ClpP粘膜免疫预防小鼠发生肺炎链球菌性肺炎和败血症

目的:肺炎链球菌毒力蛋白ClpP鼻腔粘膜免疫BALB/c小鼠,探讨其作为肺炎链球菌候选蛋白疫苗的价值.方法:利用制备的ClpP多克隆抗体,分析ClpP 在肺炎链球菌表面表达情况;ClpP蛋白粘膜免疫小鼠,TIGR4型肺炎链球菌分别经腹腔和鼻腔攻击,分析肺炎链球菌小鼠肺内定植情况并监测小鼠生存时间.结果:流式细胞技术证实了TIGR4肺炎链球菌表面表达ClpP毒力蛋白,粘膜免疫ClpP可以特异产生系统性和粘膜性的ClpP抗体,并可减少TIGR4肺炎链球菌在小鼠肺内的定植,延长小鼠生存时间.结论:ClpP粘膜免疫可预防小鼠发生肺炎链球菌性肺炎和败血症,进一步证实ClpP蛋白可作为肺炎链球菌的候选蛋白疫苗.     

过敏性哮喘患儿血清中IL-4、IL-17水平表达的临床意义

目的探讨过敏性哮喘的发病机制及患儿在早期治疗中的临床意义。方法参照《实用儿科学》第八版作为过敏性哮喘诊断标准。收集2016年6月至2017年6月贵州遵义地区入住我院儿科诊断为过敏性哮喘患儿的血样本及患儿的一般资料,包括既往感染病史及预防接种史、性别、年龄、等;患者入院后静脉采血3 mL,进行过敏原检测,ELISA技术检测血清总Ig E含量。根据临床检查结果,将血清总Ig E200的患儿纳入实验对象,作为实验组;非过敏性哮喘患儿作为对照组。收集患者静脉血3 mL,ELISA技术检测血清IL-4、IL-17含量。结果过敏性哮喘患儿血清中IL-4水平含量呈上调趋势,IL-17水平含量呈上调趋势。结论研究表明过敏性哮喘患儿发病机制与调控Th1/Th2失衡有关。     

肺炎链球菌CbpA基因疫苗的构建及免疫学特性

目的：构建含有肺炎链球菌（SPN）毒力因子CbpA抗原编码基因的重组质粒pcDNA3.1/CbpA,测定其诱导特异性免疫应答的能力并评价其保护效果.方法：PCR扩增SPN CbpA编码基因,将该编码基因克隆到pcDNA3.1（＋）真核表达载体中,构建pcDNA3.1/CbpA重组质粒,经测序鉴定后转染COS-7细胞,WesternBlot鉴定目的蛋白的表达,重组质粒免疫BALB/c小鼠,TIGR4型SPN攻击后,监测其生存时间.结果：CbpA能在COS-7细胞中表达;pcDNA3.1/CbpA重组质粒主动免疫BALB/C小鼠后,体内产生特异性IgG抗体,并诱导小鼠对SPN感染产生有效的保护.结论：成功构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1/CbpA,可为SPN基因疫苗的研制提供依据.     

核酶抗肿瘤/抗病毒研究进展

核酶作为一种新型的靶向基因药物。主要针对基因表达发挥作用，为抗肿瘤和抗病毒治疗提供了新的方法。它具有特异性高的特点，目前对于它的研究还刚刚起步。现将核酶在抗肿瘤、抗病毒中的研究状况作一综述。     

基于生物信息学方法筛选肝细胞癌核心生物标志物及预后关联性分析

目的利用生物信息学分析技术筛选和鉴定参与肝细胞癌(HCC)进展的核心基因,并评价其在HCC发展及预后中的潜在价值。方法从GEO数据库筛选出HCC基因数据集GSE101685、GSE84402和GSE46408,利用GEO2R对差异表达基因(DEGs)进行分析。采用DAVID数据库构建基因功能注释和通路富集分析。利用STRING数据库构建蛋白质互作网络(PPI)图,并用Cytoscape进行可视化分析,筛选出关键模块并获得核心基因。使用cBioPortal数据库进行生存分析。通过ONCOMINE数据库分析核心基因与HCC进展的关系。结果在3个基因数据集中共筛选到261个DEGs,其中上调基因124个,下调基因137个。KEGG分析结果表明,DEGs主要参与细胞周期、DNA复制、视黄醇代谢等通路。PPI分析鉴定出10个核心基因,其中OIP5、HGFAC、FLVCR1与HCC分级、卫星结节和血管浸润有关,FLVCR1与患者生存情况有关。结论该研究成功筛选出与HCC相关的DEGs和核心基因,其中OIP5、HGFAC、FLVCR1有望成为HCC诊疗和预后的生物标志物。     

一种减毒肺炎链球菌溶血素突变体的构建与表达

目的 使用重叠PCR方法构建构建△A146Ply突变体,原核可溶性表达△A146Ply蛋白,并明确其毒力变化情况;分析肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)在不同血清型肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae,SPN)中的表达情况.方法 以SPN D39型基因组DNA为模板设计合成构建突变体ply基因所需引物;利用重叠PCR方法扩增合成△A146ply突变体.通过溶血实验分析其溶血活性,利用中和试验验证△A146Ply诱导产生的特异性抗体中和野生Ply毒素溶血能力,并利用Western印迹检测5株不同血清型肺炎链球菌流行菌株中Ply蛋白表达情况.结果 突变体基因测序结果显示,Ply146位密码子GCT 3个碱基被缺失,△A146ply突变体构建成功,并实现了△A146Ply的可溶性表达,得到纯度＞90 %的重组蛋白.△A146Ply蛋白浓度为100 000 ng/ml亦未表现出溶血活性.△A146Ply蛋白诱导产生的特异性抗体能够中和野生Ply毒素的溶血活性.Western印迹结果显示,△A146Ply诱导产生的多克隆抗体可与国内临床常见4株肺炎链球菌有交叉反应.结论 △A146Ply蛋白是一种安全的肺炎链球菌疫苗候选分子,可刺激机体产生具有中和作用的特异性抗体.     

过敏毒素C3a及白细胞介素－32在慢性阻塞性肺疾病气道炎症中的作用

目的：探讨过敏毒素C3a及白细胞介素－32（IL－32）在慢性阻塞性肺疾病（COPD）气道炎症中的作用。方法纳入COPD稳定期患者30例,COPD急性加重期（ AECOPD）患者30例,健康对照者10例。收集受试者痰液及静脉血,应用实时荧光定量逆转录－聚合酶链式反应（ RT－PCR）检测痰细胞裂解液及静脉血细胞裂解液中C3和IL－32 mRNA的表达,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测痰上清液及静脉血清中C3a和IL－32蛋白的表达,分析C3a与IL－32、IL－32与COPD患者肺功能损伤的相关性。结果 AECOPD患者痰细胞裂解液及静脉血细胞裂解液中C3和IL－32 mRNA水平显著升高,痰上清液及静脉血清中C3a和IL－32蛋白水平显著升高。 AECOPD患者静脉血清中IL－32蛋白浓度与C3a蛋白浓度呈显著正相关,IL－32蛋白浓度与1 s用力呼气容积（FEV1）占预计值百分比（FEV1％预计值）及FEV1／用力肺活量（FVC）呈显著负相关。结论 C3a通过诱导IL－32促进COPD气道炎症,加重肺功能损害,这将为COPD的诊断和治疗提供有效的靶位。     

过敏毒素C3a在健康人气道上皮间质转化中的作用研究

目的 观察过敏毒素C3a在正常人气道上皮间质转化(EMT)中的作用及其相关分子机制.方法 培养正常人气道上皮细胞BEAS-2B,分为对照组,重组人(rhC3a)刺激组,rhC3a+C3a受体拮抗剂(C3aRA)的拮抗组,通过显微镜观察细胞形态学变化情况;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力;ELISA检测细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的蛋白表达情况;RT-PCR检测C3a受体(C3aR)和EMT相关指标mRNA变化情况;Western blot检测C3aR、Smad2/3、p38-MAPK蛋白表达情况.结果 30、50 nmol/L rhC3a刺激组细胞形态由正常鹅卵石样变为梭形,加入1μmol/L C3aRA拮抗组细胞形态较对照组比较无明显改变.50 nmol/L rhC3a刺激组的细胞增殖较对照组降低(P=0.047);30 nmol/L rhC3a刺激组中TGF-β1蛋白水平较对照组升高(P＜0.05),C3aR mRNA及蛋白水平较对照组均升高(P＜0.05),p-Smad2/3、p-p38-MAPK蛋白水平较对照组升高(P＜0.05),加入1 μmol/L C3aRA可以降低以上指标表达(P＜0.05).30 nmol/L rhC3a刺激组中α-平滑肌肌动蛋白、N-钙黏蛋白mRNA表达上调,E钙黏蛋白mRNA表达下降,加入1μmol/L C3aRA可以拮抗这一过程(P＜0.05).结论 过敏毒素C3a通过结合C3aR,诱导正常人气道上皮细胞发生EMT,其机制可能是通过激活Smad2/3、p38-MAPK通路来参与.