MTBP调控前列腺癌细胞的迁移和侵袭

目的研究鼠双微体2 癌基因结合蛋白（MTBP）对人前列腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法用 Western blot检测MTBP在22RV1、DU145及Lncap三种不同前列腺癌细胞中的表达水平。采用siRNA及MTBP质粒分别转染 细胞,转染48 h后,用Western blot检测MTBP蛋白的表达量,划痕实验检测细胞的平行迁移能力,Transwell实验检测细胞的垂 直迁移及侵袭能力。用Western blot 检测细胞上皮间质转化（EMT）标志分子E-cadherin蛋白表达量的变化。结果在前列腺癌 细胞中,MTBP在转移性前列腺癌细胞DU145中表达最高,Lncap细胞次之,局限性前列腺癌细胞22RV1中最低,MTBP的表达 水平与前列腺癌细胞的转移侵袭能力呈正相关。siRNA干扰及MTBP质粒转染细胞分别能显著降低或提高前列腺癌细胞中 MTBP的蛋白表达水平。划痕实验结果显示抑制MTBP的表达后,前列腺癌细胞的迁移能力降低,而MTBP过表达能显著促进 前列腺癌细胞的迁移（P<0.01）。Transwell实验发现抑制MTBP的表达可降低前列腺癌细胞的迁移侵袭能力,而MTBP过表达 后,能显著促进前列腺癌细胞的迁移侵袭能力（P<0.01）;Western blot 结果显示抑制MTBP的表达可使前列腺癌细胞的Ecadherin 蛋白表达水平升高,而MTBP过表达的前列腺癌细胞中E-cadherin蛋白表达水平降低。结论MTBP可促进前列腺癌 细胞的迁移和侵袭,其作用机制可能与诱导EMT有关。     

BMSCs来源的外泌体对大鼠睾丸缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）来源的外泌体对睾丸缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用原代培养方法 分离、培养、并鉴定大鼠BMSCs。超高速离心法提取BMSCs来源的外泌体,并采用纳米颗粒跟踪分析仪（NTA）分析其粒径大 小,透射电子显微镜观察其形态,蛋白免疫印迹法检测其典型标志蛋白质鉴定提取的外泌体。构建雄性SD大鼠睾丸缺血再灌 注损伤（IRI）模型,24 只健康雄性SD大鼠随机分为3 组;A组：假手术组（Sham 组）,B组：生理盐水处理组（I/R+NS）,C组： BMSCs来源外泌体（100 μg/mL）处理组（I/R+BMSCs-exo）。最后取各组大鼠扭转侧（左侧）睾丸并用光学显微镜检测睾丸组织 病理学结构改变以及对生精结构进行组织评分,采用生物化学的方法检测各组睾丸组织中超氧化物歧化酶的活性,丙二醛的含 量,蛋白免疫印迹法检测高迁移率族蛋B1（HMGB1）,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（caspases-3）和剪切型caspase-3的 表达。结果成功从大鼠骨髓中原代分离并培养BMSCs,并成功提取了BMSCs分泌的外泌体。动物模型中,与睾丸生精结构 正常的A组（Sham）相比,B组（I/R+NS）的睾丸生精结构明显有不同程度受损,而C处理组（I/R+BMSCs-exo）中有一定的改善 （P<0.05）。睾丸组织生化指标检测中,B组（I/R+NS）组织中的MDA的含量较A组（Sham）明显升高,而SOD的活性与A组 （Sham）相比则降低（P<0.01）,而在经外泌体处理之后的C组（I/R+BMSCs-exo）中,与生理盐水处理组B组相比,组织中MDA的 含量有一定程度降低而SOD 的水平则上调（P<0.05）。睾丸组织蛋白免疫印迹上,与A 组（Sham）相比,B 组（I/R+NS）的 HMGB1,caspase-3以及剪切型caspase-3明显升高,而C组（IR+BMSCs-exo）的HMGB1,caspase-3和剪切型caspase-3一定程度 的降低（P<0.05）。结论BMSCs来源的外泌体对睾丸缺血再灌注损伤有抗氧化,抗炎症和抗凋亡的保护作用。