热休克蛋白70促进急性肺损伤小鼠肺部炎症反应

目的 探讨热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠发病的影响及其相关机制.方法 构建ALI模型小鼠,免疫印迹法检测肺组织中HSP70的表达情况,酶联免疫法检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fl...     

IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路增强小鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能

目的 探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的含量。体外培养MH-S细胞,在信号转导子与转录激活子3 (STAT3)抑制剂Stattic(5μmol/L)存在与否的情况下,再加入IL-6(10 ng/mL～500 ng/mL)刺激6 h,加入荧光微球孵育2 h后,采用流式细胞术检测MH-S细胞吞噬荧光微球情况;Western blot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、肌动蛋白相关蛋白2(Arp2)、纤维型肌动蛋白(F-actin)的表达水平。结果 鼻腔滴入LPS后,小鼠BALF中IL-6含量显著升高。随着IL-6刺激剂量的增加,MH-S细胞吞噬荧光微球的作用增强,Arp2、 F-actin蛋白的表达水平升高。100 ng/mL IL-6刺激MH-S细胞后,p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达水平升高。阻断MH-S细胞STAT3信号后,IL-6促进细胞吞噬的效应完全消失,...     

YAP干扰下调 MARCO 受体表达抑制肺泡巨噬细胞的吞噬功能

摘要:目的 探讨 Yes相关蛋白(Yes-associatedprotein,YAP)对肺泡巨噬细胞(alveolarmacrophages,AMs)吞噬功 能的影响及相关机制。方法 通过鼻滴脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)构建急性肺损伤(ALI)小鼠模型,24h后经支气 管肺泡灌洗获取原代 AMs,采用 Westernblot检测原代 AMs中 YAP的表达;使用200ng/mL的 TNF-α刺激肺泡巨噬 细胞株 MH-S,24h后检测 YAP蛋白表达情况。MH-S细胞经 YAPsiRNA 干扰表达或经 Verteporfin抑制 YAP活性 48h后再与FITC-E.coli共孵育1h,流式细胞术检测 MH-S细胞吞噬率变化。MH-S细胞经 MARCO 阻断抗体(MARCOAb)作用6h后,检测其吞噬E.coli能力的变化。YAPsiRNA 干扰 MH-S细胞 YAP表达48h后,检测 MARCO 受 体的表达情况。结果 与对照组相比,ALI小鼠 AMs总蛋白(P<0.05)和胞质蛋白(P<0.01)中 YAP的表达均下降; TNF-α刺激后的 MH-S细胞,其总蛋白和胞质蛋白中 YAP蛋白水平均下降(均 P<0.05)。与干扰对照组(ScsiRNA 组)相比,YAPsiRNA 组 MH-S细胞吞噬能力降低(P<0.01);与对照组相比,YAP活性抑制组 MH-S细胞的吞噬率明 显下降(P<0.01)。用 MARCO Ab阻断 MARCO 受体后,MH-S吞噬率降低(P<0.01)。与 ScsiRNA 组相比,YAP siRNA 组 MH-S细胞 MARCO 受体表达降低(P<0.01)。结论 ALI小鼠 AMs中 YAP蛋白表达下降,YAP的下调可 以导致 AMs表面 MARCO 受体表达降低和吞噬E.coli能力减弱。     

IL-6RFP 在小鼠血吸虫感染中对肝细胞的保护作用

目的：探讨鼠白介素6受体融合蛋白（mIL-6RFP）在BALB／c 小鼠日本血吸虫感染模型中对肝细胞的保护作用。方法通过亲和层析方法获得可阻断白介素-6（IL-6）的mIL-6RFP,经人类肝癌细胞（HepG2）IL-6刺激及阻断实验检测纤维蛋白原（fibrinogen,FGG）和结合珠蛋白（haptoglobin, HP）的 mRNA 表达变化,体外验证重组蛋白 mIL-6RFP 的生物活性。建立 BALB／c 小鼠日本血吸虫感染模型,于感染第24天起经尾静脉注射 mIL-6RFP,隔天注射每次100μg／只,感染第42天剖杀小鼠。HE 染色法检测小鼠肝脏肉芽肿面积,荧光定量 PCR 法检测小鼠肝组织 IL-1β、IL-13、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和趋化因子1（CXCL1）的 mRNA 表达,连续监测法检测小鼠肝功能指标谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）。结果 HepG2细胞实验显示 mIL-6RFP 可降低IL-6对该细胞的刺激作用,显著下调 FGG 和 HP 的表达（P＜0．05）。在小鼠感染模型中阻断 IL-6后,肝功能指标 ALT和 AST 与溶剂对照组相比均显著下降（P ＜0．05）,肉芽肿病变无显著性差异。结论在 BALB／c 小鼠日本血吸虫感染模型中 mIL-6RFP 可明显改善肝细胞功能,但对肉芽肿形成未见明显作用。