蟾蜍灵对白血病U937细胞生长抑制和凋亡诱导作用

蟾蜍灵是蟾蜍毒素的主要成分之一,蟾蜍毒素具有强心、麻醉、解毒、止痛、开窍、醒神等药理作用,已被广泛应用于临床。近年来发现,含有蟾蜍毒素的中药制剂在体外能抑制多种肿瘤细胞生长,诱导白血病细胞的分化。临床观察提示,含有蟾蜍毒素的中药制剂对肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、白血病等具有明显的抑制作用。Numazawa[1]研究表明,蟾蜍毒素的各种成分以剂量依赖的方式抑制K562细胞生长。在所有的蟾蜍毒素中,蟾蜍灵是诱导白血病细胞分化最有效的成分,蟾蜍灵在较低浓度(1×10-8~1×10-9mol/L)能够在较宽的范围内(有较宽的白血病细胞谱)引起人…     

骨髓间充质干细胞(MSCs)对N-甲基-N-亚硝脲(MNU)诱导的C57BL小鼠视网膜变性的治疗作用

目的 观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对N-甲基-N-亚硝脲(N-methyl-N-nitrosourea,MNU)诱导的C57BL小鼠视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)的治疗作用.方法 应用不同剂量(30 mg·kg-1、45 mg·kg-1、60 mg·kg-1、75 mg·kg-1、90 mg·kg-1)的MNU腹腔注射给予C57BL小鼠和MNU作用不同时间(1d、3d、7d)后,通过视网膜电图(electroretinogram,ERG)和HE染色检测小鼠视网膜的电生理功能和组织形态变化,优化建立稳定的RP动物模型的最佳条件;在此动物模型的基础上,经玻璃体内注射和尾静脉注射给予MSCs移植,并应用ERG和HE染色评估MSCs对MNU诱导的RP的治疗作用.结果 与对照组相比,30 mg·kg-、45mg·kg-1剂量的MNU可引起视网膜形态和功能的轻微损伤,而60 mg·kg-1及其以上剂量的MNU可使视网膜ERG波幅明显降低(均为P ＜0.001),视网膜外核层(outer nuclear layer,ONL)厚度明显变薄(P ＜0.001),损伤严重;与对照组相比,60 mg·kg-的MNU作用后1d和3d,视网膜ERG波形开始降低,形态结构开始出现ONL厚度变薄的损伤,作用7d时,ERG波形呈现熄灭型(均为P＜0.001),ONL厚度明显变薄(P ＜0.001),内外核层融合,损伤严重.与MNU单独作用组相比,60 mg·kg-1 MNU作用1d后给予MSCs移植,7d后MSCs组内ONL厚度增加(P ＜0.001),视网膜ERG波形趋于恢复(均为P＜0.001).结论 MSCs移植对MNU诱导的视网膜退行性变有一定的治疗作用.     

生物医学整合课程绪论区段PBL教学的思考

PBL是"基于问题式学习"的教学法。西安交通大学医学院以器官系统为核心,创新性地开展基础医学整合课程PBL教学,该教学系统包含11个区段。为了揭示整合课程PBL教学在绪论区段的实施过程及常见问题的应对措施,这里就绪论区段的课程设置、授课对象、教师集体备课、信息反馈及考核等的各个方面进行了深入剖析。     

17β雌二醇的神经保护作用与磷脂酰肌醇-3-激酶的活性关系

目的: 研究17β-雌二醇(βE2)保护视网膜神经细胞的作用与磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)的活性关系. 方法: 应用视网膜神经细胞培养、MTT测定、PI3K活性测定及Western blot分析的方法,观察βE2与视网膜神经细胞PI3K的关系. 结果: 10 μmol/L βE2培养细胞30 min后,PI3K的活性开始上升,1 h达高峰,12 h恢复正常. 用βE2直接与细胞匀浆37℃孵育1 h,PI3K活性没有改变. 而且βE2也未影响PI3K在细胞中的表达. PI3K抑制剂 LY294002降低了βE2削弱H2O2的毒性作用. 结论: βE2能间接激活细胞中PI3K的活性,LY294002抑制了βE2保护视网膜神经细胞的作用. 提示βE2的神经保护作用可能与PI3K的激活有关.     

PPARγ通路激活可增强细胞抗氧化能力和保护长程培养原代神经细胞

目的研究PPARγ通路增强对长程培养原代神经细胞凋亡的保护作用。方法以长程培养22 d的原代神经细胞建立自然 衰老模型。根据不同干预方法分为衰老对照组（C组）、GW9662 干预组（G组）和吡格列酮（Pioglitazone）干预组（P组）。其中 GW9662干预组（G组）根据GW9662干预终浓度分为4个亚组：G（0.1）：0.1 μmol/Lol/L,G（1）：1 μmol/L,G（5）5 μmol/L,G（10）： 10 μmol/L。吡格列酮干预组（P组）：根据吡格列酮干预终浓度分为4个亚组：P（0.1）：0.1 μmol/L,P（1）：1 μmol/L,P（5）5 μmol/L, P（10）：10 μmol/L。首先应用MTT法观察各组细胞活力,应用倒置显微镜观察各组神经细胞形态,确定下一步实验的G组和P 组的最终干预浓度。其次应用免疫荧光双标染色、流式细胞仪观察各组神经细胞计数、凋亡细胞比率的变化,明确PPARγ通路 增强对长程培养原代神经细胞凋亡的保护作用。最后应用免疫化学法观察各组细胞抗氧化能力的变化,探讨PPARγ通路增强 保护原代神经细胞的机制。结果随着GW9662干预浓度的增加,细胞活力进行性下降,其中G（1）、G（5）和G（10）组细胞活力 均较C组显著降低（P<0.05）。G（1）组神经细胞形态尚完整,部分突触交织成网,最终确定后续实验G组的GW9662干预浓度为 1 μmol/L。加用吡格列酮干预后细胞活力较C组提高,其中P（1）、P（5）和P（10）组细胞活力较C组显著提高,差异具有统计学意 义（P<0.05）,但P（1）、P（5）、P（10）组3组之间比较无明显差异（P>0.05）,最终确定后续实验P组的吡格列酮干预浓度为1 μmol/L。 G组细胞总数及神经细胞计数均较C组显著下降（P<0.05）。P组细胞总数及神经细胞计数均高于C组（P<0.05）。各组神经细 胞比率均维持在80%左右,差异无统计学意义（P>0.05）。G组凋亡细胞比率明显高于C组（P<0.05）,而P组凋亡细胞比率显著 低于C组（P<0.05）。G组SOD活性及GSH含量较C组均显著降低（P<0.05）,而MDA含量显著增加（P<0.05）。P组SOD活性 及GSH含量均较C组显著升高（P<0.05）,而MDA含量较C组显著减少（P<0.05）。结论PPARγ通路是长程培养原代神经细胞 的保护性通路,该通路的激活可以增强细胞抗氧化能力减少细胞凋亡保护长程培养原代神经细胞,提示针对PPARγ通路进行的 药物干预有可能是临床抗神经系统衰老治疗的有效途径之一。     

硒对Cu~(2+)-H_2O_2导致关节软骨蛋白聚糖降解释放的影响

应用小牛关节软骨短期器官温育的方法,研究了微量元素硒对Cu~(2+)-H_2O_2导致关节软骨蛋白聚糖(PG)降解释放的影响。结果表明:生理浓度的亚硒酸钠能显著抑制Cu~(2+)-H_2O_2对软骨PG的降解作用。用Sepharose 6B柱层析分析软骨PG降解产物,发现亚硒酸钠却不能消除Cu~(2+)-H_2O_2导致PG分子链的断裂。     

医学分子生物学实验教学改革的初步探索与实践

根据医学分子生物学学科特点,结合多年的实验教学经验,对医学分子生物学实验教学进行了一系列的探索与实践,取得了初步成效。本文着重总结了近年来在更新实验教学内容、提高教师自身素质、规范实验教学过程、应用多媒体技术等方面所做的一些尝试。     

探讨PBL病案讨论中指导教师的角色和作用

探讨在以问题为基础的学习(Problem-Based Learning,PBL)中,指导教师在病案(Case)讨论中所扮演的角色和应发挥的作用,对于进一步完善这种新型教学模式,起到了一定的积极推动作用。     

MNU诱导小鼠视网膜组织损伤及MSCs治疗的效果研究

【目的】 本课题的目标是应用N-甲基-N-亚硝脲(MNU)构建C57小鼠视网膜组织损伤的动物模型,并进一步观察骨髓间充质干细胞(MSCs)对MNU诱导的视网膜损伤的治疗作用。 【方法】 本研究首先应用不同剂量的MNU腹腔注射给予C57小鼠,分别在注射后1、3、5、7 d等不同时间点,通过ERG、H-E染色等方法检测视网膜组织的功能及形态结构的变化,选择建立稳定的视网膜损伤动物模型的MNU最佳浓度及最佳观察时间点;在此模型的基础上,局部注射给予MSCs,采用ERG、H-E染色、TUNEL染色等方法观察MSCs对MNU诱导的视网膜损伤的治疗效果。 【结果】 (1)60 mg/kg剂量的MNU给药7 d后,ERG检测波幅明显降低(P<0.05),而75、90 mg/kg均呈现熄灭型波形,视网膜损害十分严重;45 mg/kg剂量的MNU即可引起视网膜形态轻微损伤(P<0.05),而60 mg/kg及其以上剂量的MNU可使视网膜厚度明显变薄,结构混乱,内外核层融合,损伤严重(P<0.001)。(2)60 mg/kg剂量的MNU作用后1 d开始,视网膜功能即出现明显降低;第3、7天均呈现逐渐下降趋势(P<0.01);60 mg/kg剂量的MNU作用后第3天,视网膜形态结构开始出现厚度变薄、细胞结构混乱、内外核层融合等损伤(P<0.01),第7天时,外核层仅有3~4层细胞,损害严重(P<0.001)。(3)60 mg/kg剂量的MNU作用1 d后给予玻璃体腔注射生理盐水,7 d后视网膜形态结构出现厚度变薄、细胞结构混乱、内外核层逐渐融合等损伤;60 mg/kg剂量的MNU作用1 d后给予玻璃体腔注射MSC 2.5x10⁴个细胞/μL(2 μL),则呈现出一定的治疗作用,即内外核层厚度趋于恢复,视网膜组织整体厚度增加(P<0.05)。 【结论】 (1)60 mg/kg剂量的MNU可引起视网膜功能及形态结构的严重损伤,以此可构建良好的视网膜损伤动物模型;(2)60 mg/kg剂量的MNU作用1 d开始,视网膜功能即出现明显降低;而从第3天开始,视网膜形态结构出现损伤;注射后7 d视网膜功能及形态均受到严重损害,即为建模的适宜观察时间点。(3)经玻璃体腔注射给予MSCs,对MNU诱导的视网膜组织损伤具有一定的治疗作用。