对氧磷酶2148 Ala/Gly基因多态性与冠心病的关系

目的:探讨对氧磷酶(PON)2148Ala/Gly(PON2148Ala/Gly)基因多态性与冠心病(CHD)、血浆PON和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)浓度的关系。方法:采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性方法检测161例CHD患者和72例对照组的PON2148Ala/Gly基因多态性基因型,采用比色法测定血浆PON、SOD活性和MDA浓度。结果:与对照组相比,CHD组的血浆PON活性和SOD活性明显降低[(357.53±145.07)∶(463.99±162.56)μmol·min-1·L-1和(25.08±17.05)∶(42.99±22.82)kU/L],均P<0.01;MDA浓度显著增高[(2.47±0.73)∶(2.13±0.56)μmol/L],P<0.01;CHD患者以PON2148突变纯合子(GG)基因型、杂合子(AG)基因型为主,分别为11.2%、43.5%,与对照组(5.6%、27.8%)比较,P<0.01。CHD组PON2148突变GG和AG基因型的PON活性较野生纯合子(AA)基因型明显降低[分别为(291.00±91.59)、(371.52±154.63)∶(422.68±161.46)μmol·min-1·L-1,P<0.01和P<0.05];Logistic回归分析显示PON2148Ala/Gly基因多态性GG、AG基因型(OR=1.55,95%CI1.13～2.11,P<0.01)和G等位基因携带者(OR=2.03,95%CI1.04～3.97,P<0.05)是CHD的独立危险因子。结论:PON2148Ala/Gly基因多态性的GG、AG基因型和G等位基因携带者是CHD的危险因子,并且这2种基因型患者的血浆PON活性明显降低;CHD患者的血浆PON和SOD活性明显降低,MDA浓度显著增高。     

乳酸杆菌对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样斑块形成抑制作用

目的 研究乳酸杆菌对载脂蛋白E(apoE)基因缺陷小鼠动脉粥样斑块形成的影响,探讨乳酸杆菌抗动脉粥样硬化作用机制.方法 将apoE基因缺陷(ApoE~(-/-))小鼠随机分为4组:对照组(A组)、乳酸杆菌10~8组(B组)、乳酸杆菌10~(10)组(C组)、乳酸杆菌10~(12)(D组).A组喂养正常小鼠饲料(AIN-93),B、C、D组在正常饲料基础上添加10~8,10~(10),10~(12) cfu/mL乳酸杆菌喂养16周,检测动脉粥样斑块面积.结果 乳酸杆菌10~(12),10~(10),10~8 cfu/mL组的主动脉窦动脉粥样斑块面积分别为13.98%,17.36%,21.54%,比对照组的30.51%分别低54.18%,43.10%,29.40%,差异有统计学意义(P<0.05);随着乳酸杆菌浓度增加,主动脉窦动脉粥样斑块面积减少,但乳酸杆菌各组之间动脉粥样斑块面积差异无统计学意义.结论 乳酸杆菌可以抑制ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样斑块形成,具有抗动脉粥样硬化作用.     

甜菜碱对载脂蛋白E~(-/-)小鼠动脉粥样硬化发生过程中铜锌超氧化物岐化酶基因甲基化及表达的影响

目的 检测栽脂蛋白E-/-小鼠动脉粥样硬化发生过程中肝脏铜锌超氧化物岐化酶基因启动子区CpG岛甲基化及其表达状态,探讨甜菜碱对动脉粥样硬化的作用及其可能的机刺.方法 将正常的C57BL/6J小鼠作为正常对照组,同品系载脂蛋白E-/-小鼠分为模型组、1%、2%和4%甜菜碱组.用油红O染色法检测小鼠主动脉窦脂质斑块面积,应用甲基化特异性聚合酶链反应检测肝脏钢锌超氧化物岐化酶基因甲基化,荧光定量逆转录聚合酶链反应检测铜锌超氧化物岐化酶mRNA表达,免疫组织化学检测其蛋白表达.结果 饲养至14周,2%和4%甜菜碱组小鼠主动脉窦脂质斑块面积明显少于模型组(P<0.05);各组铜锌超氧化物岐化酶基因CpG岛甲基化状态差异无显著性(P>0.05);各时间段正常对照组铜锌超氧化物岐化酶mBNA表达均高于模型组,7周时1%甜菜碱组mRNA表达高于2%和4%甜菜碱组,14周时1%甜菜碱组mRNA表达高于模型组和2%甜菜碱组;各时间段正常对照组铜锌超氧化物歧化酶蛋白表迭均高于模型组、1%、2%和4%甜菜碱组(P<0.05),但模型组、1%、2%和4%甜菜碱组间无显著性差异.结论 铜锌超氧化物岐化酶基因可能没有参与动脉粥样硬化过程中DNA甲基化的异常改变,补充甜菜碱可以增加肝脏铜锌超氧化物岐化酶mBNA表达,改善载脂蛋白E>-/-小鼠的脂质沉积,减少主动脉窦粥样斑块面积.     

血瘀证兔模型血管内皮细胞中一氧化氮合酶 的基因表达及其分泌一氧化氮的变化

【目的】了解实验性血瘀证动物模型血管内皮细胞中一氧化氮合酶(NOS)的基因表达及其分泌NO的变化。【方法】用半定量RT-PCR方法检测模型组体内血管内皮细胞及体外培养的细胞中组成型一氧化氮合酶mRNA的表达,并相应测定分泌的NO水平。【结果】与对照组比较,模型组兔体内血管内皮细胞中组成型NOS(cNOS)基因表达以及血浆和原代培养液中NO水平皆明显下降(P＜0.01),同期血浆中NO含量与内皮细胞中cNOSmRNA的表达水平呈正相关(r=0.739,P＜0.01)。两组间体外培养的传代细胞中cNOS基因表达及培养液上清中NO含量无明显差异(P＞0.05),但NO水平都比各自原代培养液中的明显升高(P＜0.01,P＜0.05)。【结论】短期内血瘀证兔模型体内内源性NO水平降低主要是cNOS基因表达下降导致的,随时间的延长,不排除诱导型NOS(iNOS)及体内其他因素对分泌NO的综合影响。     

血瘀证兔血清对培养的血管内皮细胞活性因子基因表达的影响

【目的】探索血瘀证形成和发展过程中血管内皮细胞活性因子内皮素和一氧化氮 (NO)改变的分子机理。【方法】用半定量RT -PCR方法 ,观察血瘀证兔模型血清对体外培养的血管内皮细胞内皮素 (ET)和组成型NO合成酶 (constitutivenitricoxidesynthase ,cNOS)基因表达的影响。【结果】血瘀证动物模型血清导致体外培养的内皮细胞中ET - 1mRNA表达升高 (P <0 .0 1) ,cNOSmRNA表达下降 (P <0 .0 1) ,两者呈显著负相关 (r=- 0 .857,P <0 .0 1)。【结论】血管内皮细胞中ET基因高表达及cNOS基因低表达导致的二者平衡失调在血瘀证形成和发展过程中起着重要作用。     

腹腔热灌注联合化疗治疗恶性腹水46例临床护理

约有1/3的胃肠道、泌尿生殖系统肿瘤患者发生肿瘤腹膜转移或种植,引起恶性腹水,是临床上异常困难的问题,预后差,平均生存期约20周[1]。淋巴管阻塞被认为是恶性腹水形成的主要病理机制,既往的治疗主要为利尿和反复大量腹腔穿刺抽液,新近研究表明,腹腔热灌注联合化疗治疗恶性腹水能取得一定的疗效。2009年6月～2011年4月,我院对46     

乳酸杆菌对载脂蛋白E基因缺陷小鼠胆固醇代谢的影响

目的研究乳酸杆菌对apoE基因缺陷小鼠胆固醇代谢的影响。方法将apoE基因缺陷(ApoE-/-)小鼠随机分为4组:对照组(A组)、乳酸杆菌108cfu/ml组(B组)、乳酸杆菌1010cfu/ml组(C组)、乳酸杆菌1012cfu/ml组(D组)。A组喂养正常小鼠饲料(AIN-93),B、C、D组在正常饲料基础上添加108、1010、1012cfu/ml浓度乳酸杆菌喂养16周,检测小鼠血清、肝脏和主动脉中胆固醇的水平。结果乳酸杆菌可降低血清、肝脏和主动脉中总胆固醇(TC)的含量,提高血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论乳酸杆菌可改善apoE基因缺陷小鼠胆固醇的代谢。     

巢式PCR法构建人细胞色素P4501A1基因cDNA全长T载体

目的构建含限制性内切酶位点KpnI,XhoI的人细胞色素氧化酶(CYP1A1)基因cDNA全长的pGEM -T载体。方法从培养的MCF-7细胞中抽提总RNA并根据人细胞色素P4501A1(CYP1A1,GeneBank NM- 000499)开放阅读框设计两对引物,采用巢式-PCR方法扩增CYP1A1 mRNA全长,凝胶分离并回收扩增的DNA片断,与T载体连接后转化大肠埃希菌DH5α,挑选3个阳性克隆,扩增培养后抽提重组质粒并进行PCR及酶切鉴定, 再行测序分析。结果重组质粒PCR扩增得到1568 bp的片段,KpnI,XhoI限制性内切酶消化质粒证实目的片断成功插入至载体,测序分析也进一步证明了目的片段与GeneBank中CYP1A1 mRNA的序列同源性为99.9%。结论该实验成功地构建了含CYP1A1基因cDNA全长区域的T载体克隆,巢式-PCR是一种简便、特异、灵敏的方法, 可用于基因的检测和载体的构建。     

脂联素对瘦素诱导巨噬细胞TNF-α表达的调节作用及机制

Western印迹方法测定脂联素与瘦素对小鼠巨噬细胞（PM）中p-ERK1／2、p-p38以及p-JNK的表达情况，用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）测定TNF—α mRNA的表达水平，用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养上清中TNF—α蛋白的分泌量。发现脂联素在小鼠PM中通过抑制ERK1／2、p38MAPK信号转导通路而抑制瘦素诱导的TNF—α表达。     

定量PCR在HBV临床研究中的应用

自 198 9年聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术应用于临床检测以来 ,对ＨＢＶ感染的研究提供了一种快速而敏感的有效手段。然而 ,ＰＣＲ临床应用亟待解决不能定量和污染所致的假阳性等问题。随着分子生物学的飞速发展 ,ＰＣＲ检测不仅能定性 ,且也能定量检测 ,从核酸分子杂交到定量ＰＣＲ技术检测ＨＢＶＤＮＡ ,其灵敏度和特异性不断提高。本文就目前几种ＨＢＶＤＮＡ定量检测方法及其临床应用综述如下。1　ＨＢＶＤＮＡ的定量检测方法1 1　斑点杂交法　系一种固相杂交技术。将含有ＨＢＶＤＮＡ的样本点在硝酸纤维膜上 ,再与特异性探针进行杂交 ,经…