加（p <0.05）,增殖细胞核抗原（Ki-67）、Snail、CD34及Vimentin 阳性表达较对照组增加,而E-cadherin阳性降低。DADS 处理各组移植瘤生长与体积减慢与减小,Ki-67、Snail、CD34与Vimentin阳性表达较对照组减弱,而E-cadherin阳性表达增强。结论DADS 通过上调RORα 可体内外抑制人胃癌MGC803 细胞EMT。     

DADS上调RORα抑制人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭

目的 研究二烯丙基二硫(DADS)是否通过上调维甲酸相关孤核受体α(RORα)表达抑制人胃癌MGC803细胞增殖、细胞周期与迁移侵袭。方法实验组分为6组,对照组,空载体组,RORα干扰组(miR-RORα),DADS组,空载体联合DADS组,miR-RORα联合DADS组。Western blot检测RORα、MMP-9与TIMP3蛋白表达。MTT、流式细胞术、迁移和侵袭实验分别检测细胞增殖、细胞周期与迁移侵袭的改变。结果DADS处理细胞24 h后,与对照组和空载体组比较,DADS上调RORα和TIMP3、下调MMP-9蛋白表达。干扰组较对照组与空载体组RORα表达明显下调。与DADS处理组比较,干扰RORα表达上调MMP-9、下调TIMP3蛋白表达。MTT实验显示,DADS抑制MGC803细胞增殖,而干扰RORα表达促进增殖。流式细胞术显示,DADS诱导G2/M期阻滞,下调RORα削弱其作用。迁移实验显示,DADS处理组迁移距离明显减少。RORα干扰组迁移距离明显高于对照组和空载体组。侵袭实验显示,DADS处理组较对照组和空载体组穿膜细胞明显减少。干扰组穿膜细胞明显多于对照组和空载体组。干扰RORα表达降低DADS对细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论DADS上调TIMP3表达,下调MMP-9表达,抑制MGC803细胞增殖与迁移侵袭,其作用机制与上调RORα表达有关。     

双向电泳分析二烯丙基二硫诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异

目的 以二烯丙基二硫(DADS)诱导人急性早幼粒细胞性白血病HL60细胞分化为模型，利用双向凝胶电泳(2-DE)技术分析比较DADS诱导HL60细胞分化的蛋白表达差异。方法 细胞形态学观察与NBT还原反应结合验证HL60细胞的分化；用双向电泳技术分析蛋白表达差异。结果 分化后细胞形态发生明显变化，细胞核变小；NBT还原能力明显增强。双向电泳技术分析筛选了32个差异点。结论 双向电泳技术可直接反映细胞蛋白表达的变化，DADS诱导HL60细胞分化后导致部分蛋白的表达增加和降低。     

二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞作用的研究

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胃癌MGC803细胞的作用机制。方法采用MTT法和流式细胞仪检测不同浓度的DADS对MGC803细胞的生长抑制作用和细胞周期分布影响。结果随着DADS浓度的增加,MGC803细胞的生长抑制率逐渐上升;细胞的G0/G1期比率下降,G2/M期比率逐渐上升。结论抑制癌细胞生长和诱导癌细胞周期阻滞于G2/M期是DADS的抗肿瘤机制之一。     

二烯丙基二硫对人胃癌细胞维甲酸相关孤核受体α表达的影响

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)处理前后人胃癌细胞中维甲酸相关孤核受体α(RORα)表达变化情况.方法 将胃癌SGC7901、MGC803细胞分为对照组和DADS处理组,进行体外细胞培养及细胞形态学观察,采用免疫细胞化学、Western blot分析RORα的表达;半定量RT-PCR检测RORα核酸水平的表达.结果 DADS处理24 h后,胃癌SGC7901、MGC803细胞形态学发生明显改变;RORα在人胃癌SGC7901、MGC803细胞核中呈强阳性表达,与对照组比较表达显著上调;半定量RT-PCR灰度扫描定量分析结果显示,DADS处理24 h后,SGC7901、MGC803细胞中RORα的表达量[(1.09±0.01)与(0.97±0.01)]较对照组[(0.45±0.03)与(0.44±0.02)]显著上调,差异均有统计学意义(P＜0.01);Western blot分析及灰度扫描显示,DADS处理人胃癌MGC803、SGC7901细胞8、12、24 h后,RORα蛋白表达量较未处理组显著上调,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 DADS可诱导人胃癌细胞分化,其诱导分化作用可能与上调RORα表达有关.     

二烯丙基二硫对人胃癌SGC7901细胞增殖及周期的影响

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人胃癌SGC7901细胞增殖及周期分布的影响。方法体外培养SGC7901细胞,采用MTT比色实验、细胞计数法和流式细胞术分析DADS对SGC7901细胞增殖的抑制作用与对细胞周期分布的影响。结果MTT法显示,不同浓度DADS(50、100、150、200、250μmol/L)处理SGC7901细胞96 h后,生长抑制率分别为21.07%、49.96%、59.73%、67.64%、70.49%,DADS抑制作用随浓度增加逐渐增强(P<0.05)。细胞计数法表明:常规培养的SGC7901细胞群体倍增时间分别为24.35 h,当DADS浓度由50μmol/L增加到200μmol/L时,其细胞群体倍增时间由27.28 h增加到71.98 h(P<0.05)。流式细胞仪分析发现,50、100和200μmol/L DADS呈浓度依赖性将SGC7901细胞阻滞在G2/M期。结论DADS具有抑制人胃癌SGC7901细胞增殖的作用,且其抑制增殖作用与G2/M期阻滞有关。     

二烯丙基二硫下调β-catenin抑制人胃癌MGC803细胞EMT

目的　研究二烯丙基二硫（DADS）抑制人胃癌MGC803细胞EMT与形态学变化。　方法　应用相差显微镜与透射电镜观察30　mg·L^-1　DADS处理后的MGC803细胞形态学与超微结构的变化。RT-PCR与Western　blot检测β-catenin和EMT标记E-cadherin与Vimentin表达。　结果　30　mg·L^-1　DADS处理MGC803细胞24　h后,相差显微镜显示,与未处理比较,细胞圆形、椭圆形,核浆比值降低,巢状分布,均未见伪足。透射电镜显示,细胞表面微绒毛数目减少,细胞核变规整,核浆比值下降,异型性降低,细胞与细胞之间出现连接结构,细胞器增多。RT-PCR与Western　blot表明,DADS可呈时间依赖性分别下调MGC803细胞β-catenin和Vimentin　mRNA与蛋白和上调E-cadherin　mRNA与蛋白。　结论　DADS可通过下调β-catenin上调E-cadherin与下调Vimentin抑制EMT和伪足形成。     

二烯丙基二硫对人白血病细胞增殖和钙网蛋白表达的影响

观察二烯丙基二硫(DADS)对人白血病HL-60细胞增殖和钙网蛋白(CRT)表达的影响。DADS(1.25 mg/L)处理HL-60细胞24、48和72 h,siRNA抑制CRT的表达,采用MTT法检测细胞活力,实时定量PCR和Western blot检测CRT的表达。与对照组比较,DADS处理24、48和72 h组HL-6细胞的增殖水平均显著性降低,呈现时间依赖性(均P<0.05)。与对照组比较,siRNA瞬时转染显著降低了CRT mRNA的表达(P<0.05),也显著降低了细胞的增殖水平(P<0.05),与DADS具有协同效应。DADS抑制了HL-60细胞增殖,其机制可能与下调钙网蛋白的表达有关。     

二烯丙基二硫与全反式维甲酸合用对HL-60细胞的影响

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）与全反式维甲酸（ATRA）联合用药对HL-60细胞生长抑制及诱导分化的影响。方法采用M1Tr、流式细胞术检测细胞周期及生长抑制，用HL-60细胞表面分化抗原CD11b及NBT实验检测HL-60的诱导分化作用。结果DADS与ATRA联合使用可以增加HL-60细胞的生长抑制率，并将HL-60细胞阻滞在G0/G1期。CD11b的表达和NBT实验结果表明两者合用对HL-60细胞的诱导分化作用与任何一种药物单独使用差异无显著性，但当两者剂量各自减少一半时，其诱导分化作用却增加，与任何一种药物单独使用时的诱导分化作用相似。结论DADS与AT—RA联合使用可以协同抑制HL-60细胞的生长，剂量减半合用时可协同对HL-60细胞的诱导分化作用。     

二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡的作用

目的 探讨二烯丙基三硫（diallyl trisulfede，DAlS）诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的作用。方法 采用倒置显微镜、光学显微镜、透射电镜分别观察DATS诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的形态学改变以及用流式细胞术观察亚G1峰。结果 MGC-803细胞经DATS处理24h后，光镜可见细胞胞浆浓缩、核固缩深染等早期凋亡细胞；电镜可见到不同时期凋亡细胞；流式细胞术检测有亚G1峰的出现。结论 DATS具有诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用。     

RORα与REV-ERBα在人胃癌组织表达情况及其临床意义

目的 研究维甲酸相关孤儿受体(RORα)与孤儿核受体(REV-ERBα)在人正常胃组织和胃癌组织中的表达情况、相关性及其临床病理意义.方法 收集50例不同临床病理分期的胃癌患者的石蜡切片,运用免疫组织化学染色技术检测RORα与REV-ERBα在人正常胃组织及不同临床病理分期胃癌组织中的表达,同时Western blot研究RORα与 REV-ERBa在人正常胃组织及不同TMN分期人胃癌组织中的表达情况.结果 免疫组织化学染色结果显示,RORα与 REV-ERBα在人胃癌组织中表达明显降低,同时RORα与 REV-ERBα的表达水平与胃癌患者TMN分期(P =0.013、 0. 010)及有无淋巴结转移(P=0.001、0. 002)密切相关,与患者年龄、性别及肿瘤大小无相关性.McNemar检验显示 RORα与REV-ERBα在人胃癌组织中的表达呈正相关性(Kappa =0. 377, P =0. 007). 同时 Western blot 结果显示 RORα与REV-ERBα在人胃癌组织中表达明显下降,且与 TMN分期有显著相关性(P<0.05).结论 RORα与REV-ERBα在人胃癌组织中表达降低与人胃癌组织的TMN分期及有无淋巴结转移有密切关联,并且RORα与REV-ERBα可能在人胃癌组织中存在协同表达及调控,从而影响胃癌的发生与发展.     

二烯丙基二硫对人胃癌MGC803细胞JNK、ATR、cyclinB1的影响

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)调节JNK和ATR活性、cyclinB1表达与人胃癌MGC803细胞增殖的关系. 方法 实验分为两组:未处理组和30 mg/L DADS处理组,采用Western blot、免疫细胞化学及图像分析等方法,观察DADS对人胃癌MGC803细胞的JNK、ATR、cyclinB1的影响. 结果 Western blot结果显示:30 mg/L DADS刺激了MGC803细胞中JNK1的活化,刺激后10～20 min作用效果最强,30 min恢复正常(P<0.05);磷酸化ATR在MGC803细胞中DADS处理15 min后被激活,并呈时间依赖性(P<0.05),而ATR总蛋白表达均无改变.免疫细胞化学及图像分析结果显示,未处理组cyclinB1表达呈弱阳性,而DADS处理组表达呈强阳性,阳性率明显高于未处理组,且DADS处理组光密度值显著高于未处理组(P<0.05). 结论 JNK1与ATR活化及cyclinB1表达增强与DADS抗人胃癌MGC803细胞增殖有关.     

二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡及对Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨二烯丙基三硫（dially trisulfide，DATS）对人胃癌MGC-803细胞凋亡和凋亡调控基因Bcl-2和Bax的影响。方法用光学显微镜，荧光显微镜，流式细胞术检测凋亡，免疫组化研究人胃癌MGC-803细胞Bcl-2，Bax表达的变化。结果在光学显微镜及荧光显微镜下，通过DATS作用后的胃癌细胞出现了凋亡的典型形态学改变；流式细胞术检测可见亚G1峰出现。免疫组化显示，经DATS处理后，Bax的表达增强（P〈0．05），Bcl-2表达未见明显改变。结论Bcl-2基因家族可能参与了DATS诱导的MGC-803细胞凋亡。     

二烯丙基三硫下调肉毒素底物1和细胞分裂周期蛋白42的表达对Hela细胞运动的影响

目的研究二烯丙基三硫(DATS)对Hela细胞迁移运动能力的影响及其作用机制。方法用100μmol/L的DATS处理Hela细胞24 h(以等量的PBS为对照),Transwell小室观察细胞体外迁移能力的变化,Western blot检测Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)和细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)蛋白表达情况。结果 DATS处理组的迁移运动能力比对照组明显减弱(P<0.01),且Rac1和Cdc42蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论 DATS可以抑制Hela细胞的迁移运动能力,下调Rac1和Cdc42蛋白的表达是其作用机制之一。     

二烯丙基二硫对人白血病细胞HL-60增殖、细胞周期及p21表达的影响

目的观察二烯丙基二硫(DADS)作用于人白血病细胞系HL-60后，细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p21表达的变化，探讨DADS抑制HL-60增殖、诱导G／M阻滞的作用机制。方法不同浓度DADS作用HL-60后，MTF法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期，Western blot检测p21蛋白水平。结果在一定浓度范围之内，DADS能抑制HL-60细胞增殖，细胞周期发生G2／M期阻滞，并上调p21蛋白水平。结论DADS能通过上调p21的表达而抑制HL-60增殖，诱导其G／M期阻滞。     

二烯丙基二硫下调uPA和MMP9抑制乳腺癌细胞侵袭迁移

目的 研究大蒜提取物二烯丙基二硫(DADS)对MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞侵袭迁移的作用。方法采用不同浓度(0,0,200,0 μmol/L)DADS处理MCF-7和MDA-MB-231两种人乳腺癌细胞24 h,Transwell侵袭实验检测DADS对细胞侵袭能力的影响;划痕愈合实验观察DADS对细胞迁移能力的改变;western blot检测两种细胞中尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达。结果Transwell实验发现DADS呈浓度依赖性抑制MCF-7和MDA-MB-231两种乳腺癌细胞的侵袭,划痕愈合实验则发现DADS呈浓度依赖性抑制两种乳腺癌细胞的迁移。与此同时,Western blot结果显示DADS可浓度依赖性下调侵袭迁移相关蛋白uPA和MMP9的表达。结论DADS可下调uPA和MMP9表达,抑制乳腺癌细胞侵袭迁移。     

二烯丙基二硫对人鼻咽癌CNE2细胞G1期的阻滞作用

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)对人鼻咽癌CNE2细胞G1期的阻滞作用及可能机制.方法 体外培养人鼻咽癌CNE2,采用MTT比色实验、流式细胞术和免疫细胞化学的方法分析DADS对CNE2细胞增殖的押制作用、细胞周期分布的影响及细胞周期相关蛋白的表达.结果 MTT法显示,不同浓度(30μmol/L、60μmol/L、120μmol/L、240μmol/L)DADS处理CNE2细胞48h后,CNE2细胞的生长有明显的抑制作用,其增殖抑制率分别为6.59%、14.06%、26.50%和62.37%,呈明显的剂量依赖关系(P<0.05).流式细胞仪分析结果显示,DADS明显地将CNE2细胞阻滞在G1期.免疫细胞化学分析表明,在G1期阻滞同时有p21WAF1砌蛋白表达上调,CycliN-E、C-myc蛋白表达下降.结论 对人鼻咽癌CNE2细胞的抑制增殖作用与G1期阻滞有关,其机制可能与上调p21WAF1蛋白表达,下调Cyclin-E、C-myc蛋白表达有关.     

二烯丙基二硫对CD44+人胃癌AGS细胞生长的影响

目的分析二烯丙基二硫(DADS)对CD44⁺胃癌AGS细胞增殖与周期分布的作用,为DADS抑制胃癌作用机制研究提供进一步实验依据。方法经免疫磁珠技术富集人胃癌细胞株AGS中的CD44⁺细胞,流式细胞术检测CD44⁺细胞比率。肿瘤球形成、Transwell迁移及侵袭实验验证CD44⁺细胞的干样特性。MTT、软琼脂集落形成及流式细胞术分析DADS对干样细胞的生长、细胞周期分布的作用。结果免疫磁珠术富集了99.9% CD44⁺细胞。相较于未分选的AGS组,CD44⁺AGS组细胞生长2周后成球状态良好,且表现出更强迁移、侵袭能力(P＜0.05)。不同质量浓度DADS处理可明显抑制CD44⁺细胞增殖,且其抑制作用呈质量浓度依赖性(P＜0.05);30 mg/L和60 mg/L DADS可抑制CD44⁺细胞集落形成能力(P＜0.05),且可导致细胞周期呈现G₂/M期阻滞(P＜0.05)。结论DADS可明显削弱CD44⁺细胞的生长能力,与阻断细胞周期于G₂/M期有关。     

大蒜提取物二烯丙基化三硫对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

目的:研究大蒜提取物二烯丙基化三硫(diallyl trisulfide,DATS)在体外对T24细胞凋亡的诱导作用,并探讨其诱导凋亡的分子机制.方珐:应用荧光染色形态学观察DATS作用后T24细胞凋亡形态学改变.并应用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化.采用蛋白质印迹法检测不同浓度DATS作用后T24细胞中caspase-3、PARP蛋白的表达,并进一步研究其分子机理.结果:DATS可明显诱导T24细胞细胞凋亡并呈显著剂量依赖性.DATS作用于T24细胞后,procaspase-3表达减少,同时出现PARP的裂解片段,并呈显著的剂量依赖性.DAlS作用于T24细胞后,p-PDK1,p-Ser 473-Akt的表达逐渐降低,呈剂量依赖性,但t-Akt的表达不受影响.DATS作用于T24细胞后,Bax表达逐渐增高,Bcl-2的表达逐渐降低,呈显著的剂量依赖性.结论:DATS能诱导T24细胞凋亡,凋亡的诱导作用呈显著剂量依赖性.DATS诱导产生凋亡的机理可能通过抑制124细胞PI3K/Akt信号通路的激活从而调节Bcl-2家族蛋白,并最终诱导凋亡发生.