已知HLA单采血小板供者资料库库容估计

目的:探讨江苏地区汉族人群HLA-I类抗原已知的单采血小板供者库的合适的库容水平。方法:采用Luminex-SSO法对16 062名江苏部分地区造血干细胞捐献者进行HLA基因分型。根据HLA-Ⅰ类(A, B位点)表型频率计算找到HLA匹配供者概率。结果:获取了江苏部分地区HLA-Ⅰ类(A, B位点)表型群体遗传学资料,利用表型群体遗传学资料估计推测出了已知HLA单采血小板供者资料库库容。结论:建立一个总库容1 500人的血小板捐献者资料库是恰当的,它可以满足表型频率 0.002的患者有95%的可能性找到至少1名表型相同的供者。     

采用熔解曲线法进行RHD c.1227G>A基因检测研究

目的：建立用于RHD c.1227G>A基因检测的熔解曲线分析方法。方法：根据RHD c.1227G>A基因位点设计并合成序列特异性引物,在荧光定量PCR反应后对产物进行熔解曲线分析,根据熔解曲线峰值的差异进行基因检测结果判断,并与常规序列特异性引物PCR（PCR?sequence specific primer,PCR?SSP）RHD c.1227G>A基因分型方法进行比较;对与血清学结果不一致的标本进行测序分析。结果：在87例血清学初筛为RhD阴性表型的标本中,采用熔解曲线分析法,检测出16例含有RHD c.1227G>A,占比18.4%;与常规PCR?SSP分型结果一致。对1例与血清学吸收放散结果不一致的标本进行RHD exon 9测序分析,证实均为1227A纯合子。熔解曲线分析法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和总符合率均为100%,约登指数为1.0。结论：成功建立用于红细胞RHD c.1227G>A基因分型的熔解曲线分析方法,可以高效、快速地进行RHD c.1227G>A基因检测研究。     

c.955C>G变异致ABO等位基因增强现象的研究及文献复习

目的 鉴定ABO疑难血型基因型,分析ABO亚型中等位基因增强现象的遗传规律.方法 采用血清学方法检测ABO血型,PCR扩增测序ABO基因编码区、上游CBF/NF-Y增强子区、启动子和内含子1中红细胞特异性调节元件的核苷酸序列,克隆测序ABO基因第6和7外显子分析鉴定其基因型.结果 血清学结果提示患者为A亚B型,基因测序...     

Bw11亚型家系表现ABO等位基因竞争现象的研究

目的分析携带ABO*BW.11等位基因的家系成员ABO血清学和分子生物学特征。方法应用血清学方法检测先证者及其家系成员共9人的ABO血型表型。采用PCR方法扩增ABO基因第6、7外显子并对扩增产物直接测序,同时克隆测序先证者及其父亲的标本。结果血清学检测初步判断先证者及其弟弟为AB亚型,先证者的父亲及其两女儿为B亚型。克隆测序发现先证者ABO等位基因第7外显子在B101的基础上第695位碱基发生T>C变异,表明为ABO*BW.11等位基因。先证者的父亲、弟弟及其两个女儿均携带该变异等位基因。A基因与BW.11以及BW.11与O基因同时遗传时竞争现象存在明显差异。结论ABO基因c.695T>C变异可能会导致Bw11亚型存在等位基因竞争现象。分子生物学方法结合血清学方法有助于精准鉴定ABO疑难血型。     

芹菜素增强阿司匹林对结肠癌细胞的增殖抑制作用及其机制研究

  目的  研究芹菜素(apigenin)能否增强阿司匹林(aspirin)对结肠癌细胞系的增殖抑制作用, 并阐述其机制。  方法  选取HT-29、HCA-7、Moser和DLD-1细胞系, 设置空白对照组、芹菜素(10μmol/L)组、阿司匹林(2.5、5、10 mmol/L)组、联合用药组。MTT法检测细胞存活率。免疫印迹法和逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测不同处理方式对Moser细胞环氧合酶-2(cy clooxygenase-2, COX-2)表达的影响。免疫印迹法检测不同处理方式对由TNF-α诱导的IκBα降解的抑制, 以此来反映不同处理方式对NF-κB活性的影响。  结果  芹菜素呈剂量和时间依赖性地增强阿司匹林对表达COX-2的结肠癌细胞增殖的抑制, 并协同增强阿司匹林对COX-2表达的抑制和对TNF-α诱导的IκBα降解的抑制。  结论  芹菜素能通过抑制COX-2的表达而增强阿司匹林对结肠癌细胞的增殖抑制。      

基于MassARRAY平台的人血小板抗原基因分型的质谱检测方法

目的：建立基于MassARRAY质谱iPLEX分析技术的人血小板抗原（human platelet antigen，HPA）基因分型方法。方法：通过文献检索HPA1?29W系统的单核苷酸多态性突变或缺失位点的信息，确定35个目的基因突变位点，按MassARRAY突变位点标示方法、引物设计固定格式和引物设计软件在线设计90条引物（正、反向扩增引物和延伸引物各30条），以12个插入HPA1?29W野生型和突变型序列的合成质粒以及50例已知HPA分型的献血者样本进行扩增和质谱检测，分析灵敏度、特异度和重复性，随机抽取15例样本的一代测序和质谱分型结果进行对比验证，建立检测方法。结果：基于MassARRAY平台的HPA基因分型的质谱检测方法与测序法检测结果相符合，灵敏度为100%，特异度为100%，重复性为100%。结论：成功建立基于MassARRAY平台的HPA1?29W系统的质谱分型方法，适合中国人群HPA分型，具有临床应用前景。     

变异型D产生抗-D合并抗-C及抗-Jkb抗体1例

报道1例患有溶血性贫血、系统性红斑狼疮的患者，因配型困难由临床送检血样至实验室检测。患者初筛血型为O型RhD阴性，使用3种不同的单克隆抗-D试剂，分别在盐水介质和抗人球介质对患者RhD表型进行确认。在盐水介质中，患者血样与所有IgM型抗-D不凝集，在抗人球介质中与所有IgM+IgG型抗-D试剂均凝集，为RhD变异型。使用谱细胞对患者血清进行抗体鉴定，发现患者血清中含有抗-D、抗-C和抗-Jk^b抗体。患者小因子表型为ccEe, Kidd系统抗原表型为Jk(a+b-)。选择与患者抗原匹配的供者红细胞4 U分2次予以输注，患者血红蛋白有效提升。Rh系统的抗原免疫原性高，Rh系统的抗体可引起严重的新生儿溶血病和溶血性输血反应，因此Rh系统表型和抗体的准确鉴定对于输血安全具有重要的临床意义。对于需要反复输血的患者，若能提供Rh抗原匹配的供者红细胞可大大降低患者被同种免疫的概率。