保肾颗粒对急性血瘀模型大鼠血液流变性的影响

目的:观察保肾颗粒对急性血瘀证模型大鼠血液流变性的影响。方法:SD大鼠60只随机分为空白对照组、模型对照组、复方丹参滴丸(阳性药)组和保肾颗粒3.6,1.8,0.9 g/kg剂量组,连续灌胃给药10 d后,采用皮下注射盐酸肾上腺素加冰水浴法制备大鼠急性血瘀证模型,于禁食20 h后腹主动脉采血,分别测定不同切变率下全血黏度、血浆黏度、全血还原黏度、红细胞压积等血液黏滞度指标。结果:与模型对照组比较,保肾颗粒3.6,1.8 g/kg剂量组能明显降低急性血瘀证大鼠的全血黏度、血浆黏度、红细胞压积和红细胞聚集指数(P0.05)。结论:保肾颗粒对急性血瘀证模型大鼠血液流变性具有一定的改善作用,能降低其血液黏度。     

黄芩素调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的焦亡减轻小鼠急性肺损伤作用

目的 探究黄芩素对急性肺损伤（acute lung injure,ALI）小鼠的治疗作用以及对NOD样受体热蛋白结构域3（NOD-like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（cystein-asparate protease-1,Caspase-1）/消皮素D（gasdermin D,GSDMD）焦亡通路的调控作用。方法 60只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、Caspase-1抑制剂VX-765（30 mg/kg）组和黄芩素低、中、高剂量（10、20、40 mg/kg）组,每组10只。除对照组外,其余各组ip脂多糖（lipopolysaccharide,LPS,15 mg/kg）,分别于造模前24 h和造模0.5 h后给予黄芩素或VX-765（30 mg/kg）干预。造模24 h后,检测小鼠肺湿干质量比以评价肺肿胀;苏木素-伊红（HE）染色法检测肺组织病理变化;透射电子显微镜观察肺组织中巨噬细胞损伤情况;ELISA法检测小鼠血清和肺泡灌洗液中白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、IL-6、IL-18、IL-1α和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平;采用Western blotting检测肺组织NLRP3、凋亡相关的斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC）、cleaved Caspase-1、pro Caspase-1、GSDMD-N以及GSDMD蛋白表达。人源单核细胞白血病THP-1细胞加入100 nmol/L佛波酯诱导24 h,贴壁后随机分为对照组、模型组、VX-765（500 nmol/L）组和黄芩素低、中、高剂量（3、10、30 μmol/L）组,除对照组外,采用1 μg/mL LPS联合5 mmol/L三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）刺激THP-1细胞建立细胞炎症模型,给予黄芩素或VX-765干预,采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测上清液中IL-1β、IL-18和IL-1α水平;LDH试剂盒检测上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活力;免疫荧光评估NLRP3炎症小体组装情况;采用膜联蛋白-V-PE（Annexin-V-PE）/7-氨基放线菌素（7-aminoactinomycin,7-AAD）试剂盒评价细胞焦亡情况;Western blotting检测细胞NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路相关蛋白表达。结果 在ALI小鼠模型中,与模型组比较,VX-765组和黄芩素组小鼠肺肿胀程度明显减轻（P<0.01）,肺组织损伤评分显著降低（P<0.01）,肺组织中巨噬细胞炎性病变得到缓解,血清及肺泡灌洗液中IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-18、IL-1α水平明显降低（P<0.05、0.01）,肺组织NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1、pro Caspase-1、GSDMD-N以及GSDMD蛋白表达水平均显著降低（P<0.05、0.01）。在细胞炎症模型中,与模型组比较,VX-765组和黄芩素组THP-1细胞IL-1β、IL-18、IL-1α分泌量显著降低（P<0.01）,NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路相关蛋白表达水平明显降低（P<0.05、0.01）,NLRP3炎症小体组装明显被抑制（P<0.05、0.01）,LDH释放量及细胞焦亡率显著降低（P<0.01）。结论 黄芩素通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的细胞焦亡,从而改善LPS诱导的小鼠ALI。     

藏族药五味甘露药浴散加减方对佐剂关节炎大鼠药效及血清NF-κB,TNF-α,IL-1,EGF的影响

目的:观察藏族药五味甘露药浴散加减方对佐剂关节炎大鼠的药效及其对大鼠血清核因子-κB(NF-κB),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1(IL~(-1)),表皮生长因子(EGF)水平的影响。方法:SD健康大鼠60只,随机选取10只作为正常组,除正常组外,采用弗氏完全佐剂关节炎(AA)大鼠模型,随机分为模型组,地塞米松组(0.150 mg·kg~(-1),ig),五味甘露药浴散加减方高、中、低剂量组(104.00,52.00,26.00 g·L~(-1)),药浴组每天40℃药浴30 min,模型组和正常组每天40℃温水浴30 min,给药4周,用致炎后足跖肿胀度,苏木素-伊红(HE)染色法观察致炎侧足踝关节滑膜病理改变评价藏族药五味甘露药浴散加减方对AA大鼠的治疗效果,测定大鼠胸腺、脾脏脏器系数,酶联免疫吸附测定(ELISA)测定血清NF-κB,TNF-α,IL~(-1),EGF水平。结果:与正常组比较,模型组AA大鼠致炎侧足跖肿胀度明显增大,滑膜细胞增厚、巨噬细胞增生和炎细胞浸润,血清中NF-κB,TNF-α,IL~(-1),EGF水平明显升高,脾脏系数、胸腺系数明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,地塞米松组和五味甘露药浴散加减方高剂量组能明显减小AA大鼠致炎侧足跖肿胀度,能改善滑膜细胞增厚、巨噬细胞增生和炎细胞浸润,血清中NF-κB,TNF-α,IL~(-1)水平明显降低(P0.05,P0.01),五味甘露药浴散加减方中剂量组NF-κB水平也明显降低(P0.05,P0.01),五味甘露药浴散加减方各剂量组大鼠血清中EGF水平无明显变化,脾脏系数明显增大(P0.05),高、中剂量组胸腺系数明显增大(P0.05)。结论:藏族药五味甘露药浴散加减方能有效的减小佐剂性关节炎大鼠致炎侧足跖肿胀度,改善AA大鼠踝关节滑膜炎病变,高剂量效果最好,其机制可能与降低血清中NF-κB,TNF-α,IL~(-1)的水平、调节脾脏和胸腺的功能有关。     

黄连异喹啉生物碱盐酸巴马汀对NLRP3炎症小体通路调控机制研究北大核心CSCD

目的:观察黄连主要异喹啉生物碱单体成分盐酸巴马汀的抗炎活性,验证其机制之一为通过抑制NLRP3炎症小体通路激活。方法:本实验通过内毒素(LPS)联合三磷酸腺苷(ATP)刺激小鼠腹膜巨噬细胞系建立炎症模型,采用酶联免疫法(Elisa)检测细胞培养基上清细胞因子白介素1beta(IL-1β)水平对黄连主要生物碱小檗碱、黄连碱、巴马汀、表小檗碱以及药根碱进行抑制活性初筛,综合抑制活性强弱以及研究深入程度,选取巴马汀进行后续机制研究。采用免疫蛋白印迹法分别检测NLRP3、ASC、GAPDH、pro-IL-1β、cleaved-IL-1β、p-JNK和JNK蛋白表达水平。结果:与模型组比较1~30μM/L巴马汀浓度依赖性显著降低细胞液上清中细胞因子IL-1β水平;显著抑制NLRP3、cleaved-IL-1β和p-JNK蛋白表达。结论:巴马汀具有良好的抗炎功效,其机制与其抑制NLRP3、p-JNK和cleaved-IL-1β蛋白水平,从而减少下游细胞因子IL-1β生成有关。     

基于中效方程的黄芩苷与小檗碱抗炎协同作用研究

黄芩苷和小檗碱分别是清热解毒药黄芩和黄连及其复方口服后主要的入血成分[1],二者体内外实验均表现出良好的抗炎活性[2,3],但联合应用的合理性研究还未见报道。本实验研究黄芩苷和小檗碱联合对经典炎症通路关键节点的影响,评价二者合用相关机制。     

大黄素通过线粒体通路诱导HepG2细胞凋亡

目的:研究大黄素对Hep G2细胞的毒性和可能的作用机制。方法:通过细胞增殖与活性检测试剂(Am-blue)测定大黄素对Hep G2细胞的毒性;使用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)和花青染料(JC-1)探针检测细胞内活性氧与线粒体膜电位水平;使用流式细胞仪,通过磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染色试剂盒检测大黄素对Hep G2细胞凋亡的影响;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测成熟型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3,8,9(cleaved Caspase-3,8,9)以及聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(cleaved-PARP)等凋亡相关蛋白表达。结果:与空白组比较,大黄素(15,30μmol·L~(-1))对Hep G2细胞具有增殖抑制作用(P0.01),并且具有浓度依赖性;大黄素(15,30μmol·L~(-1))能够升高细胞内活性氧水平,并且使细胞线粒体膜电位降低(P0.01);大黄素(15,30μmol·L~(-1))能够使Hep G2细胞早期和晚期凋亡增加(P0.01);大黄素(15,30μmol·L~(-1))能够激活cleaved Caspases-8,9,3和PARP蛋白的表达(P0.01)。结论:大黄素对Hep G2细胞有增殖抑制作用,说明大黄素具有潜在的肝脏毒性,其毒性作用机制是通过线粒体凋亡途径实现的。     

基于中效方程的黄芩苷与汉黄芩苷调控NF-κB信号通路的协同作用

目的:利用中效原理定量分析黄芩苷与汉黄芩苷合用的抗炎协同药效学机理。方法:通过脂多糖(LPS100μg·L~(-1)刺激RAW264.7细胞构建体外炎症细胞模型;实验设置正常组,模型组,穿心莲内酯组(10μmol·L~(-1)),黄芩苷组(2.06,4.13,8.25,16.5,33,66,132μmol·L~(-1)),汉黄芩苷组(2.94,5.88,11.75,23.5,47,94,188μmol·L~(-1))和黄芩苷-汉黄芩苷联合组[(2.06+2.94)(4.13+5.88)(8.25+11.75)(16.5+23.5)(33+47)(66+94)(132+188)μmol·L~(-1)];采用酶联免疫吸附测定(ELISA)分别检测药物干预50 min和4 h后细胞培养上清中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;采用硝酸盐还原酶(Griess)法检测药物干预24 h后细胞培养上清中一氧化氮(NO)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测药物干预2,12 h后细胞中磷酸化核转录因子-κB p65(p-NF-κB p65)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活化水平;绘制作用率/非作用率(fa/fu)与剂量的关系表。结果:与正常组比较,模型组RAW264.7细胞中p-NF-кB p65蛋白和iNOS蛋白表达均明显增加(P0.05,P0.01),细胞因子TNF-α,IL-6和NO的表达均显著增加(P0.01);与模型组比较,各给药组高剂量可抑制p-NF-κB p65蛋白的表达(P0.05),汉黄芩苷组和联合组可浓度依赖性下调iNOS蛋白的表达(P0.01),黄芩苷组无明显差异。各给药组高剂量均可显著抑制NO的生成(P0.05),对IL-6生成无明显抑制作用。汉黄芩苷组和联合组可显著抑制TNF-α的生成(P0.05),黄芩苷组无明显差异;在实验剂量下,fa/fu与剂量关系表显示,联合组p-NF-кB p65活化和IL-6生成的fa/fu小于黄芩苷组和汉黄芩苷组,联合组iNOS,TNF-α和NO生成的fa/fu在高剂量时大于黄芩苷组和汉黄芩苷组。结论:黄芩苷和汉黄芩苷对NF-κB通路中不同靶标作用强度差异较大,汉黄芩苷是二者合用的主体药效物质,二者合用对不同靶点表现为不同程度的协同或拮抗作用。     

表小檗碱调控CD39-NLRP3-GSDMD焦亡路径改善脓毒症肺损伤的机制研究

目的 基于CD39-NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)-GSDMD焦亡路径探究表小檗碱改善脓毒症肺损伤的作用机制。方法 通过AMP-Glo TM实验考察黄连异喹啉生物碱成分小檗碱、黄连碱、巴马汀、表小檗碱及药根碱的CD39酶促活性。小鼠ip脂多糖（lipopolysaccharide,LPS,12 mg/kg）建立脓毒症肺损伤模型，分别于造模前24 h和造模0.5 h后给予表小檗碱或MCC950，造模后24 h，采用苏木素-伊红（HE）染色法观察小鼠肺组织病理变化；计算肺组织湿质量/干质量，评价肺肿胀；ELISA法检测肺泡灌洗液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)和IL-17A水平。采用1μg/mL LPS联合5 mmol/L三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）/5μmol/L nigericin/...