PCR直接测序法分析结核分枝杆菌katG基因突变

为了了解我国结核分枝杆菌耐异烟肼（ＩＮＨ）分离株ｋａｔＧ基因突变情况，研究其临床意义。本研究通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）、ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ直测序法分析９２株结核分枝杆菌临床分离株的ｋａｔＧ基因。以Ｈ３７Ｒｖ标准株为对照，２３株药物敏感体中，２１株ｋａｔＧ基因ＳＳＣＰ分析正常，２株异常。３６株耐非ＩＮＨ药物的分离株中，２０株ｋａｔＧ基因ＳＳＣ正常，１６株异常。３３株耐ＩＮＨ分     

以CFP10/ESAT6融合蛋白为抗原的酶联免疫斑点技术在脊柱结核感染辅助诊断中的应用价值

目的评价以CFP10/ESAT6融合蛋白为抗原的酶联免疫斑点(ELISPOT)技术在脊柱结核感染辅助诊断中的应用价值。方法选取2012年5月至2013年12月广州中医药大学第一附属医院脊柱骨科和南方医科大学南方医院脊柱骨科收治的疑似脊柱结核患者91例,根据临床和细菌性诊断结果分为脊柱结核组(n=52)和对照组(n=39)。采用ELISPOT试验检测脊柱结核组和对照组外周血单个核细胞,观察斑点形成细胞的数量。患者同时接受结核菌素(PPD)皮肤试验、血清抗结核抗体检测、病灶病理学检查、抗酸杆菌涂片和病灶结核分枝杆菌培养,比较不同检测方法的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值,分析不同检测结果的一致性。结果 52例脊柱结核患者中共47例接受病灶活检穿刺病理检查,其中41例病理证实为结核。ELISPOT试验在脊柱结核诊断中的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为82.7%、87.2%、89.6%和79.1%;PPD皮肤试验的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为61.5%、46.2%、60.4%和47.4%;血清抗结核抗体试验的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为55.8%、61.5%、65.9%和51.1%。在脊柱结核患者中,ELISPOT试验的阳性率显著高于PPD皮肤试验(82.7%比61.5%,χ2=5.786,P=0.016)和血清抗结核抗体试验(82.7%比55.8%,χ2=8.847,P=0.003),与病理学检查比较差异无统计学意义(82.7%比87.2%,χ2=0.396,P=0.529)。ELISPOT试验与病理学检查一致性较好(87.2%,κ=0.498,P=0.001)。结论以CFP10/ESAT6融合蛋白为抗原的ELISPOT法应用于脊柱结核诊断有良好的敏感性和特异性,可作为脊柱结核感染辅助诊断的有效方法。     

运用时间治疗学理论实施护理干预对原发性高血压患者服药依从性的影响

目的：探讨运用时间治疗学理论实施护理干预对原发性高血压患者服药依从性及治疗效果的影响。方法：对68例原发性高血压患者及家属实施健康教育，根据患者血压变化规律，在给药时间、给药剂量等方面实施护理干预，并对干预前后患者服药依从性进行调查，观察其血压控制情况。结果：实施护理干预后患者服药依从性和血压控制情况与干预前比较有显著性差异（P〈0．05）。结论：运用时间治疗学理论对原发性高血压患者进行护理干预，可提高患者服药依从性，有效控制患者的血压水平。     

肺结核并发糖尿病患者临床特征及淋巴细胞亚群检测结果分析

目的 探讨肺结核并发糖尿病(pulmonary tuberculosis complicated with diabetes mellitus, PTB-DM)患者临床特征及淋巴细胞亚群特点。方法 回顾性收集2018年4月1日至2019年5月31日在解放军总医院第八医学中心结核二科住院的符合纳入标准的肺结核患者。根据是否并发糖尿病将其分为两组:PTB-DM组85例,单纯肺结核组(PTB组)96例。对两组患者临床特征包括性别、年龄、治疗史和胸部CT检查结果进行比较分析;对两组患者淋巴细胞亚群和结核分枝杆菌特异性反应T细胞检测结果分别进行比较分析。结果 PTB-DM组男性和女性分别占76.4%(65/85)和23.6%(20/85),PTB组分别占57.3%(55/96)和42.7%(41/96),差异有统计学意义(χ²=7.42,P=0.006)。PTB-DM组<25岁、25~60岁和>60岁的患者分别占2.4%(2/85)、68.2%(58/85)和29.4%(25/85); PTB组则分别占25.0%(24/96)、63.5%(61/96)和11.5%(11/96),差异有统计学意义(χ²=23.55,P=0.000)。PTB-DM组初治和复治患者分别占74.1%(63/85)和25.9%(22/85),PTB组分别占84.4%(81/96)和15.6%(15/96),差异无统计学意义(χ²=2.92,P=0.088)。PTB-DM组胸部CT扫描显示无空洞、有空洞、病变范围<3个肺叶和≥3个肺叶者分别占23.5%(20/85)、76.5%(65/85)、31.8%(27/85)和68.2%(58/85);PTB组分别为53.1%(51/96)、46.9%(45/96)、54.2%(52/96)和45.8%(44/96);PTB-DM组胸部CT有空洞和病变范围≥3个肺叶的患者明显多于PTB组,差异有统计学意义(χ²=16.56,P=0.000和χ²=9.20,P=0.002)。PTB-DM组结核分枝杆菌特异性反应T细胞阳性率为81.3%(65/80),PTB组阳性率为74.2%(66/89),差异无统计学意义(χ²=1.22,P=0.270)。PTB-DM组总T淋巴细胞绝对计数、CD4⁺T淋巴细胞绝对计数、CD8⁺T淋巴细胞绝对计数、自然杀伤细胞(NK细胞)绝对计数、NK样T淋巴细胞绝对计数和总B淋巴细胞绝对计数的中位数(四分位数)值分别为1069.00(753.50,2372.50)、548.00(381.00,787.50)、380.00(270.50,574.50)、184.00(111.00,294.50)、60.00(36.00,120.50)和162.00(80.50,244.00)个/μl,PTB组则分别为1161.50(858.50,1601.00)、628.00(472.75,860.50)、457.50(286.00,614.75)、191.50(115.75,315.75)、65.50(34.50,119.50)和184.50(112.25,301.00)个/μl,两组间6项指标差异无统计学意义(Z=-1.80,P=0.073;Z=-1.47,P=0.142;Z=-1.46,P=0.144;Z=-0.57,P=0.568;Z=-0.09,P=0.931;Z=-1.93,P=0.053)。结论 PTB-DM中老年男性较多,病灶范围广泛、严重; PTB是否并发DM对淋巴细胞亚群6项指标检测结果无明显影响。     

汶川地震后成批伤员的手术配合

报告了汶川地震后168例、214台次的手术配合.共设立了2个抗震救灾手术点,手术前认真、快速地做好伤员准备、护理人员准备和手术点器械与物品的准备.第一手术点设在抗震救灾病房附近,主要负责普通清创缝合手术、骨骼牵引手术、扩创手术、石膏外固定手术等;第二手术点设在医院底楼,主要负责各种骨科、胸外科、普外科、妇产科和泌尿外科手术等.214台次手术均顺利完成.     

结核分枝杆菌Ag85A／ESAT-6嵌合基因DNA疫苗与抗痨药物联合治疗小鼠结核病

目的 研究结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合基因DNA疫苗及其与抗痨药物联合治疗小鼠结核病的效果.方法 用结核分枝杆菌临床分离的利福平和异烟肼敏感株HB240-1尾静脉注射17～19g的6～8周龄雌性BALB/c小鼠后,将小鼠随机均匀地分为5组,感染后第3d开始,分别用pVAX1空载体(A组)、利福平和异烟肼(B组)、利福平、异烟肼和Ag85A/ESAT-6嵌合基因DNA疫苗(C组)、Ag85A/ESAT-6嵌合基因DNA疫苗(D组)、HSP65基因DNA疫苗(E组)治疗40d,每组10只小鼠.治疗结束后2w,分别取肺、肝和脾观察病理改变、称取重量、做菌落计数.结果 小鼠感染5w后,肺内菌量可达到1.8×106 CFU,脾内菌量达到1.7×106CFU.治疗结束后2w,B组和C组肺、脾脏器重量指数显著低于D组和E组,D组和E组脾脏器重量指数低于A组,但差别不显著.A组肺脏病变程度最重,病变范围80%～100%,干酪样坏死灶为弥漫性;D组和E组肺脏病变范围50%,干酪样坏死灶为片状;B组和C组肺脏病变程度较轻,病变范围较小,干酪样坏死灶为点状.A组脾脏9只重度肿大;B组和C组脾脏未见明显病变;D组和E组脾脏各有4只重度肿大.与A组相比,E组、D组、B组和C组肺脏菌落数分别减少了45%、50%、98.9%、99%;脾脏菌落数依次减少了50%、55%、99.2%、98.4%.与pVAX1空载体治疗组相比,各治疗组均有不同程度的疗效,Ag85A/ESAT-6嵌合基因疫苗组与HSP65基因疫苗组疗效相当.结论 Ag85A/ESAT-6嵌合基因DNA疫苗组联合化疗的疗效明显强于Ag85A/ESAT6嵌合基因DNA疫苗单独应用.     

多种标志物在人群结核病分子流行病学研究中的应用

背景:目前世界正在开展很多结核病流行病学研究。对IS6110杂交带少于6条的菌株应用一个二级标志物指纹分析增强了菌株的追踪,但它对人群结论的影响尚未很好地研究。 目的:对低拷贝结核分支杆菌菌株应用多态性富含GC重复序列(PGRS)进行二级基因分型。探讨其对以人群为研究背景的流行病学研究结论的影响。 设计:对1991—1996年旧金山结核病例,通过单用IS6110及联合采用PGRS/IS6110定义菌株成簇,以便1)估计近期的传播;2)评价细菌群体参数在理论上对这些估计的影响;3)评价近期传播的危险因素。 结果:对低拷贝菌株(所有菌株的20.3％)进行二级分型,使近期传播的估算值由29.1％下降到25.3％(P=0.03)。补充基因分型造成不同估算值的最主要的影响参数是低拷贝菌株的比例和成簇的数量。对于上述两种分析方法而言。导致近期传播的危险因素是一样的。 结论:结核分支杆菌二级基因分型的统计和推论似乎取决于人群中低拷贝菌株的比例。该比例低时,或没有多少二级特型匹配时,补充基因分型在人群水平研究中的作用可能就很小。     

小鼠肺、肝、脾组织病理学变化对结核DNA疫苗保护作用的评价

目的:评价结核分支杆菌MPT64、ESAT6 DNA疫苗的保护效力和细胞因子的增强作用.     

矽肺结核病耐喹诺酮(gyrA)基因情况分析

目的研究矽肺结核耐喹诺酮药敏试验与gyrA基因突变的关系。方法通过药敏试验和聚合酶链反应—单链构象多态性(PCR-SSCP)技术鉴定31株分枝杆菌临床分离株的菌种,分析gyrA基因突变的情况。结果30株临床分离株的16SrDNASSCP电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同。16株耐喹诺酮类药临床分离株中,11株异常,占68.75%。结论gyrA基因突变与结核分枝杆菌对喹诺酮类药物耐药有关,且gyrA基因突变在药敏实验高、低浓度区均可发生。     

结核分支杆菌链霉素耐药基因的检测

目的了解结核分支杆菌链霉素（Ｓｍ）耐药基因突变情况，建立快速检测耐药突变株的方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析了２２株结核分支杆菌临床分离株的ｒｐｓＬ基因，并应用ＰＣＲ－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）进一步分析其突变的部位和性质。结果以Ｈ３７Ｒｖ标准株为对照，５株敏感株的ｒｐｓＬ基因未见ＳＳＣＰ泳动异常、有ＭｂｏⅡ酶切位点；１３株耐Ｓｍ株中，１１株（８６％）有ｒｐｓＬ基因泳动异常、无ＭｂｏⅡ酶切位点；４株耐其它抗结核药物株中，也有１株ＳＳＣＰ泳动异常、并无ＭｂｏⅡ酶切位点。结论大多数结核分支杆菌Ｓｍ耐药分离株有ｒｐｓＬ突变，而突变位点大多位于第４３位密码子。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ可能成为快速检测结核分支杆菌耐药突变株的新方法。